應(yīng)用帶有陽離子識別基因的輔助識別聚合物鏈進行蛋白質(zhì)印跡的研究.pdf

1、分子印跡技術(shù)是一種模擬抗體-抗原相互作用的人工生物模板技術(shù),可以針對不同的目的,采用人工合成的方法,構(gòu)建出具有特定選擇性識別位點的印跡聚合物。除了小分子外,蛋白質(zhì)也可以作為印跡的模板。在以前的研究工作中我們提出了一種印跡蛋白質(zhì)的新方法,并且分別引入了帶有羧基和吡啶識別基團的輔助識別聚合物鏈,以克隆蛋白質(zhì)為模板,以能提供大表面積的大孔樹脂為載體,合成蛋白質(zhì)印跡聚合物,用于從細胞提取液中吸附分離天然的目標蛋白質(zhì),有很好的富集效果。

2、在本工作中,我們引入帶陽離子識別基團的輔助識別聚合物鏈,識別基團定為氨基,聚合物主鏈為限長的聚乙烯醇。實驗首先通過乙酸乙烯酯自由基聚合經(jīng)醇解后制得聚合度約為40的聚乙烯醇,然后對聚乙烯醇骨架進行修飾,使其帶上隨機分布的氨基基團和雙鍵基團。然后我們的識別分子再與模板蛋白質(zhì)豬親環(huán)素18(pCyP18)進行自組裝,組裝體通過其上的雙鍵鍵合基團與第二單體丙烯酰胺以聚乙烯醇大孔樹脂球作載體進行交聯(lián)聚合,輔助識別鏈上的氨基作為識別基團與模板蛋白質(zhì)作

3、用。實驗使用500 mM氯化鉀緩沖溶液除去模板蛋白pCyP18和未聚合的識別分子后得到水溶性極好的蛋白質(zhì)印跡樹脂PIPp18,再用此印跡聚合物從細胞提取液中吸附天然微量蛋白質(zhì),顯示出了很好的富集效果。為了證明我們合成的輔助識別聚合物鏈是具有普適性的,我們又以較大分子量的牛血清白蛋白(BSA)為模板,以同樣方法制備了BSA的蛋白質(zhì)印跡樹脂PIPBSA。柱分析結(jié)果表明,我們的輔助識別聚合物鏈對于較大分子量目標蛋白的分離純化也是十分有效的。