幾種疾病特征物質(zhì)的毛細(xì)血管電泳光導(dǎo)纖維發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測方法研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳(CE)是上世紀(jì)80 年代發(fā)展起來的一項(xiàng)重要的分離分析技術(shù)，由于其具有低成本、低消耗、低污染、高靈敏度、高分辨率、高速度等優(yōu)點(diǎn)，符合生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域越來越苛刻的分離分析要求，得到了迅猛的發(fā)展而成為目前強(qiáng)有力的分析技術(shù)之一。在醫(yī)學(xué)中，許多臨床疾病都表現(xiàn)為生命體內(nèi)某些組織的某些特征物質(zhì)發(fā)生異常，因此對這類物質(zhì)的檢測具有重要意義。疾病特征物質(zhì)通常含量很低，且所處的生物基質(zhì)復(fù)雜，對分離分析提出了很高的要求。CE 激光誘導(dǎo)

2、熒光檢測法是目前最靈敏的檢測方法之一，然而由于激光器的成本高、體積大、可選擇的波長少等因素，制約了其發(fā)展和應(yīng)用。 隨著高亮度發(fā)光二極管(LED)的出現(xiàn)和發(fā)展，以LED 作為熒光檢測裝置的激發(fā)光源，可以大大減小體積和降低成本，為CE 的發(fā)展和應(yīng)用提供了更廣闊的前景。 運(yùn)用實(shí)驗(yàn)室自組裝的CE 光導(dǎo)纖維LED 誘導(dǎo)熒光檢測裝置，建立了幾種疾病特征物質(zhì)的分析方法，包括對羥苯乙醇胺(OCT)、犬尿氨酸(Kyn)和絲氨酸(Ser)的

3、檢測，為研究它們在人血漿和鼠腦組織中的含量變化與某些疾病的關(guān)系，提供了有效的分析手段。其主要工作有以下三方面的內(nèi)容： 1. 基于CE分離和光導(dǎo)纖維LED誘導(dǎo)熒光檢測，建立了一種測定OCT的新方法。OCT的柱前衍生采用2,3-萘二醛(NDA)，衍生物的分離和測定由自組裝的CE光導(dǎo)纖維LED誘導(dǎo)熒光檢測系統(tǒng)完成。在背景電解液為25 mmol/L的硼砂緩沖溶液(pH 9.2)中，電壓為20 kV時(shí)獲得了最佳的分離。在確定的最佳條件下，

4、OCT的檢出限(S/N=3)為5.0×10-9 mol/L。OCT的濃度在1.0×10-8~5.0×10-7 mol/L范圍內(nèi)，與熒光強(qiáng)度之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。應(yīng)用該方法測定了人血漿中OCT的含量。該方法具有分析速度快、測定靈敏度高的特點(diǎn)。 2. 建立了CE 光導(dǎo)纖維LED 誘導(dǎo)熒光檢測Kyn 的新方法?？疾炝吮尘半娊赓|(zhì)溶液濃度及其pH 值、有機(jī)添加劑等條件對分離的影響。在確定的最佳條件下，將該方法應(yīng)用于人血漿、鼠腦組織中Ky

5、n 含量的測定。測定的人血漿中Kyn 的含量在1.8~2.4 μmol/L 范圍內(nèi)，其結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致。該方法為相關(guān)疾病的診斷和治療提供了一種有效的分析手段。 3. 運(yùn)用CE 光導(dǎo)纖維LED 誘導(dǎo)熒光檢測裝置，完成了D/L-Ser 的手性分離。采用環(huán)糊精修飾的膠束電動色譜分離模式，考察了十二烷基硫酸鈉濃度、環(huán)糊精濃度和背景電解質(zhì)溶液濃度及其pH 等對D/L-Ser 分離的影響。在優(yōu)化的條件下，采用光導(dǎo)纖維LED 誘導(dǎo)熒光