基于毛細管電泳-發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光的肝病患者血清蛋白質(zhì)檢測分析.pdf

1、肝硬化和原發(fā)性肝癌在疾病早期，患者無明顯特異性癥狀，患者確診時一般已是中晚期，肝硬化、肝癌的早期診斷對疾病的治療尤為重要。血清蛋白質(zhì)含量的差異是肝硬化、肝癌患者區(qū)別于正常人的特征值之一。近年來，毛細管電泳法因其高效分離、快速分析、微量進樣等優(yōu)勢用于蛋白質(zhì)的分離分析已成為研究熱點。毛細管電泳誘導(dǎo)熒光檢測法具有較高的靈敏度，在蛋白質(zhì)檢測方面與紫外吸收檢測相比，它能更準(zhǔn)確的反映血清中蛋白質(zhì)含量的變化。因此，采用毛細管電泳-發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光法

2、對血清蛋白質(zhì)進行檢測，建立正常人、肝硬化和原發(fā)性肝癌患者血清蛋白質(zhì)的毛細管電泳熒光圖譜，對比患者與正常人之間血清蛋白質(zhì)的差異，為臨床上肝病的診斷提供參考。
　　研究目的:
　　1.血清蛋白質(zhì)含量的差異是肝硬化、肝癌患者區(qū)別于正常人的特征值之一。本文使用毛細管電泳-發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測法，對正常人、肝硬化、肝癌患者血清蛋白質(zhì)進行檢測，建立正常人、肝硬化、肝癌血清蛋白質(zhì)毛細管電泳熒光圖譜，對比三者血清蛋白質(zhì)的差異，輔助臨床上肝

3、硬化、肝癌的早期診斷。
　　2.在實驗過程中發(fā)現(xiàn)，所使用的毛細管電泳儀在一些結(jié)構(gòu)上存在缺陷，如廢液池的位置、廢液的排出方式等，這些存在的缺陷會降低檢測結(jié)果的重復(fù)性。因此，為了準(zhǔn)確地檢測血清蛋白質(zhì)，對一些結(jié)構(gòu)進行改進，以提高毛細管電泳儀的重復(fù)性。
　　研究方法:
　　1.毛細管電泳-發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光(CE-LED-IF)檢測方法中，血清蛋白質(zhì)的檢測依賴于結(jié)合在蛋白質(zhì)分子上的FITC熒光基團，因此，首先對FITC標(biāo)準(zhǔn)品進

4、行CE-LED-IF檢測，考察電泳儀檢測結(jié)果的重復(fù)性。研究發(fā)現(xiàn)降低檢測結(jié)果重復(fù)性的原因，通過設(shè)計合理結(jié)構(gòu)來消除影響，提高檢測結(jié)果的重復(fù)性。
　　2.對CE-LED-IF分離檢測血清蛋白質(zhì)的各個影響因素，如光源的選擇、分離毛細管的長度、緩沖液pH值、緩沖液濃度、電泳分離電壓、血清稀釋比例、衍生用FITC與蛋白質(zhì)的質(zhì)量比等進行最優(yōu)化選擇。在最優(yōu)化的電泳條件下，對正常人、肝硬化、肝癌血清進行電泳分離分析，建立正常人、肝硬化、肝癌患者的血

5、清蛋白質(zhì)毛細管電泳熒光圖譜。
　　研究結(jié)果:
　　1.通過重新設(shè)計改進電泳卡槽上廢液池的位置，消除因毛細管兩端高度差帶來的影響。改進前后，分別對2.5×10-3mg/mL FITC進行了10次檢測。改進前，F(xiàn)ITC的遷移時間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)是8.74％和6.57％，而改進后，F(xiàn)ITC的遷移時間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)是1.14％和3.23％，說明改進后的卡槽用于毛細管電泳-LED誘導(dǎo)熒光檢測提高了檢測

6、結(jié)果的重復(fù)性。
　　2.分析比較影響CE-LED-IF檢測血清蛋白質(zhì)的各個影響因素:光源、分離毛細管的長度、緩沖液pH值、緩沖液濃度、電泳分離電壓、血清稀釋比例、衍生用FITC與蛋白質(zhì)的質(zhì)量比，確定CE-LED-IF檢測血清蛋白質(zhì)的最優(yōu)化條件:中心波長470nm的LED作為激發(fā)光源，分離毛細管長度為53cm（有效分離長度50cm），緩沖液pH值為9.6，緩沖液濃度為10mmol/L，電泳分離電壓為20kV，血清稀釋比例為1∶40，

7、衍生用FITC與蛋白質(zhì)的質(zhì)量比為3∶20。
　　3.在最優(yōu)化的電泳條件下，對60例正常人、肝硬化、肝癌患者的血清進行了電泳分離分析，建立了正常人、肝硬化、肝癌患者的血清蛋白質(zhì)毛細管電泳熒光圖譜。肝硬化、肝癌血清蛋白質(zhì)毛細管電泳熒光圖譜中，有區(qū)別于正常人圖譜的特征蛋白質(zhì)峰。
　　研究結(jié)論:
　　1.電泳卡槽的結(jié)構(gòu)改進合理，提高了LED誘導(dǎo)熒光-毛細管電泳檢測的重復(fù)性。
　　2.電泳分離的影響因素，如光源的選擇、分離