蛋白質(zhì)毛細(xì)管電泳在線濃集與分離.pdf

1、毛細(xì)管電泳作為一種常規(guī)的分離技術(shù)已被廣泛應(yīng)用在化學(xué)及生物化學(xué)的各個領(lǐng)域。與其它分離方法(如HPLC)相比，毛細(xì)管電泳具有高效、快速、低耗等優(yōu)點(diǎn)。但是，由于毛細(xì)管內(nèi)徑小，檢測光程短，從而限制了檢測靈敏度的提高。通過樣品濃集的方式增強(qiáng)檢測信號是提高檢測靈敏度的一個非常有效的途徑。本文采用HF對毛細(xì)管柱上的一小段(0.2-0.3 cm)進(jìn)行原位刻蝕，成功地制作了半透性質(zhì)的膜結(jié)構(gòu)，這種膜結(jié)構(gòu)可以使小分子(或離子)通過而大分子(如蛋白質(zhì)分子)不能

2、通過，利用這種性質(zhì)可以對蛋白質(zhì)進(jìn)行在線預(yù)濃集。本文對溶菌酶和牛血清白蛋白進(jìn)行濃集，濃集倍數(shù)分別達(dá)309、182。 毛細(xì)管原位刻蝕而成的膜結(jié)構(gòu)具有使用簡便、無死體積等優(yōu)點(diǎn)。雖然早在1997年，就有人采用HF對毛細(xì)管進(jìn)行原位刻蝕，但由于膜結(jié)構(gòu)非常薄弱在刻蝕過程中以及使用過程中，極易斷裂，因此該技術(shù)并沒有得到廣泛的應(yīng)用。這就需要對刻蝕技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的改進(jìn)。本文中，針對這一問題，對毛細(xì)管刻蝕部分進(jìn)行平板固定，減少了外力對刻蝕部分的影響

3、；并采用堿性電解質(zhì)在毛細(xì)管電通透時抑制HF的進(jìn)一步刻蝕，以防止毛細(xì)管被過度刻蝕，有效地改進(jìn)了毛細(xì)管原位刻蝕制作膜結(jié)構(gòu)的技術(shù)。 蛋白質(zhì)毛細(xì)管電泳中，電滲流和蛋白質(zhì)吸附是影響分離效率以及結(jié)果重現(xiàn)性的兩大因素。本文中采用極端pH和添加劑技術(shù)抑制電滲流和蛋白質(zhì)的吸附，成功地建立了一種以50 mmol/L Tris-H<,3>PO<,4>(pH 2.50)為緩沖溶液，添加了Dextran T-2000的蛋白質(zhì)毛細(xì)管電泳分離體系。實(shí)驗(yàn)表明，