生物大分子毛細(xì)管電泳分離與預(yù)濃集方法研究.pdf

1、核酸和蛋白質(zhì)作為生命科學(xué)中最重要的生物大分子,一直是人們研究的重點(diǎn)。毛細(xì)管電泳以其高效、快速、樣品用量少等特點(diǎn)而成為生命科學(xué)中研究生物大分子的重要分析分離手段。
　　 論文在毛細(xì)管電泳原理、分離模式介紹的基礎(chǔ)上,論述了管壁涂層技術(shù)和毛細(xì)管電泳在線預(yù)濃集技術(shù)的研究進(jìn)展。
　　 針對(duì)蛋白質(zhì)分離的吸附問(wèn)題,用自制的裝置制備了交聯(lián)鍵合型聚丙烯酰胺涂層柱,有效抑制了電滲流和堿性蛋白的吸附,分離柱效達(dá)到105理論塔板數(shù)/米,日內(nèi)重現(xiàn)

2、性和日間重現(xiàn)性均在5％之內(nèi)。在無(wú)膠篩分模式下對(duì)蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物顯示了良好的分離效能。
　　 首次嘗試了利用原位刻蝕的多孔導(dǎo)電膜和非涂敷的石英毛細(xì)管在區(qū)帶電泳模式下對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)樣了濃縮分離。以血漿蛋白為研究對(duì)象,對(duì)富集和分離的條件進(jìn)行了探討,初步實(shí)現(xiàn)了血漿蛋白的濃縮和分離。以峰面積估算經(jīng)300 s在線濃集取得了約120倍的濃縮。
　　 首次將DNA的無(wú)膠篩分與毛細(xì)管電泳多孔導(dǎo)電膜電進(jìn)樣濃縮相結(jié)合,通過(guò)對(duì)富集和分離條件的

3、優(yōu)化,實(shí)現(xiàn)了低濃度DNA樣品片度的濃縮和分離。經(jīng)300 s電進(jìn)樣濃縮取得了10-60倍的濃縮(峰面積),從而使常規(guī)紫外檢測(cè)器(254 nm)的檢測(cè)限降至0.05ng/μL。
　　 毛細(xì)管上的多孔導(dǎo)電膜不僅能夠?qū)ι锎蠓肿拥臉?biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行濃集,而且還能對(duì)成分復(fù)雜的實(shí)際樣品進(jìn)行濃集。與傳統(tǒng)樣品處理方法相結(jié)合,基于多孔導(dǎo)電膜的毛細(xì)管電泳在線濃縮,脫鹽,分離、檢測(cè)一體化的分析系統(tǒng)有可能成為一種實(shí)際樣品中低豐度蛋白和低濃度DNA分析有力手段。