在柱富集二維毛細(xì)管電泳分離方法研究及其應(yīng)用.pdf

1、本論文研究了一種新的電動(dòng)進(jìn)樣掃集/膠束破裂樣品富集雙重在柱富集方法,并將此方法應(yīng)用到二維毛細(xì)管電泳中同時(shí)提高復(fù)雜樣品的靈敏度、分離度及分辨率,此雙重在柱富集二維毛細(xì)管電泳分離方法成功用于益母草樣品的分析富集分離。此外,研究了基于納米金放大技術(shù)的毛細(xì)管電泳富集分離方法用于扇貝中大腸桿菌的分析。全文共分為五章:
　　 第一章前言部分是對(duì)毛細(xì)管電泳技術(shù)的綜述。首先簡(jiǎn)單介紹了毛細(xì)管電泳的基本原理及進(jìn)展情況,列舉了常用的毛細(xì)管電泳分離模式

2、及進(jìn)樣方法:然后介紹了毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法——光學(xué)檢測(cè)和電化學(xué)檢測(cè);隨后介紹了多種提高毛細(xì)管電泳檢測(cè)靈敏度的在線富集技術(shù),包括等速電泳、樣品堆積和掃集技術(shù);最后將二維電泳分離技術(shù)進(jìn)行了說(shuō)明。
　　 第二章,采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳方法對(duì)益母草中八種黃酮類化合物(洋芹素、山奈酚、槲皮素、根皮苷、金絲桃苷、槲皮苷、蘆丁、橙皮素)進(jìn)行研究,考察了影響檢測(cè)和分離的幾個(gè)重要因素:檢測(cè)電位、分離電壓、緩沖體系及其pH值等。結(jié)果發(fā)現(xiàn)磷酸鈉溶液做為緩沖

3、溶液效果最好,最優(yōu)條件是:磷酸鈉緩沖溶液濃度是40 mM,pH為8.5,分離電壓為15 kV,檢測(cè)電位為0.85 V。在這個(gè)條件下八種物質(zhì)在20 min內(nèi)達(dá)到很好的分離效果,檢出限(S/N=3)1.14×10-7-7.85×10-7g/mL。
　　 第三章,采用毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(MEKC)法對(duì)上述益母草中八種黃酮類化合物進(jìn)行研究,考察了緩沖體系及其pn值、進(jìn)樣時(shí)間等重要參數(shù)對(duì)分離的影響。將SDS加入到磷酸鈉溶液做為緩沖溶液效果

4、最好,SDS的最佳濃度是5 mM,磷酸鈉溶液的最佳濃度是90 mM。最佳pH值為7.0,在分離電壓為15 kV,檢測(cè)電位為0.85 v時(shí),使這八種物質(zhì)在實(shí)際樣品中與其它雜質(zhì)峰很好的分離。
　　 第四章研究了一種新的在線的富集二維分離方法,將電動(dòng)進(jìn)樣掃集和膠束破裂樣品堆積雙重富集技術(shù)用于中心切割二維毛細(xì)管電泳中同時(shí)提高復(fù)雜樣品中痕量組分的靈敏度、分離度和分辨率。首先,研究了一種新的電動(dòng)進(jìn)樣掃集富集方法,在進(jìn)行大體積進(jìn)樣的同時(shí)壓縮樣

5、品區(qū)帶,提高檢測(cè)靈敏度。然后,將電動(dòng)進(jìn)樣掃集樣品預(yù)富集技術(shù)用于中心切割二維毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(MEKC)-毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)中。益母草樣品經(jīng)進(jìn)樣預(yù)富集后進(jìn)行MEKC分離,第一維分離后的目標(biāo)組分壓力驅(qū)送到第二維毛細(xì)管中進(jìn)行CZE分離。作為MEKC和CZE聯(lián)用進(jìn)行二維分離的關(guān)鍵,在二維切換過(guò)程中采用膠束破裂樣品富集(AFMC)技術(shù),將膠束結(jié)合的樣品組分釋放出來(lái),同時(shí)克服因流動(dòng)壓力造成的樣品區(qū)帶的擴(kuò)散。在最佳條件下,采用雙重富集技術(shù)使靈

6、敏度提高6000倍。峰高、峰寬和遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別是2.7-4.5％,1.9-4.3%和4.7-6.8%(n=10)。檢出限(S/N=3)為7.3-36.4ng/L,理論塔板數(shù)(N)為1.7-4.3×104 plates/m。該方法成功用于益母草樣品中痕量類黃酮的富集分離檢測(cè)。
　　 第五章采用納米金放大技術(shù)富集毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)分離電化學(xué)(EC)檢測(cè)大腸桿菌(E.coli),用粒徑10 nm的納米金將溶液中的大腸