糖類、氨基酸的毛細管電泳分離研究.pdf

1、毛細管電泳(CE)又稱高效毛細管電泳(HPCE)或毛細管電分離法(CESM)，是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅(qū)動力、依據(jù)樣品各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的高效、高選擇性的新型液相分離分析技術(shù)。該方法具有高效、快速、自動化程度高、試劑消耗少、環(huán)境污染小等優(yōu)點，在十幾年的時間中，特別是在最近幾年，受到分離分析科學家的極大關(guān)注，已成為生物化學和分析化學中最受矚目，發(fā)展最快的分離分析新技術(shù)之一。 糖是自然界和生

2、物體中廣泛存在的物質(zhì)。長期以來人們認為糖的主要功能是提供能量，而新興的糖生物化學研究發(fā)現(xiàn)糖類物質(zhì)除了提供能量外還有其它多方面的生物活性與功能。氨基酸是在生物體內(nèi)構(gòu)成蛋白質(zhì)分子的基本單位，與生物的生命活動有著密切的關(guān)系，它在抗體內(nèi)具有特殊的生理功能，是生物體內(nèi)不可缺少的營養(yǎng)成分之一。氨基酸、糖類是生命有機體的重要組成部分，研究其毛細管電泳分離對生物、醫(yī)藥、食品、衛(wèi)生等領(lǐng)域都具有重要意義。 在糖類和氨基酸的研究領(lǐng)域，由于這些生物分子

3、沒有或者僅有微弱的紫外吸收，直接紫外檢測滿足不了低含量組分測定的要求，化學衍生化法應運而生。目前廣為應用的糖類衍生試劑主要有酰肼類、氨基吡啶類、苯胺類等[2]，氨基酸衍生化試劑主要有鄰苯二甲醛(OPA)、9-芴甲氧羰基氯(FMOC-C1)和5-二甲氨基萘-1-磺酰氯(DNS-C1)等[3]，但是這些衍生試劑本身的一些特性決定了其應用的局限性。為此，本文采用實驗室自行合成的新型衍生化試劑，改變被測化合物的特性，進行了糖類物質(zhì)和氨基酸的毛細

4、管電泳分離，結(jié)果令人滿意。 論文分三章： 第一章 簡單介紹了毛細管電泳的發(fā)展及其在藥物分析、生物分子分離、基因工程研究、臨床醫(yī)學等各方面的應用，詳細介紹了其在糖類、氨基酸分離方面的應用，并對毛細管電泳分離被分析物的策略及其相關(guān)的基礎知識進行了闡述。 第二章 新型衍生試劑1-萘基-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP)用于單糖的毛細管電泳分離，分為四部分。 2.1研究了毛細管區(qū)帶電泳模式下單糖Ni

5、P衍生物的分離情況?？疾觳?yōu)化了單糖NMP衍生物的分離條件，在18min內(nèi)實現(xiàn)了九種單糖衍生物的基線分離，并在此基礎上進行了白刺和蜂花粉實際樣品的測定，獲得的結(jié)果令人滿意。 2.2以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)作為柱前衍生試劑，在毛細管區(qū)帶電泳模式下，考察并優(yōu)化了單糖衍生物的分離條件，實現(xiàn)了九種單糖衍生物的基線分離。 2.3對毛細管區(qū)帶電泳模式下單糖NMP衍生物和PMP衍生物的分離進行了比較與總結(jié)。

6、 通過比較兩種試劑的異同及兩種試劑衍生單糖分離效果的異同得出結(jié)論：NMP衍生單糖在毛細管電泳分離中具有更高的檢測靈敏度。 2.4研究了膠束電動毛細管色譜模式下單糖NMP衍生物的分離情況?？疾觳?yōu)化了單糖NMP衍生物的分離條件，在10分鐘內(nèi)實現(xiàn)了八種單糖衍生物的基線分離。分離快速、簡單，結(jié)果令人滿意。 第三章 2-(11H～苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯(BCEC-Cl)作為柱前衍生試劑用于氨基酸的毛細管電泳分離，分為

7、兩部分。 3.1以2-(11H苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯(BCEC-Cl)作為柱前衍生試劑，在甲酰胺為溶劑，醋酸-醋酸銨為緩沖體系，毛細管柱長58.5 cm(有效長度50 cm)，18℃，30 kV，壓力進樣12s，279nm二極管陣列檢測(DAD)條件下，采用非水毛細管電泳模式考察并優(yōu)化了氨基酸衍生物的分離條件，在不加任何添加劑的情況下實現(xiàn)了16種氨基酸的基線分離。 3.2以2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯(B