天然糖類的高效毛細(xì)管電泳分離分析方法構(gòu)建與應(yīng)用.pdf

1、研究目的：高效毛細(xì)管電泳（HPCE）技術(shù)是20世紀(jì)80年代迅速發(fā)展起來(lái)的一種新型分離分析技術(shù)，具有簡(jiǎn)單、高效、低耗的特性，被認(rèn)為是上世紀(jì)分析技術(shù)領(lǐng)域最具有影響力的分支之一。多糖因其特殊的藥理活性備受人們的關(guān)注，多糖的單糖組成與其活性有著很密切的關(guān)系，其測(cè)定是控制多糖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和提供多糖基本信息的最重要環(huán)節(jié)，顯然，多糖的分離分析技術(shù)對(duì)食物或藥物中糖類水平的質(zhì)控有著重要意義。本文主要目的是建立適合食品中糖類組成的HPCE分析方法，為食品中糖類

2、以及多糖的質(zhì)量控制提供有效的方法。
　　研究方法：以紅棗、澤蘭、蜂蜜、雞樅菇和豬肚菇為材料，采用熱水浸提、乙醇沉淀、透析、反復(fù)凍融除蛋白、冷凍干燥等方法制備粗多糖。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）為還原糖柱前衍生化試劑，在254nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外檢測(cè)，通過(guò)對(duì)硼酸緩沖液濃度、pH、電壓、有機(jī)添加劑等影響因素的研究，建立了13種、11種和10種常見還原糖組成的HPCE分離分析新方法，并應(yīng)用于紅棗多糖、澤蘭多糖、蜂蜜多糖、

3、雞樅菇多糖和豬肚菇多糖的單糖組成測(cè)定，以及蜂蜜、啤酒和牛奶的糖類組成分析，計(jì)算各組分糖的摩爾比值。
　　結(jié)果與結(jié)論：成功構(gòu)建了一種簡(jiǎn)單、高效和高靈敏度的同時(shí)分離13種還原糖（包括己醛糖、戊醛糖以及麥芽糖和乳糖）PMP衍生物的HPCE分析方法，13種還原糖衍生物在175mM硼酸（pH11）緩沖溶液中，4％甲醇添加劑，15kV分離電壓、25℃的優(yōu)化條件下達(dá)到了基線分離。該方法適用于確定澤蘭多糖和紅棗多糖的單糖組成，以及啤酒和牛奶中糖的

4、組成分析。澤蘭多糖由木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸組成，摩爾比為1.40：19.64：1.00：0.78：0.27：3.18：0.60：0.24：1.11。紅棗多糖由阿拉伯糖、葡萄糖、核糖、鼠李糖和半乳糖組成，摩爾比為0.08：1.00：0.43：0.06：0.19。啤酒中含麥芽糖和葡萄糖，摩爾比為2.47：1.00。牛奶中含麥芽糖、乳糖和葡萄糖，摩爾比為9.28：3.48：1.00。樣品回

5、收率為在93.2～104.0％范圍內(nèi)，RSD值在2.9～4.9％之間。該法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確可用于確定還原糖的質(zhì)控，為食品糖類分析提供了更高效的分離。
　　在建立的11種還原糖PMP衍生物的分析中，11種還原糖PMP衍生物在pH為11的175mM硼酸緩沖液、15kV、25℃下得到了良好分離，所測(cè)定的10種蜂蜜中各種糖的摩爾比均不同，天然蜂蜜中所含還原糖的種類和商品蜂蜜也有差別。本法靈敏度高、成本低，為測(cè)定蜂蜜中的多種糖提供了一種高效快速的

6、方法。
　　建立了20min內(nèi)快速分離10種常見單糖的CE分析方法，10種單糖PMP衍生物在pH11、175mM硼酸緩沖液中，分離電壓20kV、25℃下達(dá)到快速分離。對(duì)比之前的實(shí)驗(yàn)可知，提高分離電壓可以很大程度上提高分離效率。雞樅菇多糖由木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖和葡萄糖醛酸組成，摩爾比為0.72：1.00：21.69：1.66：26.25：0.72。豬肚菇多糖由木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、巖藻糖、甘露糖和葡萄糖醛