氨基酸和藥物的毛細(xì)管電泳手性分離新體系研究.pdf

1、手性物質(zhì)對(duì)映體在人類的生命過(guò)程中具有重要的作用，很多與人類生命息息相關(guān)的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸以及手性藥物等均具有一個(gè)或多個(gè)手性中心。不同對(duì)映異構(gòu)體的光學(xué)活性和立體構(gòu)象不同，而在生命體內(nèi)表現(xiàn)出不同的生理活性和藥理活性。因此，對(duì)映體的手性分離在生命科學(xué)及其它相關(guān)領(lǐng)域均具有重要的意義。 毛細(xì)管電泳（CE）手性分離是分析化學(xué)領(lǐng)域重要的研究課題之一。在手性分離中，CE具有高效、快速、易自動(dòng)化、操作模式多、試劑及樣品用量少等優(yōu)點(diǎn)，目

2、前已發(fā)展成為一種重要的分離分析技術(shù)，在生物、化學(xué)、醫(yī)藥、環(huán)保和食品等領(lǐng)域中得到了廣泛應(yīng)用。 本論文采用CE技術(shù)，對(duì)氨基酸、手性藥物青霉胺和磷酸苯丙派林對(duì)映體的手性分離進(jìn)行了詳細(xì)研究，分別建立了氨基酸、青霉胺和磷酸苯丙派林對(duì)映體的CE手性分離新體系。論文的主要研究?jī)?nèi)容包括以下四部分： 1. 建立了一種CE手性分離青霉胺對(duì)映體的新方法，以磺化-β-環(huán)糊精（S-β-CD）為手性選擇劑，采用CE技術(shù)對(duì)2，4-二硝基氯苯衍生的青霉

3、胺對(duì)映體的手性分離進(jìn)行了詳細(xì)研究。確定的最佳分離條件為：電泳緩沖液的組成為25 mmol/L S-β-CD，50 mmol/L硼砂（pH 9.5）；毛細(xì)管柱溫為20 ℃；分離電壓為20 kV。并考察了在大量D-青霉胺存在下，測(cè)定微量L-青霉胺的可能性。當(dāng)D-青霉胺中，L-青霉胺的含量在0.3～2.0﹪范圍內(nèi)時(shí)，其濃度與吸光度之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R＝0.9995)，應(yīng)用該法對(duì)市售的D-青霉胺藥片進(jìn)行光學(xué)純度分析，測(cè)得其光學(xué)純度大于99

4、.7﹪。 2. 建立了一種采用CE技術(shù)，手性分離磷酸苯丙哌林對(duì)映體的新方法。以10 mmol/L羥丙基-γ-環(huán)糊精（HP-γ-CD）為手性選擇劑，在100 mmol/L Tris-H3PO4（pH 3.0）緩沖溶液中，對(duì)磷酸苯丙哌林對(duì)映體的手性分離進(jìn)行了研究，25 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了基線分離, 分離度達(dá)2.03。并考察了該方法的檢測(cè)限和線性范圍，發(fā)現(xiàn)磷酸苯丙哌林對(duì)映體的濃度在0.5～10 mg/L范圍內(nèi)與吸光度之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系

5、。將其應(yīng)用于血清樣品分析，獲得了滿意的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)還嘗試采用場(chǎng)放大堆積方法，對(duì)磷酸苯丙哌林對(duì)映體進(jìn)行在柱富集，使磷酸苯丙哌林對(duì)映體的檢測(cè)靈敏度提高了23倍。 3. 以新型手性表面活性劑馬來(lái)海松酸三鈉（SFPA）為手性選擇劑，采用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MECC）技術(shù)，對(duì)萘-2，3-二甲醛（NDA）衍生氨基酸對(duì)映體的手性分離進(jìn)行了詳細(xì)研究。分別考察了緩沖溶液的類型、濃度和pH值，SFPA濃度以及毛細(xì)管柱溫、分離電壓和毛細(xì)管有效長(zhǎng)度等因素

6、對(duì)手性分離的影響，確立了最佳的分離條件。發(fā)現(xiàn)在選擇的最佳條件下，色氨酸（Trp）和犬尿氨酸（Kyn）均得到了基線分離，而4-甲基-苯丙氨酸（4-M- Phe ）、苯丙氨酸（Phe）、精氨酸（Arg）和β-苯丙氨酸（β-Phe）也得到不同程度的分離。增長(zhǎng)毛細(xì)管有效長(zhǎng)度時(shí)，后四種氨基酸的分離度有所增加，但依然沒(méi)有實(shí)現(xiàn)基線分離。實(shí)驗(yàn)還進(jìn)一步考察了采用此法測(cè)定DL- Trp、DL-Kyn對(duì)映體純度的可能性，表明該法可以應(yīng)用于對(duì)映體雜質(zhì)大于2﹪的

7、光學(xué)純度檢驗(yàn)。 4. 以新型手性表面活性劑2-[(3-脫氫松香酰胺丙基)二甲氨基]-1-乙磺酸鹽（DPDA-ES）為手性選擇劑，采用MECC技術(shù)，對(duì)NDA衍生氨基酸對(duì)映體的手性分離進(jìn)行了詳細(xì)研究。分別考察了DPDA-ES的濃度，緩沖液的類型、pH值及濃度，毛細(xì)管柱溫、分離電壓和毛細(xì)管有效長(zhǎng)度等因素對(duì)手性分離的影響。在優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)條件后，當(dāng)毛細(xì)管有效長(zhǎng)度為50 cm時(shí)，β-Phe、 Trp 和Kyn對(duì)映體得到了基線的分離，分離度分別