毛細(xì)管電泳中氨基酸、二肽類BCEOC衍生物的手性拆分.pdf

1、毛細(xì)管電泳是近年來(lái)迅速發(fā)展起來(lái)的一類分離分析技術(shù)，它具有高效、快速、樣品用量少等特點(diǎn)，能用于多種化合物的分離，如氨基酸、手性藥物、維生素、殺蟲劑、無(wú)機(jī)離子、有機(jī)酸、染料、肽和蛋白質(zhì)、甚至整個(gè)細(xì)胞和病毒顆粒。被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、生物技術(shù)、醫(yī)學(xué)藥物、環(huán)境科學(xué)、法醫(yī)科學(xué)等諸多領(lǐng)域。 在手性拆分方面，毛細(xì)管電泳作為一種強(qiáng)有力的手性分離技術(shù)，已經(jīng)成功的分離了多種類的手性物質(zhì)，尤其在氨基酸、肽的衍生物以及藥物的手性分離領(lǐng)域應(yīng)用最廣，顯示了

2、其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。此外，電泳的方法開(kāi)發(fā)較為簡(jiǎn)單，具有多種靈活變換的分離模式，樣品用量少，而且?guī)缀鯖](méi)有有機(jī)廢液。 在氨基酸和二肽類物質(zhì)的手性拆分研究領(lǐng)域，由于這些生物分子沒(méi)有或者僅有微弱的紫外吸收，直接紫外檢測(cè)滿足不了低含量組分測(cè)定的要求，化學(xué)衍生化法應(yīng)運(yùn)而生。目前廣為應(yīng)用的衍生化試劑主要有鄰苯二甲醛(OPA)、9-芴甲氧羰基氯(FMOC-Cl)和6-氨基喹啉基琥珀酰亞胺碳酸酯(AQC)。但是這些衍生試劑本身的一些特性決定了其應(yīng)用的局

3、限性。為此，本研究采用新型衍生化試劑，改變被測(cè)化合物特性，進(jìn)行了毛細(xì)管電泳的氨基酸和二肽對(duì)映體的手性拆分，結(jié)果令人滿意。論文分三章： 第一章： 簡(jiǎn)單介紹了毛細(xì)管電泳的發(fā)展及其在醫(yī)學(xué)藥物、生命科學(xué)、生物技術(shù)、法醫(yī)科學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用情況。對(duì)手性拆分的意義和毛細(xì)管電泳手性拆分相關(guān)的基礎(chǔ)知識(shí)進(jìn)行了簡(jiǎn)述。綜述了毛細(xì)管電泳用于手性拆分的研究現(xiàn)狀。 第二章： 1，2-苯并-3，4-二氫咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)

4、用于氨基酸毛細(xì)管電泳手性拆分，包括三部分。 2.1研究了毛細(xì)管區(qū)帶電泳模式下氨基酸BCEOC衍生物的手性拆分情況。在毛細(xì)管區(qū)帶電泳模式下，考察并優(yōu)化了氨基酸BCEOC衍生物的手性分離條件，在15min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了七種單一氨基酸衍生物的對(duì)映體的基線分離，分離度均在1.2以上。所建立的方法簡(jiǎn)單、快速，拆分環(huán)境友好，獲得的結(jié)果較為滿意。 2.2采用毛細(xì)管電泳膠束電動(dòng)色譜模式下實(shí)現(xiàn)了13種BCEOC-氨基酸衍生物的手性拆分，拆分環(huán)境

5、友好，獲得結(jié)果滿意。通過(guò)對(duì)緩沖溶液的濃度和pH值、膠束濃度、有機(jī)添加劑、電壓溫度等參數(shù)的選擇，得出了最佳的拆分條件，所有衍生物的手性分離度均在1.0以上。所建立的方法簡(jiǎn)單、快速。 2.3進(jìn)行了毛細(xì)管區(qū)帶電泳和膠束電動(dòng)色譜模式下氨基酸衍生物的手性拆分的比較與總結(jié)。通過(guò)比較毛細(xì)管區(qū)帶電泳和膠束電動(dòng)色譜兩種分離模式的異同點(diǎn)和兩種模式下氨基酸BCEOC衍生物的手性拆分的異同點(diǎn)，可以得出結(jié)論：膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜模式下氨基酸對(duì)映體的分離度較

6、高，手性拆分效果要好。 第三章： 1，2-苯并-3，4-二氫咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)用于二肽毛細(xì)管電泳手性拆分，包括三部分。 3.1在毛細(xì)管區(qū)帶電泳模式下對(duì)二肽BCEOC衍生物進(jìn)行了手性拆分。通過(guò)對(duì)拆分條件的優(yōu)化，得到最佳的手性拆分條件：60mmol/L三(羥甲基)胺基甲烷/磷酸(Tris-H3PO4)鹽緩沖溶液(含3％乙腈)，手性添加劑濃度分別為1.8mmol/Lβ-CD和2.4mmol/LSDC，

7、pH值為9.0，分離電壓15kV，柱溫為25℃。在最優(yōu)化的分離條件下，八種二肽衍生物均在15min內(nèi)出峰完畢，結(jié)果理想。 3.2研究了毛細(xì)管電泳膠束電動(dòng)色譜模式下二肽BCEOC衍生物的手性拆分情況。通過(guò)對(duì)拆分條件的選擇和優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了15種二肽BCEOC衍生物的手性拆分，拆分環(huán)境友好，獲得結(jié)果滿意。所有衍生物的手性分離度在2.85(Gly-Trp)～35.29(Gly-Ser)之間。實(shí)驗(yàn)建立的方法簡(jiǎn)單快速，為以后進(jìn)一步進(jìn)行肽類物質(zhì)