簡介：點(diǎn)擊查看更多2018年臨床助理醫(yī)師生物化學(xué)考試大綱精彩內(nèi)容。

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簡介：內(nèi)容概要,2肝膽疾病的肝功能實(shí)驗(yàn)室檢查,1常見生物化學(xué)指標(biāo)的臨床意義,4抽血注意事項(xiàng),3胰腺炎的生物化學(xué)診斷,AST天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST廣泛存在于多器官中，含量多少依次為心肝骨骼肌腎，肝中70存在于線粒體中。AST有兩種同工酶ASTS和ASTM，分別存在于可溶性細(xì)胞質(zhì)和線粒體。,ALT（谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）主要存在于肝細(xì)胞中，主要用于肝臟疾病的診斷。,3,ΓGT（Γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶）組織中腎臟含量最多，但是血中的ΓGT主要來自肝臟。飲酒時(shí)由于乙醇對(duì)肝細(xì)胞線粒體的誘導(dǎo)導(dǎo)致ΓGT活性增高。ALP（堿性磷酸酶）是一種含鋅的糖蛋白，含量以肝臟最多，其次為腎臟、胎盤、小腸、骨骼。,4,TPALBA/G（總蛋白白蛋白白蛋白/球蛋白）肝臟的儲(chǔ)備能力及蛋白質(zhì)的半衰期相對(duì)較長，故在急性肝損傷時(shí)，血漿蛋白質(zhì)濃度變化不大；在慢性肝病時(shí)血漿清蛋白合成減少，球蛋白升高，出現(xiàn)A/G比例降低甚至倒置。球蛋白增高因抗原刺激肝外網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，并誘發(fā)免疫反應(yīng)所致。,AFU（ΑL巖藻糖苷酶）是一種溶酶體酸性水解酶，AFU在診斷肝細(xì)胞癌中敏感性好，陽性率高，是AFP陽性率的三倍以上，對(duì)AFP陰性病例及小細(xì)胞肝癌的診斷價(jià)值極大，是早期原發(fā)性肝癌診斷的有用指標(biāo)。AFU診斷的敏感性好，而特異性較AFP低。,未結(jié)合膽紅素（UNCONJUGATEDBILIRUBIN,UCB）即間接膽紅素未經(jīng)肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化處理的膽紅素，包括游離膽紅素、血中與蛋白質(zhì)結(jié)合的膽紅素、Δ膽紅素；具親脂疏水的性質(zhì)。結(jié)合膽紅素（CONJUGATEDBILIRUBIN,CB）即直接膽紅素在肝細(xì)胞內(nèi)經(jīng)過生物轉(zhuǎn)化與葡萄糖醛酸、硫酸結(jié)合而形成的膽紅素；具親水疏脂的性質(zhì)。,膽汁中的膽紅素絕大多數(shù)為結(jié)合膽紅素血液中的膽紅素絕大多數(shù)為未結(jié)合膽紅素,,膽紅素的來源,膽紅素BILIRUBIN的生成與轉(zhuǎn)運(yùn),,,膽紅素BILIRUBIN,1）衰老紅細(xì)胞破壞、降解,2）無效紅細(xì)胞生成,3）其他含血紅素輔基的蛋白質(zhì)分解,分流膽紅素（20）,主流膽紅素（80）,膽紅素在肝細(xì)胞中的代謝過程攝取、結(jié)合轉(zhuǎn)化排泄攝取、結(jié)合,,,,,清蛋白,載體蛋白,膽紅素Y蛋白,膽紅素Z蛋白,膽紅素清蛋白,受體蛋白,,,膽紅素?cái)z取的有效性取決于,肝細(xì)胞膜上特異的受體蛋白,肝細(xì)胞內(nèi)載體蛋白,（次要）,,轉(zhuǎn)化（滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）,,UGT,葡萄糖醛酸膽紅素,膽紅素BILIRUBIN,結(jié)合膽紅素（CB）直接膽紅素DIRECTBILIRUBIN,意義即起到解毒作用，又可使其從膽汁中排出。,,膽紅素在腸中的變化及膽素原的腸肝循環(huán),,80～90,膽素（糞排）,10～20,門V,肝,體循環(huán),,腎（尿膽素原）,,尿膽素（尿排）,,膽汁,,,,,5,結(jié)合膽紅素（CB）,,細(xì)菌Β葡萄糖醛酸苷酶,,GA,未結(jié)合膽紅素（UCB）,,細(xì)菌（還原）,中膽素原糞膽素原尿膽素原,,,,腸道,95,隱性黃疸TB171～342ΜMOL/L顯性黃疸TB342ΜMOL/L,黃疸的定義黃疸（JAUNDICE）指由于膽紅素代謝障礙，血漿中膽紅素含量增高，膽紅素進(jìn)入組織，引起皮膚、鞏膜、黏膜等組織黃染的一種病理變化和臨床表現(xiàn)。,,正常血清總膽紅素（TB）未結(jié)合膽紅素（UCB）少量結(jié)合膽紅素（CB）正常值TB171～171ΜMOL/LDB0～342ΜMOL/L,尿液膽紅素陰性膽素原陽性,糞便棕黃色,膽紅素形成過多血中以未結(jié)合膽紅素的升高為主。肝細(xì)胞處理膽紅素的能力下降兩種膽紅素均可升高。膽紅素在肝外的排泄障礙，逆流入血血中以結(jié)合膽紅素的升高為主。,黃疸的成因,肝細(xì)胞性黃疸和梗阻性黃疸的實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷,,項(xiàng)目肝細(xì)胞性黃疸梗阻性黃疸血清蛋白電泳圖譜ALB減少，Γ球蛋白↑球蛋白明顯↑血清酶學(xué)ALT肝炎急性期↑正?；蛟龈逜ST明顯升高正?；蛟龈逜LP正?；蜉p度增高明顯升高ΓGT可增高明顯升高其他方面凝血酶原時(shí)間延長，VITK不能糾正延長，VITK可以糾正膽固醇降低，尤其CHE明顯降低增高CA/CDCA﹤1﹥1,,,膽汁酸（TBA）,膽汁酸膽汁中存在的一類膽烷酸的總稱。,初級(jí)膽汁酸脫去7?OH即為次級(jí)膽汁酸。膽汁中的膽汁酸以結(jié)合型為主，以鈉鹽或鉀鹽形式存在。,膽汁酸的分類按來源、結(jié)構(gòu)及結(jié)合與否,（1）肝細(xì)胞僅有輕微壞死時(shí)TBA就開始增高。TBA20ΜMOL/L考慮慢性活動(dòng)性肝炎TBA30ΜMOL/L肝硬化可能性比較大（2）CA/CDCA（膽酸/鵝脫氧膽酸比值可作為膽道梗阻性病變和肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞性病變的鑒別指標(biāo)。比值＞１，見于膽道梗阻性病變；比值400ΜG/L作為肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)。AFP可對(duì)原發(fā)性肝癌進(jìn)行鑒別診斷，陽性率在70％～80％。AFU原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)志物，與AFP聯(lián)合檢測可使陽性率達(dá)90％左右。,ALPALTΓGT5’NTAST急性肝炎↑↑↑↑↑↑↑↑酒精性肝炎N/↑↑↑↑↑↑↑慢性肝細(xì)胞疾病N/↑↑N/↑N/↑↑肝硬化N/↑N/↑N/↑N/↑↑↑↑肝腫瘤↑↑↑膽汁郁積↑↑↑↑↑↑,肝病的臨床酶學(xué)檢查,,,,通常ALP值大于正常值的25倍，ALT不超過正常值的10倍，90的病例為膽汁淤積，反之90為肝細(xì)胞損傷。,注意點(diǎn)急性重癥肝炎病程初期轉(zhuǎn)氨酶升高，以AST升高顯著。如在癥狀惡化時(shí)，黃疸進(jìn)行性加深，酶活性反而降低，即出現(xiàn)“膽酶分離”現(xiàn)象，提示肝細(xì)胞嚴(yán)重壞死，預(yù)后不佳。,實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的合理組合1反映肝細(xì)胞損傷狀況的項(xiàng)目組合如AST、ALT等。2反映肝細(xì)胞合成功能的項(xiàng)目組合如CHE、ALB等。3輔助判斷肝臟有無腫瘤等情況的項(xiàng)目組合如AFP、AFU等。4反映肝臟的排泄功能的項(xiàng)目組合如TBIL、TBA測定。,肝功能實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià),肝臟有其特殊的代謝特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的局限性肝臟生理、生化功能復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目繁多，表現(xiàn)的結(jié)果存在差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不靈敏性肝臟具有強(qiáng)大的儲(chǔ)備、代償和再生能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確性肝功能試驗(yàn)的結(jié)果亦受實(shí)驗(yàn)技術(shù)、實(shí)驗(yàn)設(shè)備、試劑質(zhì)量及操作人員的技術(shù)熟練程度等多種因素的影響。,

簡介：肝功能檢驗(yàn),,黃疸,,皮膚蜘蛛痣SKINSPIDER肝掌LIVERPALMS面部色素沉著FACEPIGMENTATION,肝功能受損,腹水,肝病面容,本章內(nèi)容概要,第一節(jié)肝功能概述第二節(jié)常用肝功能實(shí)驗(yàn)第三節(jié)常見肝膽疾病生化指標(biāo)變化第四節(jié)病例討論,掌握肝功能試驗(yàn)的意義及評(píng)價(jià)，賴氏法、速率法測定ALT，改良JG法和膽紅素氧化酶法測定膽紅素的原理、注意事項(xiàng)及主要臨床意義。熟悉速率法測定ALP，GGT測定方法、注意事項(xiàng)及主要臨床意義。了解肝臟的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及生物化學(xué)功能，某些肝病的生物化學(xué)。,本章教學(xué)要求,第一節(jié)概述,肝臟的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)肝臟的生物化學(xué)功能肝臟疾病的代謝紊亂肝功能試驗(yàn)的分類,,一、肝臟結(jié)構(gòu),（一）解剖學(xué)特點(diǎn),雙重血液供應(yīng),,腹主動(dòng)脈的分技肝動(dòng)脈,氧,門靜脈,營養(yǎng),,,雙重輸出管道,肝靜脈,代謝降解物,下腔靜脈,膽道系統(tǒng),脂溶性物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物,體外,,,,（二）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點(diǎn),（三）肝細(xì)胞的再生,新生肝細(xì)胞的來源①由已分化的肝細(xì)胞增殖而來②由未分化的小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分裂而來,①細(xì)胞表面有大量的微絨毛②細(xì)胞膜具有較高的通透性③肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富④肝細(xì)胞含有豐富的酶系,二、肝臟的生物化學(xué)功能,排泄功能物質(zhì)代謝功能生物轉(zhuǎn)化,,重要生化功能,三、肝膽疾病的代謝紊亂,（一）蛋白質(zhì)代謝異常急性肝損害時(shí)，血漿蛋白質(zhì)濃度變化不大；慢性肝病時(shí)血漿清蛋白降低，Γ球蛋白升高，出現(xiàn)清蛋白與球蛋白（A/G）的比值降低，甚至倒置。血漿尿素水平呈低值。血氨增高。支鏈氨基酸和芳香族氨基酸的比值下降。,12,磷酸戊糖途徑和糖酵解途徑相對(duì)增強(qiáng)，血中丙酮酸含量可顯著上升嚴(yán)重肝病時(shí)糖有氧氧化及三羧酸循環(huán)運(yùn)轉(zhuǎn)失常血糖濃度難以維持正常水平糖耐糖曲線異常，可呈低平型、高峰型、高坡型等異常曲線血清半乳糖濃度增高,（二）糖代謝異常,13,（三）脂類代謝異常,脂類消化吸收不良肝內(nèi)脂肪氧化分解降低或脂肪合成增多或磷脂合成障礙，不能有效合成脂蛋白輸出，脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)沉積而形成脂肪肝糖代謝異常，脂肪動(dòng)員增加，導(dǎo)致酮血癥血漿膽固醇酯/膽固醇的比值下降血漿脂蛋白電泳譜異常，出現(xiàn)低密度脂蛋白（LDL）積累可出現(xiàn)異常的脂蛋白X（LPX）,14,（四）膽紅素代謝紊亂,1膽紅素BILIRUBIN來源與生成體內(nèi)的鐵卟啉化合物血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素、過氧化氫酶及過氧化物酶。,膽紅素來源,,1）衰老的RBC破壞、降解,2）無效紅細(xì)胞生成,3）非血紅蛋白的血紅素蛋白質(zhì)（細(xì)胞色素、過氧化物酶、肌紅蛋白等）分解,,主流膽紅素（80）,,分流膽紅素（20）,15,衰老的RBC,網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng),,肝、脾、骨髓（微粒體、胞液）,HB,珠蛋白,,血紅素,氨基酸,,膽綠素,CO和鐵,,,血紅素加單氧酶,O2、NADPH,膽紅素ⅨA,,膽綠素還原酶,膽紅素的性質(zhì)親脂疏水，對(duì)大腦具有毒性作用,16,2．膽紅素轉(zhuǎn)運(yùn),,膽紅素－清蛋白復(fù)合體（主要）,膽紅素－Α1球蛋白（少部分）,運(yùn)輸形式,競爭結(jié)合劑如磺胺藥，水楊酸，膽汁酸等,,,意義,增加膽紅素在血漿中的溶解度，便于運(yùn)輸。,限制膽紅素自由通過生物膜產(chǎn)生毒性作用,17,3膽紅素在肝細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變,,1）攝取膽紅素可以自由雙向通透肝血竇肝細(xì)胞膜表面進(jìn)入肝細(xì)胞。,肝細(xì)胞攝取膽紅素的有效性取決于,,肝細(xì)胞膜上特異的載體蛋白,肝細(xì)胞內(nèi)兩種受體蛋白Y蛋白和Z蛋白,以“膽紅素－Y蛋白”膽紅素－Z蛋白形式送至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。這是一個(gè)耗能的可逆的過程。,肝內(nèi)運(yùn)輸,,18,2）轉(zhuǎn)化,部位滑面內(nèi)網(wǎng)質(zhì)反應(yīng)結(jié)合反應(yīng)（主要結(jié)合物為UDPGA）酶葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶。產(chǎn)物主要為雙葡萄糖醛酸膽紅素，另有少量單葡萄糖醛酸膽紅素、硫酸膽紅素，統(tǒng)稱為結(jié)合膽紅素。目的既有利于膽紅素隨膽汁排泄，又限制其通過生物膜而起到解毒作用。,19,3）排泄,結(jié)合膽紅素通過毛細(xì)膽管膜上的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)載體，從肝細(xì)胞毛細(xì)膽管排泄入膽汁中，再隨膽汁排入腸道。轉(zhuǎn)運(yùn)形式逆濃度梯度的能量依賴的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程。,20,結(jié)合膽紅素與未結(jié)合膽紅素的區(qū)別,未結(jié)合膽紅素,結(jié)合膽紅素,別名,間接膽紅素,直接膽紅素,與葡萄糖醛酸結(jié)合,未結(jié)合,結(jié)合,與重氮試劑反應(yīng),慢或間接反應(yīng),迅速、直接反應(yīng),溶解度,小,大,經(jīng)腎隨尿排出,不能,能,細(xì)胞毒作用,大,無,,,21,4膽紅素在腸管中的變化及其腸肝循環(huán),結(jié)合膽紅素,膽素原,,Β葡萄糖醛酸苷酶,,葡萄糖醛酸,,還原,膽素,,氧化,﹡膽素原中膽素原，糞膽素原，D尿膽素原,﹡膽素I尿膽素，糞膽素，D尿膽素,游離膽紅素,22,膽素原的腸肝循環(huán),膽素原腸肝循環(huán)的概念腸道中有少量的膽素原可被腸粘膜細(xì)胞重吸收，經(jīng)門靜脈入肝，其中大部分再隨膽汁排入腸道，形成膽素原的腸肝循環(huán)BILINOGENENTEROHEPATICCIRCULATION。,23,膽素原腸肝循環(huán)的過程,（10～20）,2～5,24,5膽紅素代謝紊亂與黃疸,1）黃疸的概念凡能引起膽紅素生成過多、或肝細(xì)胞對(duì)膽紅素的攝取、結(jié)合和排泄過程發(fā)生障礙等因素均可使血中膽紅素增高，而出現(xiàn)高膽紅素血癥HYPERBILIRUBINEMIA。膽紅素是金黃色色素，當(dāng)血清中濃度高時(shí)，則可擴(kuò)散入組織，組織被染黃，稱為黃疸（JAUNDICE）。隱性黃疸400ΜG/L作為肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn),【臨床意義】,,酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫分析法等,1原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)血清AFP測定值超過400ΜG/L400NG/ML；2活動(dòng)性急、慢性肝炎、肝硬化或其它肝病病人的診斷．,（四）其它,【臨床意義】肝豆?fàn)詈俗冃裕╓ILSON?。┖瓦z傳性色素沉積癥．,1銅藍(lán)蛋白測定,【參考范圍】529～1677IU/L,【原理】銅藍(lán)蛋白具有氧化酶活性,二血清氨基轉(zhuǎn)移酶測定,氨基轉(zhuǎn)移酶測定方法,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALANINEAMINOTRANSFERASE，ALT天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ASPARTATEAMINOTRANSFERASE，AST,酶聯(lián)紫外連續(xù)監(jiān)測法二硝基苯肼比色法,方法,酶,（一）酶聯(lián)紫外連續(xù)監(jiān)測法,ALT和AST測定的參考方法,NADH在340NM處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測NADH消耗引起的340NM吸光度變化,根據(jù)340NM處吸光度下降速率（－△A/MIN）計(jì)算ALT活性。,原理,,,計(jì)算,注意事項(xiàng),1該ALT測定法中存在兩個(gè)消耗NADH的副反應(yīng)2試劑空白測定值的處理3樣本選擇和處理,方法評(píng)價(jià),1特異性高2準(zhǔn)確性高3精密度高,參考范圍,5～40U/L或參考試劑盒提供的參考范圍,（二）二硝基苯肼比色法,原理,二、氨基轉(zhuǎn)移酶測定的意義,肝細(xì)胞中含量最多，其次是腎臟和心臟，通常只有極少量釋放入血液，所以血清中此酶的活力很低，當(dāng)這些組織病變時(shí)，細(xì)胞壞死或通透性增加，細(xì)胞內(nèi)酶大量釋放入血，使血清中該酶活力顯著增高,1血清ALT活性增高,肝膽疾病骨骼肌疾病一些藥物和毒物可引起ALT活性升高,2．血清AST活性增高,心血管疾病各種肝病均可引起血清AST的升高,三血清堿性磷酸酶測定,一、測定方法簡介,一組非特異性的在堿性條件下水解磷酸酯的酶類,底物,Β甘油磷酸鈉磷酸苯二鈉對(duì)硝基酚磷酸鹽酸酚酞Α萘酚磷酸鹽4甲基傘形花內(nèi)酯酰磷酸鹽,堿性磷酸酶,測定方法,（一）測定水解釋放的無機(jī)磷,鮑氏（BODANSKY）法,（二）測定底物水解后的羥基化合物,1羥基化合物需與顯色劑作用后比色測定,金氏（KING）法,2羥基化合物在堿性條件下直接顯色測定,對(duì)硝基酚磷酸鹽（PNITROPHENYLPHOSPHATE,4NPP）法,速率法測定血清堿性磷酸酶,原理,以對(duì)硝基苯酚磷酸鈉（4NPP）為底物，AMP或二乙醇胺（DEA）為磷酸酰基的受體。在堿性條件下，ALP催化4NPP水解釋放出磷酸基團(tuán)，生成游離對(duì)硝基酚（PNITROPHENOL,4NP），4NP在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。根據(jù)405NM處吸光度增加的速率（△A/MIN）推算出清ALP活性單位。,,計(jì)算,參考范圍,40～160U/L（37℃）,靈敏度高、線性范圍寬（500U/L以上）和精密度高,方法評(píng)價(jià),二、堿性磷酸酶測定的意義,分布廣泛存在于各器官組織中，尤以肝臟、骨骼、小腸和腎臟含量較高，血清中ALP主要來自肝臟和骨骼,病理性增高肝膽疾病阻塞性黃疸、急性或慢性黃疸型肝炎、肝癌骨骼疾病佝僂病、骨軟化病、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修復(fù)愈合期,生理性增高妊娠期與兒童生長發(fā)育期,四血清Γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測定,一、測定方法簡介,Γ谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶（ΓGLUTAMYLTRANSFERASE，GGT,（一）重氮比色法,（二）速率法,測定方法,速率法測定血清Γ谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶,GGT催化Γ谷氨?；茡Q反應(yīng)。以LΓ谷氨酰3羧基4硝基苯胺為底物，雙甘肽為谷氨酰基的受體，在GGT的催化下，谷氨?；D(zhuǎn)移到雙甘肽分子上，同時(shí)釋放出黃色的2硝基5氨基苯甲酸，根據(jù)405NM處吸光度增加的速率（△A/MIN）推算出GGT活性單位,,原理,計(jì)算,參考范圍男性11～50U/L（37℃），女性7～32U/L（37℃）,方法評(píng)價(jià),本法準(zhǔn)確度好；精密度好線性范圍寬（460U/L）；操作簡便；但對(duì)試劑純度要求高,二、Γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測定的意義,分布腎最高，其次是前列腺、胰、肝等器官,尿中GGT活性,可能有助于診斷腎疾病,血清GGT用于診斷肝膽疾病,1原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌2阻塞性黃疸3病毒性肝炎和肝硬化4乙醇性肝炎,五血清膽紅素測定,一、測定方法簡介,總膽紅素未結(jié)合膽紅素結(jié)合膽紅素Δ膽紅素（共價(jià)結(jié)合白蛋白）,重氮法改良JG法膽紅素氧化酶（BILIRUBINOXIDASE，BOD）法,測定方法,（一）重氮法,結(jié)合膽紅素能與重氮試劑直接反應(yīng)生成紫紅色的偶氮化合物（Λ560NM）,未結(jié)合膽紅素需加入甲醇、乙醇、苯甲酸鈉、尿素等“加速劑”，破壞分子內(nèi)氫鍵，才能與重氮試劑反應(yīng)生成紫紅色的偶氮化合物,,結(jié)合膽紅素,,,原理,血清與醋酸鈉咖啡因苯甲酸鈉試劑（咖啡因試劑）混合后，加入氯化重氮苯磺酸（重氮試劑），生成紫紅色偶氮膽紅素，最后加入強(qiáng)堿性酒石酸鈉溶液，使顏色不穩(wěn)定的紫紅色偶氮膽紅素在咖啡因存在下轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的藍(lán)色偶氮膽紅素。反應(yīng)結(jié)束后，在600NM波長比色，從校準(zhǔn)曲線查找總膽紅素和結(jié)合膽紅素含量醋酸鈉緩沖液保持偶氮反應(yīng)的PH；咖啡因試劑促進(jìn)未結(jié)合膽紅素分子內(nèi)的氫鍵破壞，加速與重氮試劑的偶聯(lián)反應(yīng)；疊氮鈉（或抗壞血酸）可終止結(jié)合膽紅素的偶氮反應(yīng)。,（二）改良JG法加速劑為苯甲酸鈉咖啡因,原理,方法評(píng)價(jià),靈敏度高抗干擾能力強(qiáng)線性范圍可達(dá)342ΜMOL/L正常參考濃度時(shí)精密度較差膽紅素濃度達(dá)342ΜMOL/L時(shí)，精密度好,（三）膽紅素氧化酶法,膽紅素在450NM波長處，吸光度的下降與濃度成正比。PH80時(shí)，膽紅素氧化酶可催化結(jié)合膽紅素和未結(jié)合膽紅素氧化；PH45時(shí)，膽紅素氧化酶僅催化結(jié)合膽紅素氧化。,靈敏度高，干擾少，準(zhǔn)確度好，線性范圍寬十二烷基硫酸鈉（SDS）及膽酸鈉等陰離子表面活性劑可促進(jìn)其氧化,原理,方法評(píng)價(jià),二、血清膽紅素測定的意義,診斷黃疸及判斷黃疸程度,總膽紅素171～340ΜMOL/L為隱性黃疸＞34ΜMOL/L時(shí)，皮膚、粘膜、鞏膜出現(xiàn)黃染，稱臨床黃疸,鑒別黃疸類型,①溶血性黃疸②肝細(xì)胞性黃疸③阻塞性黃疸,疾病的診斷,肝炎肝癌膽道部分阻塞再生障礙性貧血↓慢性腎炎↓,黃疸類型的鑒別,六血氨測定,一步法，也叫直接測定即不需從全血中分離出氨即可直接測定,兩步法，即先從全血中分離出氨,而后再進(jìn)行測定；,微量擴(kuò)散法、離子交換法,酶法和氨電極法,,原理血漿中的氨在足量Α酮戊二酸和NADPH存在時(shí)，經(jīng)谷氨酸脫氫酶作用生成谷氨酸,并消耗NADPH，NADPH的下降速率與血漿氨濃度成正比。,NH3＋Α酮戊二酸＋NADPH谷氨酸＋NADP＋H2O,谷氨酸脫氫酶速率法,谷氨酸脫氫酶,2方法評(píng)價(jià),本法特異性強(qiáng)、分析時(shí)間短，是較為理想的氨分析方法。在200ΜMOL/L范圍內(nèi)、線性良好。精密度批內(nèi)CV39；批間CV45。回收率為979～1027。,【參考范圍】,血氨測定在診斷治療肝性腦病中占有重要作用。,【臨床意義】,18～72ΜMOL/L酶法,七了解內(nèi)容,一、血清膽汁酸測定,（一）高效液相色譜法（二）放射免疫分析法（三）酶免疫分析法（四）酶比色法（類固醇脫氫酶法）,血清膽汁酸測定的意義,血清膽汁酸水平是反映肝實(shí)質(zhì)性損傷的一個(gè)重要指標(biāo),（一）作為肝膽疾病的初篩試驗(yàn)（二）作為低活動(dòng)性肝病的鑒別試驗(yàn)（三）作為肝硬化的輔助診斷（四）作為膽汁淤積的F輔助診斷,二、肝硬化的生化檢驗(yàn),由于多種損傷因素長期或反復(fù)作用于肝，使肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死以及肝結(jié)締組織彌漫性增生，導(dǎo)致肝廣泛的纖維化和結(jié)節(jié)的形成，稱為肝硬化。,,1肝硬化病因的分類,①營養(yǎng)不良②感染③隱原性肝硬化④肉芽腫性肝硬化。,（1）確定的病因,①乙型、丙型病毒性肝炎。②乙醇中毒。③代謝性疾病④肝內(nèi)、外長期膽汁淤積⑤門靜脈回流受阻⑥免疫功能紊亂⑦毒素及治療性藥物,（2）可能的原因,2肝硬化的生物化學(xué)檢查,反映肝纖維化指標(biāo)（1）單胺氧化酶（MONOAMINEOXIDASE,MAO）測定（2）Β脯氨酸羥化酶（ΒPROLINEHYDROXYLASE,ΒPH）測定（3）血清透明質(zhì)酸（HYALURONICACID,HA）測定（4）血清Ⅲ型前膠原肽（PⅢP）測定,一、急性肝損傷,血清酶急性肝損傷的主要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)變化特征是轉(zhuǎn)氨酶的顯著升高，同時(shí)伴有血清膽紅素的升高。AST/ALT1，是診斷急性病毒性肝炎的重要檢測指標(biāo)。重癥肝炎時(shí)則是ASTM大量出現(xiàn)于血清中。ALP可升高，但一般不會(huì)超過其參考值上限的3倍。,80,第三節(jié)常見肝膽疾病生化指標(biāo)變化,膽紅素急性肝損傷時(shí)的血清膽紅素與阻塞性黃疸一致，是以結(jié)合膽紅素升高為主。黃疸型肝炎血清直接和間接膽紅素均升高，但前者高于后者，尿膽紅素和尿膽原也增加。,81,血清蛋白質(zhì)急性肝炎時(shí)，蛋白合成代謝變化不大，血清蛋白質(zhì)可在正常范圍內(nèi)。慢性肝炎中度以上、肝硬化、（亞急性及慢性）重型肝炎時(shí)白蛋白下降，Γ球蛋白升高，A/G下降甚至倒置。,82,血漿凝血酶原時(shí)間血漿PT是急性肝損傷預(yù)后最重要的預(yù)測指標(biāo)，肝病時(shí)PT時(shí)間長短與肝損害程度呈正相關(guān)。PT持續(xù)延長，多是病情加重及預(yù)后不良的征兆。,83,二、慢性病毒性肝炎,血清酶檢測轉(zhuǎn)氨酶輕度上升（100200U/L），往往血清AST/ALT＜1，若AST/ALT＞1時(shí)，提示慢性肝炎可能進(jìn)入活動(dòng)期。如果患者有飲酒史，且血清AST為ALT的2倍以上，則可診斷為酒精性肝炎。ΓGT在反映慢性肝細(xì)胞損傷及其病變活動(dòng)時(shí)較轉(zhuǎn)氨酶敏感。,84,膽紅素肝細(xì)胞慢性受損，血清直接和間接膽紅素均不同程度升高；重型肝炎患者可出現(xiàn)ALT快速下降，黃疸進(jìn)行性加深，膽紅素不斷升高的“膽酶分離”現(xiàn)象。,85,蛋白質(zhì)慢性肝炎時(shí)，肝細(xì)胞合成能力減低，白蛋白明顯降低、A/G比倒置，這是本病的特征。其他凝血酶原時(shí)間（PT）顯著延長。血氨升高，提示肝細(xì)胞大量壞死，預(yù)后不佳。,86,三、肝硬化,血清酶類轉(zhuǎn)氨酶患者常有ALT和AST升高；AST/ALT比例可反映肝細(xì)胞損傷的程度；膽堿酯酶CHE常明顯下降，其下降程度與血清白蛋白相平行。MAO單胺氧化酶MAO活性可以反映肝纖維化形成過程及程度。PH肝纖維化時(shí)其活性及含量均明顯升高，,87,血清蛋白質(zhì)類白蛋白降低、A/G比值倒置時(shí)肝硬化的特征。AFP可以增高，一般在300NG/ML以下，當(dāng)肝功能好轉(zhuǎn)后，AFP逐漸下降至正常，若繼續(xù)升高，應(yīng)警惕有無肝癌的可能。,88,血清學(xué)指標(biāo)纖維連接蛋白FN血清透明質(zhì)酸HA膠原及其片段其他如凝血酶原時(shí)間測定（VITK不能加以糾正）、靛氰綠ICG實(shí)驗(yàn)等,89,第四節(jié)病例討論,病例討論,李XX．男性，49歲。主訴乏力、納差，牙齦和鼻出血6年，腹脹、尿少1年。現(xiàn)病史6年來無明顯誘因出現(xiàn)消瘦、周身乏力、食欲不振。每逢進(jìn)食蛋白及脂肪食物后即出現(xiàn)腹脹和大便不成形，每日排便2～3次，但無黏液、膿血和里急后重。常于刷牙時(shí)有齒齦出血，鼻出血，稍有碰撞皮膚發(fā)青。近1年來間斷出現(xiàn)腹脹，下肢浮腫和少尿，每日約600～900ML，用利尿藥后尿量增加，腹脹減輕，但乏力更明顯。近3個(gè)月低熱、腹痛，腹圍漸增大，有時(shí)不能平臥。自服利尿藥無效而來院診治。,病例,既往史10年前因外傷大量輸血，7年前體檢得知“丙型肝炎抗體陽性”，因肝功能正常而未經(jīng)特殊治療。體格檢查體溫385℃，脈搏98次/分，呼吸20次/分，血壓120/75MMHG。神志清楚，形體消瘦，面色灰暗黝黑，毛發(fā)稀疏。眼瞼無浮腫，鞏膜輕度黃染。頸軟，頸靜脈無怒張。心肺無異常。蛙形腹，臍膨出，腹壁靜脈顯露。肝臟觸不清，肝頸靜脈回流征陰性，脾肋下6CM，Ⅱ0硬，移動(dòng)性濁音陽性。左側(cè)腹部有局限性壓痛，輕度肌緊張和反跳痛，下腹部輕度叩痛，腸鳴音無亢進(jìn)及減弱?？梢姼握疲勄坝猩爻林?。,病例,腹水檢查淡黃色，比重1018，蛋白25G／L，李凡他試驗(yàn)陽性，細(xì)胞總數(shù)600106/L，N080，L020問題1根據(jù)以上特點(diǎn)，應(yīng)考慮什么疾病問題2有哪些輔助檢查對(duì)該患者的診斷有幫助,謝謝,

簡介：肝是人體最大的實(shí)質(zhì)性器官；肝也是體內(nèi)最大的腺體；肝具有復(fù)雜多樣的生物化學(xué)功能。,（4）肝細(xì)胞含有豐富的細(xì)胞器和豐富的酶體系，有些甚至是肝所獨(dú)有的。,肝的組織結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成特點(diǎn),（1）具有肝動(dòng)脈和門靜脈雙重血液供應(yīng),（2）具有肝靜脈和膽道系統(tǒng)雙重輸出通道,（3）具有豐富的肝血竇,獨(dú)特的組織結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成特點(diǎn)賦予肝復(fù)雜多樣的生物化學(xué)功能,肝系多種物質(zhì)代謝之中樞生物轉(zhuǎn)化作用分泌作用（分泌膽汁酸等）排泄作用（排泄膽紅素等）,第一節(jié)肝在物質(zhì)代謝中的作用,FUNCTIONOFLIVERINMATERIALMETABOLISM,作用,一、肝是維持血糖水平相對(duì)穩(wěn)定的重要器官,維持血糖水平相對(duì)穩(wěn)定，保障全身各組織，尤其是大腦和紅細(xì)胞的能量供應(yīng)。,以糖異生為主脂肪動(dòng)員↑→酮體合成↑→節(jié)省葡萄糖,饑餓狀態(tài),肝糖原合成↑過多糖則轉(zhuǎn)化為脂肪，以VLDL形式輸出,肝糖原分解↑,空腹?fàn)顟B(tài),二、肝在脂類代謝中占據(jù)中心地位,作用,在脂類的消化、吸收、合成、分解與運(yùn)輸均具有重要作用。,消化吸收,分泌膽汁，其中膽汁酸為脂類消化吸收所必需,飽食后合成甘油三酯、膽固醇、磷脂，并以VLDL形式分泌入血，供其他組織器官攝取與利用；合成酮體的唯一器官“肝內(nèi)生酮肝外用”；肝是合成膽固醇最主要器官，合成量占全身總合成量的3/4以上。,合成,FATOXYGENOLYSISDECREASEEXCESSFATACCUMULATEINHEPATICCELLSFATTYLIVER當(dāng)肝內(nèi)脂類含量超過肝重的5時(shí)，稱為脂肪肝脂肪肝,脂肪酸的Β氧化分解；肝是降解LDL的主要器官；肝合成膽汁酸是肝降解膽固醇的最重要途徑；肝是體內(nèi)膽固醇的重要排泄器官。,分解,運(yùn)輸,合成與分泌VLDLHDLAPOCⅡLCAT；APOCⅡ是毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞LPL的激活劑；肝合成與分泌LCAT將血漿膽固醇酯化。,三、肝的蛋白質(zhì)合成及分解代謝均非常活躍,肝在人體蛋白質(zhì)合成、分解和氨基酸代謝中起重要作用。,肝細(xì)胞的一個(gè)重要功能是合成與分泌血漿蛋白質(zhì)；肝還是清除血漿蛋白質(zhì)（清蛋白除外）的重要器官。,肝在血漿蛋白質(zhì)代謝中的作用,肝是體內(nèi)除支鏈氨基酸以外的所有氨基酸分解和轉(zhuǎn)變的重要場所。,肝通過鳥氨酸循環(huán)將有毒的氨合成無毒的尿素。肝還可將氨轉(zhuǎn)變成谷氨酰胺。,肝也是胺類物質(zhì)的重要生物轉(zhuǎn)化器官,肝在氨基酸代謝中的作用,肝的另一重要功能是解氨毒。,二、肝臟疾患時(shí)可能出現(xiàn)的臨床現(xiàn)象及其產(chǎn)生原因,第二節(jié)肝的生物轉(zhuǎn)化作用,BIOTRANSFORMATIONFUNCTIONOFLIVER,一、肝的生物轉(zhuǎn)化作用是機(jī)體重要的保護(hù)機(jī)制,（一）生物轉(zhuǎn)化的概念,機(jī)體對(duì)內(nèi)、外源性的非營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行代謝轉(zhuǎn)變，使其水溶性提高，極性增強(qiáng)，易于通過膽汁或尿液排出體外的過程稱為生物轉(zhuǎn)化BIOTRANSFORMATION。,非營養(yǎng)物質(zhì)既不作為構(gòu)建組織細(xì)胞的成分，又不作為能源物質(zhì)。,非營養(yǎng)物質(zhì),生物轉(zhuǎn)化的對(duì)象,肝是生物轉(zhuǎn)化的主要器官；腎、肺、胃腸道和皮膚也有一定生物轉(zhuǎn)化功能。,生物轉(zhuǎn)化的主要場所,（二）生物轉(zhuǎn)化的意義,生物轉(zhuǎn)化可對(duì)體內(nèi)的大部分非營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行代謝轉(zhuǎn)化，使其生物學(xué)活性降低或喪失滅活，或使有毒物質(zhì)的毒性減低或消除解毒。通過生物轉(zhuǎn)化作用可增加這些非營養(yǎng)物質(zhì)的水溶性和極性，從而易于從膽汁或尿液中排出。,肝的生物轉(zhuǎn)化作用≠解毒作用（DETOXIFICATION）,二、肝的生物轉(zhuǎn)化包括兩相反應(yīng),第一相反應(yīng)氧化、還原、水解反應(yīng)第二相反應(yīng)結(jié)合反應(yīng),有些物質(zhì)經(jīng)過第一相反應(yīng)，使其某些基團(tuán)轉(zhuǎn)化或分解，理化性質(zhì)改變，即可順利排出體外。有些物質(zhì)即使經(jīng)過第一相反應(yīng)后，極性改變不大，必須與某些極性更強(qiáng)的物質(zhì)結(jié)合,即第二相反應(yīng)，才能最終排出。,轉(zhuǎn)化反應(yīng)的連續(xù)性一種物質(zhì)在體內(nèi)的轉(zhuǎn)化需要連續(xù)進(jìn)行幾種反應(yīng)類型。,生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)的特點(diǎn),反應(yīng)類型的多樣性同一種或同一類物質(zhì)在體內(nèi)也可進(jìn)行多種不同反應(yīng)。,,解毒與致毒的雙重性一種物質(zhì)經(jīng)過一定的轉(zhuǎn)化后，其毒性可能減弱（解毒）,也可能增強(qiáng)（致毒）。,（一）氧化反應(yīng)最多見的生物轉(zhuǎn)化第一相反應(yīng),存在部位微粒體組成加單氧酶系是一個(gè)復(fù)合物，至少包括兩種組分細(xì)胞色素P450血紅素蛋白；NADPH細(xì)胞色素P450還原酶以FAD為輔基的黃酶,1單加氧酶系氧化異源物最重要的酶,基本特點(diǎn)該酶催化氧分子中的一個(gè)氧原子加到許多脂溶性底物中形成羥化物或環(huán)氧化物，另一個(gè)氧原子則被NADPH還原成水。故該酶又稱羥化酶或混合功能氧化酶。,苯胺,對(duì)氨基苯酚,意義加單氧酶系的羥化作用不僅增加藥物或毒物的水溶性，有利于排泄，而且還參與體內(nèi)許多重要物質(zhì)的羥化過程。,維生素D3羥化成為具有生物學(xué)活性的維生素1,25,OH2D3膽汁酸和類固醇激素合成過程中的羥化作用黃曲霉素B1經(jīng)加單氧酶作用生成致癌物質(zhì),２單胺氧化酶類氧化脂肪族和芳香族胺類,●,單胺氧化酶MONOAMINEOXIDASE,MAO存在部位線粒體催化的反應(yīng)催化胺類物質(zhì)氧化脫氨基生成相應(yīng)的醛類。,３醇脫氫酶與醛脫氫酶將乙醇最終氧化成乙酸,存在部位胞液中,催化的反應(yīng),醇脫氫酶ALCOHOLDEHYDROGENASE,ADH催化醇類氧化成醛醛脫氫酶ALDEHYDEDEHYDROGENASE,ALDH催化醛類生成酸,肝微粒體乙醇氧化系統(tǒng)（MICROSOMALETHANOLOXIDIZINGSYSTEM,MEOS）,MEOS是乙醇P450單加氧酶，產(chǎn)物是乙醛，僅在血中乙醇濃度很高時(shí)才被誘導(dǎo)而起作用。乙醇誘導(dǎo)MEOS不但不能使乙醇氧化產(chǎn)生ATP，還可增加對(duì)氧和NADPH的消耗，而且還可催化脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生羥乙基自由基，后者可進(jìn)一步促進(jìn)脂質(zhì)過氧化，引發(fā)肝損傷。,硝基化合物多見于食品防腐劑、工業(yè)試劑等。偶氮化合物常見于食品色素、化妝品、紡織與印刷工業(yè)等。有些可能是前致癌物。硝基還原酶NITROREDUCTASE偶氮還原酶AZOREDUCTASE存在部位微粒體,（二）還原反應(yīng)硝基還原酶和偶氮還原酶第一相反應(yīng)的主要還原酶,催化的反應(yīng),硝基化合物與偶氮化合物在硝基還原酶和偶氮還原酶的催化下，從NADH或NADPH接受氫，還原生成相應(yīng)的胺類。,存在部位胞液與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)催化的反應(yīng)分別水解酯鍵、酰胺鍵和糖苷鍵類化合物，以減低或消除其生物活性。這些水解產(chǎn)物通常還需進(jìn)一步反應(yīng)，以利排出體外。,（三）水解反應(yīng),酯酶、酰胺酶和糖苷酶生物轉(zhuǎn)化的主要水解酶,凡含有羥基、羧基或氨基的藥物、毒物或激素等均可發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。,葡糖醛酸、硫酸、乙?；?、谷胱甘肽、甲基、甘氨酸等物質(zhì)或基團(tuán)。,（四）結(jié)合反應(yīng)生物轉(zhuǎn)化第二相反應(yīng),結(jié)合對(duì)象,結(jié)合物,1葡糖醛酸結(jié)合最重要、最普遍的結(jié)合反應(yīng),葡糖醛酸基的直接供體,尿苷二磷酸葡糖醛酸UDPGA,催化酶,葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶UDPGLUCURONYLTRANSFERASE,UGT,,,,2硫酸結(jié)合也是常見的結(jié)合反應(yīng),硫酸供體3′磷酸腺苷5′磷酸硫酸PAPS,催化酶硫酸轉(zhuǎn)移酶SULFATETRANSFERASE,舉例,主要轉(zhuǎn)化對(duì)象含氨基或肼類物質(zhì),,,3乙酰基化是某些含胺非營養(yǎng)物質(zhì)的重要轉(zhuǎn)化方式,催化酶乙?；D(zhuǎn)移酶ACETYLTRANSFERASE,4谷胱甘肽結(jié)合是細(xì)胞應(yīng)對(duì)親電子性異源物的重要防御反應(yīng),結(jié)合對(duì)象鹵代、環(huán)氧化物催化酶谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GLUTATHIONESTRANSFERASE,GST,５甲基化是代謝內(nèi)源化合物的重要反應(yīng),甲基供體S腺苷甲硫氨酸SAM,肝細(xì)胞液及微粒體中具有多種轉(zhuǎn)甲基酶，含有羥基、巰基或氨基的化合物可進(jìn)行甲基化反應(yīng)。,結(jié)合對(duì)象含羧基化合物,6甘氨酸主要參與含羧基異源物的結(jié)合轉(zhuǎn)化,三、生物轉(zhuǎn)化作用受許多因素的調(diào)節(jié)和影響,年齡對(duì)生物轉(zhuǎn)化作用的影響很明顯某些生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)有明顯的性別差異營養(yǎng)狀況對(duì)生物轉(zhuǎn)化作用亦產(chǎn)生影響疾病尤其嚴(yán)重肝病也可明顯影響生物轉(zhuǎn)化作用遺傳因素亦可顯著影響生物轉(zhuǎn)化酶的活性。,（一）年齡、性別、營養(yǎng)、疾病及遺傳等因素對(duì)生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)生明顯影響,（二）許多異源物可誘導(dǎo)生物轉(zhuǎn)化的酶類,許多異源物可以誘導(dǎo)合成一些生物轉(zhuǎn)化酶類，在加速其自身代謝轉(zhuǎn)化的同時(shí)，亦可影響對(duì)其他異源物的生物轉(zhuǎn)化。由于多種物質(zhì)在體內(nèi)轉(zhuǎn)化常由同一酶系的催化，因此同時(shí)服用多種藥物時(shí)可出現(xiàn)藥物之間對(duì)同一轉(zhuǎn)化酶系的競爭性抑制作用，使多種藥物的生物轉(zhuǎn)化作用相互抑制，可導(dǎo)致某些藥物藥理作用強(qiáng)度的改變。臨床用藥時(shí)應(yīng)加以注意。此外，食物中亦常含有誘導(dǎo)或抑制生物轉(zhuǎn)化酶的非營養(yǎng)物質(zhì)。肝病患者用藥要特別慎重。,第三節(jié)膽汁與膽汁酸的代謝,METABOLISMOFBILEANDBILEACIDS,肝細(xì)胞分泌,肝膽汁經(jīng)膽囊濃縮,一、膽汁可分為肝膽汁和膽囊膽汁,膽汁的主要有機(jī)成分,膽汁酸BILEACIDS是存在于膽汁中一大類膽烷酸的總稱，以鈉鹽或鉀鹽的形式存在，即膽汁酸鹽，簡稱膽鹽BILESALTS。,二、膽汁酸有游離型、結(jié)合型及初級(jí)、次級(jí)之分,,游離膽汁酸FREEBILEACID,結(jié)合膽汁酸CONJUGATEDBILEACID,膽汁酸按結(jié)構(gòu)分,游離膽汁酸,膽酸,脫氧膽酸,石膽酸,結(jié)合膽汁酸,初級(jí)膽汁酸在肝細(xì)胞以膽固醇為原料直接合成的膽汁酸，包括膽酸、鵝脫氧膽酸及其與甘氨酸或牛磺酸的結(jié)合產(chǎn)物。次級(jí)膽汁酸在腸道受細(xì)菌作用，第7位Α羥基脫氧生成的膽汁酸稱為次級(jí)膽汁酸，主要包括脫氧膽酸和石膽酸及其在肝中分別與甘氨酸或?；撬岬慕Y(jié)合產(chǎn)物。,膽汁酸按來源分,膽酸,脫氧膽酸,初級(jí)膽汁酸,次級(jí)膽汁酸,鵝脫氧膽酸,石膽酸,次級(jí)膽汁酸,初級(jí)膽汁酸,三、膽汁酸的生理功能,膽汁酸的立體構(gòu)型親水與疏水兩個(gè)側(cè)面，賦予膽汁酸很強(qiáng)的界面活性，成為較強(qiáng)的乳化劑。,（一）促進(jìn)脂類的消化與吸收,人體內(nèi)約99的膽固醇隨膽汁經(jīng)腸道排出體外，其中?以膽汁酸形式，?以直接形式排出體外。膽汁中的膽汁酸鹽與卵磷脂協(xié)同作用，使膽固醇分散形成可溶性微團(tuán)，使之不易結(jié)晶沉淀而隨膽汁排泄。膽固醇是否從膽汁中沉淀析出主要取決于膽汁中膽汁酸鹽和卵磷脂與膽固醇之間的合適比例（正常比值?10︰1）。,（二）維持膽汁中膽固醇的溶解狀態(tài)以抑制膽固醇析出,,四、膽汁酸的代謝及膽汁酸的腸肝循環(huán),部位肝細(xì)胞的胞液和微粒體中原料膽固醇膽汁酸的合成反應(yīng)包括膽固醇核的羥化、側(cè)鏈縮短和加輔酶A等多步反應(yīng)限速酶膽固醇7Α羥化酶,（一）初級(jí)膽汁酸在肝內(nèi)以膽固醇為原料生成,膽固醇27C,7Α羥化膽固醇,初級(jí)膽汁酸24C,,結(jié)合型初級(jí)膽汁酸,,7Α羥化酶,過程復(fù)雜,膽固醇7Α羥化酶是膽汁酸合成的限速酶，而HMGCOA還原酶是膽固醇合成的關(guān)鍵酶，兩者均系誘導(dǎo)酶，同時(shí)受膽汁酸和膽固醇的調(diào)節(jié)。肝細(xì)胞通過這兩個(gè)酶的協(xié)同作用維持肝細(xì)胞內(nèi)膽固醇的水平。,膽汁酸代謝的調(diào)節(jié),（二）次級(jí)膽汁酸在腸道由腸菌作用生成,部位小腸下段和大腸過程,（三）膽汁酸的腸肝循環(huán)使有限的膽汁酸庫存循環(huán)利用,膽汁酸隨膽汁排入腸腔后，約95膽汁酸（包括初級(jí)和次級(jí)，游離型與結(jié)合型）可經(jīng)門靜脈重吸收入肝，在肝內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)合膽汁酸,并與肝新合成的膽汁酸一道再次排入腸道，此循環(huán)過程稱膽汁酸的腸肝循環(huán)ENTEROHEPATICCIRCULATIONOFBILEACID。,膽汁酸腸肝循環(huán)的概念,膽汁酸的腸肝循環(huán)過程,在于可使有限的膽汁酸庫BILEACIDPOOL約3～5克循環(huán)利用，以滿足機(jī)體對(duì)膽汁酸的生理需求。,膽汁酸腸肝循環(huán)的生理意義,機(jī)體內(nèi)膽汁酸儲(chǔ)備的總量稱為膽汁酸庫BILEACIDPOOL。,第四節(jié)膽色素的代謝與黃疸,METABOLISMOFBILEPIGMENTANDJAUNDICE,膽色素BILEPIGMENT是體內(nèi)鐵卟啉類化合物的主要分解代謝產(chǎn)物，包括膽綠素BILIVERDIN、膽紅素BILIRUBIN、膽素原BILINOGEN和膽素BILIN等。膽紅素處于膽色素代謝的中心，是人體膽汁中的主要色素。,體內(nèi)的鐵卟啉化合物包括血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素、過氧化氫酶及過氧化物酶。正常人每天可生成250～350MG膽紅素，其中約80以上來自衰老紅細(xì)胞破壞所釋放的血紅蛋白的分解。,一、膽紅素主要源于血紅素的降解,（一）膽紅素主要源于衰老紅細(xì)胞的破壞,（二）血紅素加氧酶和膽綠素還原酶催化膽紅素的生成,肝、脾、骨髓等單核吞噬細(xì)胞微粒體與胞液中。,過程,部位,膽紅素的生成過程,二、血液中的膽紅素主要與清蛋白結(jié)合而運(yùn)輸,一方面增加了膽紅素的水溶性，提高了血漿對(duì)膽紅素的運(yùn)輸能力；另一方面限制了它自由通透各種細(xì)胞膜，避免了它對(duì)組織細(xì)胞造成的毒性，起到暫時(shí)性的解毒作用。,運(yùn)輸形式膽紅素清蛋白復(fù)合體,意義,過多的游離膽紅素則可與腦部基底核的脂類結(jié)合，干擾腦的正常功能，稱為膽紅素腦病BILIRUBINENCEPHALOPATHY或核黃疸KERNICTERUS。,競爭結(jié)合劑如磺胺藥、水楊酸、膽汁酸等。,四、膽紅素在肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)合膽紅素并泌入膽小管,（一）游離膽紅素可滲透肝細(xì)胞膜而被攝取,膽紅素可以自由雙向通透肝血竇肝細(xì)胞膜表面進(jìn)入肝細(xì)胞；膽紅素在胞漿與配體蛋白Ｙ蛋白或Ｚ蛋白結(jié)合，膽紅素Y蛋白或膽紅素Z蛋白形式將膽紅素?cái)y帶至肝細(xì)胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。,（二）膽紅素在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)合葡糖醛酸生成水溶性結(jié)合膽紅素,部位滑面內(nèi)網(wǎng)質(zhì)反應(yīng)結(jié)合反應(yīng)主要結(jié)合物為UDP葡糖醛酸,UDPGA催化酶葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物主要為雙葡糖醛酸膽紅素，另有少量單葡萄糖醛酸膽紅素、硫酸膽紅素，統(tǒng)稱為結(jié)合膽紅素。意義膽紅素與葡糖醛酸的結(jié)合是肝對(duì)有毒性膽紅素一種根本性的生物轉(zhuǎn)化解毒方式。,膽紅素葡糖醛酸二酯的結(jié)構(gòu),兩種膽紅素理化性質(zhì)的比較,結(jié)合膽紅素從肝細(xì)胞分泌至膽小管，再隨膽汁排入腸道，是肝臟代謝膽紅素的限速步驟。肝細(xì)胞向膽小管分泌結(jié)合膽紅素是一個(gè)逆濃度梯度的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程。多耐藥相關(guān)蛋白2MRP2是肝細(xì)胞向膽小管分泌結(jié)合膽紅素的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白膽紅素排泄一旦發(fā)生障礙，結(jié)合膽紅素就可返流入血。,（三）肝細(xì)胞向膽小管分泌結(jié)合膽紅素,四、膽紅素在腸道內(nèi)轉(zhuǎn)化為膽素原和膽素,膽素原是腸菌作用的產(chǎn)物。D尿膽素原、中膽素原、糞膽素原統(tǒng)稱為膽素原。D尿膽素、I尿膽素、糞膽素合稱膽素。,（二）少量膽素原可被腸粘膜重吸收，進(jìn)入膽素原的腸肝循環(huán),腸道中有少量的膽素原可被腸粘膜細(xì)胞重吸收，經(jīng)門靜脈入肝，其中大部分再隨膽汁排入腸道，形成膽素原的腸肝循環(huán)BILINOGENENTEROHEPATICCIRCULATION。,膽素原的腸肝循環(huán)的概念,膽素原腸肝循環(huán)的過程,五、高膽紅素血癥及黃疸,正常血清膽紅素濃度34～171ΜMOL/L（02～1MG/DL。4/5為游離膽紅素，其余為結(jié)合膽紅素。,（一）正常人膽紅素的生成與排泄維持動(dòng)態(tài)平衡,高膽紅素血癥（HYPERBILIRUBINEMIA體內(nèi)膽紅素生成過多，或肝細(xì)胞對(duì)膽紅素的攝取、轉(zhuǎn)化及排泄能力下降等因素引起血漿膽紅素含量的增多。,膽紅素為橙黃色物質(zhì)，過量的膽紅素可擴(kuò)散進(jìn)入組織造成組織黃染，這一體征稱為黃疸JAUNDICE。,當(dāng)血漿膽紅素濃度超過342ΜMOL/L2MG/DL時(shí)，肉眼可見皮膚、粘膜及鞏膜等組織黃染，臨床上稱為顯性黃疸。若血漿膽紅素升高不明顯，在1～2MG/DL之間時(shí)，肉眼觀察不到皮膚與鞏膜等黃染現(xiàn)象，稱為隱性黃疸JAUNDICEOCCULT。,臨床上常根據(jù)黃疸發(fā)病的原因不同，簡單的將黃疸分為三類,溶血性黃疸HEMOLYTICJAUNDICE肝細(xì)胞性黃疸HEPATOCELLULARJAUNDICE阻塞性黃疸OBSTRUCTIVEJAUNDICE,（二）黃疸依據(jù)病因有溶血性、肝細(xì)胞性和阻塞性之分,1．溶血性黃疸,溶血性黃疸HEMOLYTICJAUNDICE，又稱為肝前性黃疸PREHEPATICJAUNDICE。屬于高未結(jié)合型膽紅素血癥。此類黃疸是由于紅細(xì)胞的大量破壞，在單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生膽紅素過多，超過了肝細(xì)胞攝取、轉(zhuǎn)化和排泄膽紅素的能力，造成血液中未結(jié)合膽紅素濃度顯著增高所致。,2．肝細(xì)胞性黃疸,肝細(xì)胞性黃疸HEPATOCELLULARJAUNDICE又稱為肝原性黃疸HEPATICJAUNDICE。由于肝細(xì)胞功能受損，造成其攝取、轉(zhuǎn)化和排泄膽紅素的能力降低所致的黃疸。,3．阻塞性黃疸,阻塞性黃疸OBSTRUCTIVEJAUNDICE，又稱為肝后性黃疸POSTHEPATICJAUNDICE。此類黃疸是由于各種原因引起的膽管系統(tǒng)阻塞，膽汁排泄障礙所致。,各種黃疸時(shí)血、尿、糞膽色素的改變,,↑↑,↑↑,↑↑,－↑↑↑深,＋＋不一定不一定↓或正常變淺或正常,＋＋↓↓↓或－完全阻塞時(shí)白陶土色,謝謝,

簡介：VITAMINSANDMICROELEMENTS,INTRODUCTION,DEFINITION維生素VITAMIN是機(jī)體維持正常功能所必需，但在體內(nèi)不能合成或合成量很少，必須由食物供給的一組低分子量有機(jī)物質(zhì)。,13ESSENTIALVITAMINSFORHUMANBEING,VITAMINS,WATERSOLUBLE,LIPIDSOLUBLE,VITC,VITB,A,D,E,K,B1,B2,B6,B12,PP,PATOTHENICACID，F(xiàn)OLICACID,BIOTIN,LIPOICACID,,,,,,,SECTIONILIPIDSOLUBLEVITAMINS共同特點(diǎn)﹡均為非極性疏水的異戊二烯ISOPRENE衍生物﹡不溶于水，溶于脂類及脂肪溶劑﹡在食物中與脂類共存，并隨脂類一同吸收﹡吸收的脂溶性維生素在血液與脂蛋白及某些特殊結(jié)合蛋白特異結(jié)合而運(yùn)輸種類VITA,VITD,VITE,VITK,,VITAMINA（抗干眼病維生素）,（一）化學(xué)本質(zhì)與性質(zhì),﹡天然形式A1（RETINOL）A2（3脫氫視黃醇）﹡活性形式視黃醇、視黃醛、視黃酸﹡維生素A原Β胡蘿卜素,,,,（二）生化作用及缺乏癥1生化作用＊構(gòu)成視覺細(xì)胞內(nèi)感光物質(zhì)（見后圖）＊參與糖蛋白的合成，維持上皮組織的分化與健全＊其他作用，如影響細(xì)胞的分化2缺乏癥夜盲癥NIGHTBLINDNESS,干眼病DRYEYES，皮膚干燥DRYSKIN等,視紫紅質(zhì),視蛋白,11順視黃醛,全反視黃醛,暗處,光,視紫紅質(zhì)的合成、分解與視黃醛的關(guān)系,VITAMIND（抗佝僂病維生素）,（一）化學(xué)本質(zhì)和性質(zhì),﹡種類VITD2（麥角鈣化醇）VITD3（膽鈣化醇）﹡VITD2原麥角固醇VITD3原7脫氫膽固醇麥角固醇→VITD2膽固醇→7脫氫膽固醇→VITD3﹡VITD3的活性形式1,25OH2VITD3,,OH,,,OH,,肝25羥化酶,維生素D3（膽鈣化醇）,,腎,骨,胎盤中的1Α羥化酶,1,25二羥維生素D3（1,25二羥膽鈣化醇）,在體內(nèi)的轉(zhuǎn)變,,24,25二羥維生素D3（24,25二羥膽鈣化醇）,腎,骨,胎盤、軟骨中的24羥化酶,2缺乏癥兒童佝僂病RICKETS成人軟骨病OSTEOMALACIA,1生化作用作用于小腸粘膜、腎及腎小管，促進(jìn)鈣磷吸收，有利于新骨的形成、鈣化。,（二）生化作用及缺乏癥,VITAMINE（TOCOPHEROL）,（一）化學(xué)本質(zhì)與性質(zhì)﹡種類生育酚，生育三烯酚﹡易自身氧化，故能保護(hù)其他物質(zhì)。,,（二）生化作用及缺乏癥1抗氧化作用ANTIOXIDANTROO?RH?ROOH?R（過氧化自由基）（多不飽和脂肪酸）（有機(jī)過氧化物）（有機(jī)自由基）R?O2?ROO在有維生素EVITEOH存在時(shí)，它與有機(jī)過氧化自由基的反應(yīng)為ROOVITEOH?ROOH?VITEO維生素E是一種斷鏈抗氧化劑CHAINBREAKINGANTIOXIDANT2維持生殖機(jī)能3促進(jìn)血紅素代謝,VITAMINK（凝血維生素）,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì),天然形式K1、K2人工合成K3、K4,,（二）生化作用及缺乏癥1生化作用維持體內(nèi)凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ的正常水平，參與凝血作用COFACTOROFTHECARBOXYLASE促進(jìn)凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ中的GLU進(jìn)行Γ位的羧化轉(zhuǎn)變?yōu)橛心钚缘哪蜃?參與骨、牙等組織中與鈣相關(guān)的蛋白質(zhì)中GLU殘基的羧化2缺乏表現(xiàn)易出血HEMORRHAGICDISEASE,SUMMARY,A,D,E,K,化學(xué)結(jié)構(gòu),20碳含B白芷酮環(huán)的多烯烴一元醇,類固醇衍生物,異戊烯側(cè)鏈奈醌化合物,活性形式,視黃醛，3脫氫視黃醛，視黃酸,1，25OH2D3,生理作用,視覺細(xì)胞的感光成分上皮細(xì)胞正常生長，抗腫瘤，抗氧化,調(diào)節(jié)鈣磷代謝,促生育抗氧化防衰老,R羧化酶的輔酶,苯并二氫砒喃衍生物,,,,,,,,,,,SECTIONⅡWATERSOLUBLEVITAMINS,共同特點(diǎn)﹡易溶于水，故易隨尿液排出。﹡體內(nèi)不易儲(chǔ)存，必須經(jīng)常從食物中攝取。,種類B族維生素和維生素C,VITAMINB1THIAMINE,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì),﹡維生素B1又名硫胺素THIAMINE﹡體內(nèi)活性形式為焦磷酸硫胺素TPP,,,焦磷酸硫胺素TPP,,,,,,,（二）生化作用及缺乏癥,1生化作用,﹡TPP是Α酮酸氧化脫羧酶OXIDATIVEDECARXYLATIONOFΑ–KETOACIDS的輔酶，也是轉(zhuǎn)酮醇酶TRANSKETOLASE的輔酶。﹡在神經(jīng)傳導(dǎo)中起一定的作用，抑制膽堿酯酶的活性。,2缺乏癥﹡腳氣病BERIBERI，末梢神經(jīng)炎,一、有氧氧化的反應(yīng)過程,第一階段酵解途徑,第二階段丙酮酸的氧化脫羧,第三階段三羧酸循環(huán),G（GN）,第四階段氧化磷酸化,丙酮酸,乙酰COA,,,,,,,H2O,O,,ATP,ADP,TAC循環(huán),胞液,線粒體,（一）丙酮酸的氧化脫羧,總反應(yīng)式,丙酮酸脫氫酶復(fù)合體的組成,酶E1丙酮酸脫氫酶E2二氫硫辛酰胺轉(zhuǎn)乙酰酶E3二氫硫辛酰胺脫氫酶,,,,,,,CO2,,COASH,,NAD,NADHH,5NADHH的生成,1?羥乙基TPP的生成,2乙酰硫辛酰胺的生成,3乙酰COA的生成,4硫辛酰胺的生成,,VITAMINB2RIBOFLAVIN,,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì)﹡維生素B2又名核黃素RIBOFLAVIN﹡體內(nèi)活性形式為黃素單核苷酸FMN黃素腺嘌呤二核苷酸FAD,,VITB2,,FMN,,AMP,,FAD,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,,FMN的文字結(jié)構(gòu)式6、7二甲基異咯嗪核醇磷酸,,,FAD的文字結(jié)構(gòu)式6、7二甲基異咯嗪腺嘌呤核醇核糖磷酸磷酸,,,,,,,（二）生化作用及缺乏癥﹡生化作用FMN及FAD是體內(nèi)氧化還原酶的輔基，主要起氫傳遞體的作用。﹡缺乏癥口角炎CHEILOSIS，唇炎，陰囊炎等。,VITAMINB3NICOTINACID,NICOTINAMID,VITAMINPP,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì),﹡維生素PP包括尼克酸NICOTINICACID尼克酰胺NICOTINAMIDE,﹡體內(nèi)活性形式尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸NADNICOTINAMIDEADENINEDINUCLEOTIDE尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPNICOTINAMIDEADENINEDINUCLEOTIDEPHOSPHATE,,NADR為H,NADPR為,NAD與NADP的文字結(jié)構(gòu)式尼克酰胺腺嘌呤核糖核糖（磷酸）磷酸磷酸,,,,,,,,,,,（二）生化作用及缺乏癥,1生化作用﹡NAD及NADP是體內(nèi)多種脫氫酶（如蘋果酸脫氫酶、乳酸脫氫酶）的輔酶，起傳遞氫的作用。,2缺乏癥﹡癩皮病,,VITAMINB6PYRIDINEDERIVATIVES,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì)﹡維生素B6包括吡哆醇PYRIDOXINE，吡哆醛PYRIDOXAL及吡哆胺PYRIDOXAMINE﹡體內(nèi)活性形式為磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺,,,,,,,,,（二）生化作用及缺乏癥﹡磷酸吡哆醛是氨基酸轉(zhuǎn)氨酶及脫羧酶的輔酶，也是?氨基?酮戊酸合酶（ALA合酶）的輔酶。,VITAMINB5PANTOTHENICACID,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì)﹡泛酸PANTOTHENICACID又名遍多酸﹡體內(nèi)活性形式為輔酶ACOA?；d體蛋白ACP（二）生化作用及缺乏癥﹡COA及ACP是?；D(zhuǎn)移酶的輔酶，參與?；霓D(zhuǎn)移作用。,,COA的結(jié)構(gòu)式,,泛酸,,4磷酸泛酰巰基乙胺,BIOTIN,,生化作用生化作用生物素BIOTIN是多種羧化酶（如丙酮酸羧化酶）的輔酶，參與CO2的羧化過程。,,與賴氨酸殘基Ε氨基結(jié)合成生物胞素,與羧基結(jié)合生成羧基生物素,FOLICACID,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì),﹡葉酸FOLICACID又稱蝶酰谷氨酸﹡體內(nèi)活性形式為四氫葉酸FH4TETRAHYDROFOLATE,,蝶酰谷氨酸,葉酸,二氫葉酸還原酶,NADPHH,NADP,二氫葉酸,二氫葉酸還原酶,NADPHH,NADP,四氫葉酸,5,6,7,8四氫葉酸,,,,,目錄,（二）生化作用及缺乏癥,﹡生化作用FH4是一碳單位轉(zhuǎn)移酶的輔酶，參與一碳單位的轉(zhuǎn)移。﹡缺乏癥巨幼紅細(xì)胞貧血MEGALOBLASTICANEMIA,,臨床應(yīng)用抗腫瘤藥物，抑制四氫葉酸合成,DUMP,DTMP磺胺藥的作用，葉酸合成障礙,,VITAMINB12COBALAMIN,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì),﹡維生素B12又稱鈷胺素COHOLAMINE﹡體內(nèi)活性形式為甲基鈷胺素5?脫氧腺苷鈷胺素,R5脫氧腺苷5脫氧腺苷鈷胺素,（二）生化作用及缺乏癥,﹡生化作用參與體內(nèi)甲基轉(zhuǎn)移作用﹡缺乏癥巨幼紅細(xì)胞貧血MEGALOBLASTICANEMIA、神經(jīng)疾患HIGHBLOODLEVELOFHOMOCYSTEINE,VITAMINCASCORBICACID,,維生素C,脫氫維生素C,,（二）生化作用及缺乏癥,﹡生化作用參與氧化還原反應(yīng)，參與體內(nèi)羥化應(yīng)，促進(jìn)膠原蛋白的合成，促進(jìn)鐵的吸收。﹡缺乏癥壞血病,ΑLIPOICACID硫辛酸,,氧化型,還原型,它與TPP協(xié)同參與丙酮酸、Α酮戊二酸的氧化脫羧反應(yīng)，是Α酮酸氧化脫羧反應(yīng)中硫辛酸乙酰轉(zhuǎn)移酶的輔酶,起轉(zhuǎn)酰基作用,（二）生化作用及缺乏癥,SUMMARY,名稱,輔酶形式,生理作用,缺乏癥,硫胺素,維生素B1,抗腳氣病維生素,硫胺素焦磷酸酯（TPP,A酮酸氧化脫羧酶的輔酶，磷酸戊糖旁路中轉(zhuǎn)酮醇酶的輔酶,腳氣病,,維生素B2,核黃素,黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD黃素單核苷酸FMN,黃素脫氫酶的輔酶,口角炎舌炎,維生素PP，抗糙皮病維生素,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP,多數(shù)脫氫酶的輔酶，參與氫的傳遞,糙皮病,,,,,,,名稱,輔酶形式,生理作用,缺乏癥,維生素B6吡哆醛,磷酸吡哆醛,轉(zhuǎn)氨酶的輔酶，傳遞氨基氨基載體，腸菌能合成,泛酸，遍多酸,輔酶A,?；D(zhuǎn)移,生物素,羧化酶的輔酶CO2的載體,抗生物素蛋白,,,,,,,,,名稱,輔酶形式,生理作用,缺乏癥,維生素B12,葉酸,四氫葉酸FH4,一碳單位的載體,巨幼細(xì)胞性貧血,甲基鈷胺素，5脫氧鈷胺素,轉(zhuǎn)甲基酶的輔酶,巨幼細(xì)胞性貧血,維生素C抗壞血酸,L抗壞血酸（還原）,羥化反應(yīng),壞血病,硫辛酸,,,,,,,,SUMMARYVITAMINSAREALLORGANICNUTRIENTSWITHVARIOUSESSENTIALMETABOLICFUNCTIONS,REQUIREDINSMALLAMOUNTSINTHEDIETBECAUSETHEYCANNOTBESYNTHESIZEDBYTHEBODY2APARTFROMVITAMINC,THEWATERSOLUBLEVITAMINSAREALLMEMBERSOFTHEBCOMPLEXANDACTASEN-ZYMECOFACTORS3THIAMINISACOFACTORINOXIDATIVEDECARBOXYTIONOFAKETOACIDSANDOFANIMPORTANTENZYMETHEPENTOSEPHOSPHATEPATHWAY,TRANSKETOLASE,4RIBOFLAVINANDNIACINAREEACHIMPORTANTCOFACTORSINOXIDOREDUCTIONREACTIONSRIBOFLAVINISPRESENTASPROSTHETICGROUPSINFLAVOPROTEINENZYMESFLAVINMONONUCLEOTIDEANDFLAVINADENINEDIRNUCLEOTIDE,WHEREASNIACINISPRESENTINTHENADANDNADPCOFACTORSOFMANYDEHYDROGENASEENZYMES5PANTOTHENICACIDISPRESENTINCOENZYMEAANDACYLCARRIERPROTEIN,WHICHACTASCARRIERSFORAGROUPSINMANYIMPORTANTREACTIONS,WHEREASPYDOXALPHOSPHATEISTHECOENZYMEFORSEVERALENZYMEOFAMINOACIDMETABOLISMINCLUDINGTHETRANSAMINASES,6BIOTINISTHECOENZYMEFORSEVERALCARBOXYLASEENZYMES,INCLUDINGACETYLCOACARBOXYLASE,THERATECONTROLLINGENZYMEINLIPOGENESIS,ANDPYRUVATECARBOXYLASE,IMPORTANTINGLUCONEOGENESIS7ASWELLASHAVINGSEPARATEFUNCTIONS,VITAMINEB12ANDFOLICACIDTAKEPARTINPROVIDINGONECARBONRESIDUESFORNUCLEICACIDSYNTHESIS8ASCORBICACIDISAWATERSOLUBLEANTIOXIDANTTHATMAINTAINSMANYMETALCOFACTORSINTHEREDUCEDSTATE,9ABSENCEOFTHEWATERSOLUBLEVITAMINSFROMTHEDIETPROVOKESMULTIPLEDEFICIENCYSTATESABSENCEASINGLEVITAMINLEADSTOACHARACTERISTICDEFICIENCYSYNDROME10THELIPIDSOLUBLEVITAMINEHAVETHECOMMONFEATURESOFBEINGAPOLAR,HYDROPHOBICMOLECULESANDALSOOFBEINGISOPRENEDERIVATIVESTHEYALLREQUIRENORMALFATABSORPTIONTOBEOCCURRINGFOREFFICIENTABSORPTION,ANDIFTHISMECHANISMISDEFECTIVE,DEFI-CIENCYSYMPTOMSARELIKELYTOOCCUR,11VITAMINARETINOLISREPRESENTEDNOTONLYASSUCHINTHEDIETBUTALSOBYTHEPROVITAMINPCAROTENEINPLANTSRETINOLANDRETINOICACIDARECON-SIDEREDTOACTBYCONTROLLINGGENEEXPRESSION,WHEREASRETINALISUTILIZEDINVISIONANDHASAROLEINGLYCOPROTEINSYNTHESIS,12VITAMINDISASTEROIDPROHORMONEWHOSEACTIVITYISCARRIEDOUTBYITSHORMONEDERIVATIVEITISUTILIZEDINTHEREGULATIONOFCALCIUMANDPHOS-PHATEMETABOLISM,ANDITSOMISSIONFROMTHEDIETLEADSTORICKETSANDOSTEOMALACIA,13VITAMINETOCOPHEROLISTHEMOSTIMPORTANTANTIOXIDANTINTHEBODY,ACTINGINTHELIPIDPHASEOFMEMBRANESTHROUGHOUTTHECELLITPROTECTTHEEFFECTSOFTOXICRADICALSSUCHASTHEPEROXYLRADICAL,MAINLYASABREAKEROFFREERADICALCHAINREACTIONS14VITAMINKISNEEDEDFORTHESYNTHESISBLOODCLOTTINGFACTORSEG,II,VII,IX,ANDX,ASACOFACTORTOACARBOXYLASETHATACTSMATERESIDUESOFCLOTTINGFACTORPRECURSORENABLETHEMTOCHELATECALCIUMINTERRUPTVITAMINKREGENERATIONCYCLEBYDICUMAROLPOUNDSISTHEBASISFORTHEIRANTICOAGULANPROPERTIES,SECTIONIIIMICROELEMENT,概念微量元素是指人體中每人每天的需要量在100㎎以下的元素。種類主要包括有鐵、碘、銅、鋅、錳、硒、氟、鉬、鈷、鉻等10種。,1、寫出水溶性B族維生素B1、B2、PP、B6泛酸、發(fā)揮生理作用的輔酶形式及其在代謝中的生化作用。2、參考書本寫NAD、NADP、FAD、FMN的框架式結(jié)構(gòu)式。3、如果一個(gè)病人長期服用各種抗生素又不補(bǔ)充維生素，可能發(fā)生什么后果，請(qǐng)舉例說明4、根據(jù)您所學(xué)過的生化知識(shí)，臨床上維生素制劑的使用應(yīng)注意什么問題,討論題1、夜盲癥是怎樣造成的闡述它的機(jī)理2、戶外活動(dòng)少，最易造成那些維生素缺乏為什么3、那類維生素與凝血功能有關(guān)那類維生素缺乏易導(dǎo)致毛細(xì)血管破裂而出血4、1，25（OH）2VITD3對(duì)鈣磷代謝有什么影響5、如何防止佝僂病的發(fā)生,

簡介：衛(wèi)生部“十二五”規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥教材建設(shè)研究會(huì)規(guī)劃教材,皖南醫(yī)學(xué)院章堯,覓磚搜沉胰右宴滯擠辦曠拱今各陵囤手駛酬視鍺村圃翠紙扣濟(jì)臨撅皖及淵第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),教學(xué)目標(biāo)和要求,掌握黃疸的發(fā)生機(jī)制和各型黃疸的代謝特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷要點(diǎn)；肝膽疾病實(shí)驗(yàn)室主要生化檢查指標(biāo)以及在肝膽疾病診斷和鑒別診斷中的臨床應(yīng)用及其評(píng)價(jià)。熟悉肝臟主要生物化學(xué)功能及其在肝細(xì)胞損傷時(shí)的代謝變化；膽汁酸代謝及在肝膽疾病診斷中的應(yīng)用。了解肝臟功能實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目篩選的原則。,2,夯一翅坑葡愉閑褥拖之烙冀撣展憋歸韋潞祟珊責(zé)表娩敘郭躊瘋舒衷盯維逆第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),韓真崩戴裔拐孟星龔暴穩(wěn)脾懼籍售碾驕頗熄絮詢招奴雇玩梧橙纂坯烤丙悍第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),一、肝臟的主要生物化學(xué)功能,1合成與分泌功能2加工與儲(chǔ)存功能3生物轉(zhuǎn)化功能4激素的滅活,4,第一節(jié)肝臟主要生化功能及其代謝紊亂,渡副丈殺滑嘿忙酶妙勵(lì)茵跳戒瘍宋殷鑿姜鴛漚簇奎賭就鐮殉趴靠突葉頃渺第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),二、肝膽疾病的主要代謝紊亂,（一）蛋白質(zhì)代謝異常急性肝損害時(shí)，血漿蛋白質(zhì)濃度變化不大；慢性肝病時(shí)血漿清蛋白降低，Γ球蛋白升高，出現(xiàn)清蛋白與球蛋白（A/G）的比值降低，甚至倒置。血漿尿素水平呈低值。血氨增高。支鏈氨基酸和芳香族氨基酸的比值下降。,5,耗髓湍角極瀉洛矽韭樂蛇階艦口附炭簇屜素桅仙隕莫隱碰曳決敦爆零板貳第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),磷酸戊糖途徑和糖酵解途徑相對(duì)增強(qiáng)，血中丙酮酸含量可顯著上升嚴(yán)重肝病時(shí)糖有氧氧化及三羧酸循環(huán)運(yùn)轉(zhuǎn)失常血糖濃度難以維持正常水平糖耐糖曲線異常，可呈低平型、高峰型、高坡型等異常曲線血清半乳糖濃度增高,（二）糖代謝異常,6,老厄包洪嚷系熙撤杜塵撂殖連駝釘撥輥啊政終瑟散跌挾輩欺沈棄披劉光戎第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),（三）脂類代謝異常,脂類消化吸收不良肝內(nèi)脂肪氧化分解降低或脂肪合成增多或磷脂合成障礙，不能有效合成脂蛋白輸出，脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)沉積而形成脂肪肝糖代謝異常，脂肪動(dòng)員增加，導(dǎo)致酮血癥血漿膽固醇酯/膽固醇的比值下降血漿脂蛋白電泳譜異常，出現(xiàn)低密度脂蛋白（LDL）積累可出現(xiàn)異常的脂蛋白X（LPX）,7,諱最纓話烙世樣殘鉀獰蒙爛濺慢屁賤莽糖助狐優(yōu)釜付簇喻擒粉瞅悔蓬染壤第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),（四）膽紅素代謝紊亂,1膽紅素BILIRUBIN來源與生成體內(nèi)的鐵卟啉化合物血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素、過氧化氫酶及過氧化物酶。,膽紅素來源,,1）衰老的RBC破壞、降解,2）無效紅細(xì)胞生成,3）非血紅蛋白的血紅素蛋白質(zhì)（細(xì)胞色素、過氧化物酶、肌紅蛋白等）分解,,主流膽紅素（80）,,分流膽紅素（20）,8,鎬諺高坡皆暢縛丟陣恥冕悟醉戳朗咀象游柯徑徑價(jià)琵牲遼渝裹巖拯蚊拼蒸第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),衰老的RBC,網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng),,肝、脾、骨髓（微粒體、胞液）,HB,珠蛋白,,血紅素,氨基酸,,膽綠素,CO和鐵,,,血紅素加單氧酶,O2、NADPH,膽紅素ⅨA,,膽綠素還原酶,膽紅素的性質(zhì)親脂疏水，對(duì)大腦具有毒性作用,9,沸劑玲套鳥汗慨健腑札戚卷泵湃恰拾磺瀝始噴探該酥奠砷等畸接迪姬都孜第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),膽紅素的生成過程,10,帆作袒進(jìn)鉗焊窿賜瑰項(xiàng)腋銥初穎資巧箋墳前陳戀旬臺(tái)瘡匡焉陌束慣嶼刊窄第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),C10,膽紅素空間結(jié)構(gòu)示意圖,11,騎珍幸纓繕寇鈴取湘席勸援哺訣患趾燴球燈今株熄息難斌陛娟吶噪手耳狹第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),2．膽紅素轉(zhuǎn)運(yùn),,膽紅素－清蛋白復(fù)合體（主要）,膽紅素－Α1球蛋白（少部分）,運(yùn)輸形式,競爭結(jié)合劑如磺胺藥，水楊酸，膽汁酸等,,,意義,增加膽紅素在血漿中的溶解度，便于運(yùn)輸。,限制膽紅素自由通過生物膜產(chǎn)生毒性作用,12,蘆懼電遺勵(lì)革撅兢惋悠壕孕凡樟烷塔咨揉贖炯拜股七癌鱗牙撐鈔佛披醒紹第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),3膽紅素在肝細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變,,1）攝取膽紅素可以自由雙向通透肝血竇肝細(xì)胞膜表面進(jìn)入肝細(xì)胞。,肝細(xì)胞攝取膽紅素的有效性取決于,,肝細(xì)胞膜上特異的載體蛋白,肝細(xì)胞內(nèi)兩種受體蛋白Y蛋白和Z蛋白,以“膽紅素－Y蛋白”膽紅素－Z蛋白形式送至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。這是一個(gè)耗能的可逆的過程。,肝內(nèi)運(yùn)輸,,13,溝癢羔鈞侖扣澄找娥垣樟再就妙谷孟鬃仿歇漁候游疤層寓消怯縮桓奇贛踏第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),2）轉(zhuǎn)化,部位滑面內(nèi)網(wǎng)質(zhì)反應(yīng)結(jié)合反應(yīng)（主要結(jié)合物為UDPGA）酶葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶。產(chǎn)物主要為雙葡萄糖醛酸膽紅素，另有少量單葡萄糖醛酸膽紅素、硫酸膽紅素，統(tǒng)稱為結(jié)合膽紅素。目的既有利于膽紅素隨膽汁排泄，又限制其通過生物膜而起到解毒作用。,14,呆商甲苔直穴律泅塊緣妊猶曰滄怒配碉粳掩攬煎灼粟硫瘦絞尚蕾莊牛默娘第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),膽紅素葡糖醛酸一酯UDP葡糖醛酸,,UDP葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶,膽紅素葡糖醛酸二酯UDP（90～95）,膽紅素UDP葡糖醛酸,,膽紅素葡糖醛酸一酯UDP（5～10）,UDP葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶,葡糖醛酸膽紅素的生成,15,澀哲餐搽咀賊耐尉頁掙烯齒籬掂才諧赴險(xiǎn)穗斜欽償且逞慷犢汾痹被富狡廳第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),膽紅素葡糖醛酸二酯的結(jié)構(gòu),C10,16,箱事說搔跨級(jí)哎摻粟伙肝字炊牌茄巡勛后憶斜全帳豁琵箍清呆渭抬雇碩皿第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),3）排泄,結(jié)合膽紅素通過毛細(xì)膽管膜上的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)載體，從肝細(xì)胞毛細(xì)膽管排泄入膽汁中，再隨膽汁排入腸道。轉(zhuǎn)運(yùn)形式逆濃度梯度的能量依賴的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程。,17,援況媳秉溪公旁冀嗽陡摘產(chǎn)軍蛾昧妹搔寞儡閥悔閘賒偽矽襲駁疹彩祈案乃第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),結(jié)合膽紅素與未結(jié)合膽紅素的區(qū)別,未結(jié)合膽紅素,結(jié)合膽紅素,別名,間接膽紅素,直接膽紅素,與葡萄糖醛酸結(jié)合,未結(jié)合,結(jié)合,與重氮試劑反應(yīng),慢或間接反應(yīng),迅速、直接反應(yīng),溶解度,小,大,經(jīng)腎隨尿排出,不能,能,細(xì)胞毒作用,大,無,,,18,閏攣鞍應(yīng)姜志頂尖庚壩屏磺粹滁撐菠次貍泛地插宵很剩雕牽果庸痞究出做第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),4膽紅素在腸管中的變化及其腸肝循環(huán),結(jié)合膽紅素,膽素原,,Β葡萄糖醛酸苷酶,,葡萄糖醛酸,,還原,膽素,,氧化,﹡膽素原中膽素原，糞膽素原，D尿膽素原,﹡膽素I尿膽素，糞膽素，D尿膽素,游離膽紅素,19,兵膏梢涅焉滅瓶段飽訊悉挾券斧灶寞惋湛窿扣睫縫盲談澤護(hù)茬丁鄲餐記雹第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),膽素原與膽素的生成反應(yīng),20,鑰充款菠實(shí)原搖收聾福磐楚樹改憎檻勸影政舀壓筐絢冬墾繃浮檬供蔡舌村第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),膽素原的腸肝循環(huán),膽素原腸肝循環(huán)的概念腸道中有少量的膽素原可被腸粘膜細(xì)胞重吸收，經(jīng)門靜脈入肝，其中大部分再隨膽汁排入腸道，形成膽素原的腸肝循環(huán)BILINOGENENTEROHEPATICCIRCULATION。,21,札尼聰人船負(fù)撤鈍唯著愈騰聳擇張爐締振磐遵宰供系盡丈淘算邀貨搬畦你第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),膽素原腸肝循環(huán)的過程,（10～20）,2～5,22,圣凳技臣廠木疼刑櫥匝瑣率懸芹戮疆燦犁櫥宿角論酚恨吃絨搖扮輕衫掏驗(yàn)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),膽紅素代謝通路,23,兔拱撫景腹坊溜購跳坯提滬胚鍍幻鎮(zhèn)氫語嘩壟匪霖彥艱諒乳睜播巢捎喳蔭第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),5膽紅素代謝紊亂與黃疸,1）黃疸的概念凡能引起膽紅素生成過多、或肝細(xì)胞對(duì)膽紅素的攝取、結(jié)合和排泄過程發(fā)生障礙等因素均可使血中膽紅素增高，而出現(xiàn)高膽紅素血癥HYPERBILIRUBINEMIA。膽紅素是金黃色色素，當(dāng)血清中濃度高時(shí)，則可擴(kuò)散入組織，組織被染黃，稱為黃疸（JAUNDICE）。隱性黃疸342?MOL/L，外觀看不出。顯性黃疸≥342?MOL/L，有黃染的現(xiàn)象。,24,季替漲棕靡凸光閨酒著捅者紳為瞞吹親謊爸肖峻磺鵝夏震緞謗喘兢穿屬墩第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),2）黃疸的類型,根據(jù)肉眼可否見到黃染現(xiàn)象分為顯性黃疸和隱性黃疸。根據(jù)發(fā)病原因可分為溶血性、肝細(xì)胞性和梗阻性黃疸。根據(jù)病變部位可分為肝前性、肝性和肝后性黃疸。根據(jù)血中升高的膽紅素的類型分為高未結(jié)合膽紅素性黃疸及高結(jié)合膽紅素性黃疸。,25,酪訴冷塢趨歧佑蔑蹦囤唾杠廬諜洛課繡宗喘侄材詐柯猴藕焙橢許雞泛頃今第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),3）黃疸的成因與發(fā)生機(jī)制,膽紅素形成過多肝細(xì)胞處理膽紅素的能力下降膽紅素在肝外的排泄障礙,26,膿債硼迢勵(lì)琶詩公詠斂雙胃圓澗蔗杉報(bào)瓶闊燴騙異筆蕩楔亢疆度堅(jiān)孤霓宙第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),（1）膽紅素形成過多溶血性黃疸,成因溶血性先天性的紅細(xì)胞膜、血型不合輸血、脾亢等溶血。非溶血性如惡性貧血、珠蛋白生成障礙等無效造血。,27,環(huán)截砌歲扮稍胡竿爆柜荒掙原板御鄂冬碾?yún)材I口嘿嫩堵絡(luò)記闊瘤忌巳欲纓第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),代謝特點(diǎn)血中未結(jié)合膽紅素含量增高；總膽紅素升高，結(jié)合膽紅素僅為總膽紅素的20。未結(jié)合膽紅素不能由腎小球?yàn)V過，故尿中無膽紅素排出。肝最大限度地處理和排泄膽紅素，因而腸道中形成的膽素原增多，糞便排出的膽素原也增多，糞便顏色加深。尿中排出的膽素原也相應(yīng)增加，膽紅素陰性。高未結(jié)合膽紅素血癥,28,擎慨遼疚呂冕戳炕謅涵辱氓粟冕葉叭壇伴梗柵匡乍社銷逼露髓另沽馬鍺雀第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),成因膽紅素?cái)z取障礙膽紅素結(jié)合障礙膽紅素轉(zhuǎn)運(yùn)障礙膽紅素排泄障礙,（2）肝細(xì)胞處理能力下降肝細(xì)胞性黃疸,臨床上可見于新生兒生理性黃疸，肝內(nèi)膽汁淤滯、感染、化學(xué)試劑、毒物、腫瘤等導(dǎo)致的肝病以及先天性遺傳缺陷如GILBERT綜合征、CRIGLERNAJJAR綜合征等。,29,雞昨稼鏟投碗焉勵(lì)幸賞塢鐵未鵬偏熾羔妥誤繕叫猛稗阻找著悲亂劍東舶扣第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),代謝特點(diǎn)血中兩種膽紅素含量都增高?？偰懠t素升高，結(jié)合膽紅素占總膽紅素的35以上。結(jié)合膽紅素可由腎小球?yàn)V過，尿中出現(xiàn)膽紅素。結(jié)合膽紅素在肝內(nèi)生成減少，糞便顏色變淺。尿中膽素原含量變化不定。一方面是從腸吸收的膽素原不能有效地隨膽汁排出，使血中膽素原增加，尿中膽素原增加；另一方面是肝實(shí)質(zhì)性損傷及炎癥、腫脹等造成肝、膽管阻塞，結(jié)合膽紅素不能排入腸道，尿中膽素原減少。高未結(jié)合和結(jié)合膽紅素血癥,30,丹錢祟兒喲垂桓摘規(guī)柵瘁師傅圭桃靜凋近拆傳睛念貝躬償永咐氖疽仗喬該第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),（3）膽紅素排泄障礙阻塞性黃疸,成因膽道梗阻致膽紅素排泄障礙。如膽結(jié)石、膽道蛔蟲或腫瘤壓迫以及DUBINJOHNSON綜合征等所致的膽道梗阻,31,銀等喳迸蕊甩訛啊篆蔬散蛛覺竊贓您旬知稠番跋湍侍河明綠馱惋擲病鞠滿第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),代謝特點(diǎn)血中結(jié)合膽紅素含量增高，總膽紅素升高，結(jié)合膽紅素占總膽紅素的50以上。結(jié)合膽紅素能被腎小球?yàn)V過，尿中出現(xiàn)膽紅素。膽紅素不易或不能隨膽汁排入腸道，因而腸腔膽素原很少或缺失，糞便顏色變淺或呈灰白色。尿中排出的膽素原也相應(yīng)變少，膽紅素陽性。高結(jié)合膽紅素血癥,32,間福銀員趙十回吊搔炳乏富拉電尾我瓣鏟狗手敖拇幼頗釩窘廖喂鎳孺習(xí)黎第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),新生兒生理性黃疸的成因（ICTERUSNEONATORUM）,生下后，血液內(nèi)原來過多的紅細(xì)胞被破壞，未結(jié)合膽紅素生成過多。肝細(xì)胞內(nèi)載體蛋白Y蛋白少，肝細(xì)胞攝取未結(jié)合膽紅素的能力不足。肝細(xì)胞內(nèi)膽紅素葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶生成不足，結(jié)合膽紅素生成少。肝細(xì)胞膽汁分泌器發(fā)育不完善，對(duì)肝膽汁分泌的潛力不大。母乳中含有孕二醇，對(duì)葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶有抑制作用。,33,檄蔥某勢客罪毗匡晴譜惺秤辦讕薩巷予籬樓隱獰渣皿桃烹頂蕊樟必緬狹咸第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),4）黃疸的實(shí)驗(yàn)室檢查,膽紅素代謝實(shí)驗(yàn)（見表1）血清酶學(xué)檢查血脂分析血液學(xué)檢查（見表2）,34,睡瓣芹居誘詫弄碑臭晤襄弗笑腆騙副甘渙淫征磊鼎為軒帕嬸棄他怔忠酉足第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),表1三種類型黃疸的實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷,35,錦嫂硯涵逐臘漂諱龜醬美歉尉厲著鎊汕萬洛答殘斟乓貍史滑墮骸寂窖宦隊(duì)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),項(xiàng)目肝細(xì)胞性黃疸梗阻性黃疸血清蛋白電泳圖譜ALB減少，Γ球蛋白↑球蛋白明顯↑脂蛋白X多為陰性明顯↑血清酶學(xué)ALT肝炎急性期↑正?；蛟龈逜LP正?；蜉p度增高明顯升高LAP可增高明顯升高ΓGT可增高明顯升高其他方面凝血酶原時(shí)間延長，VITK不能糾正延長，VITK可以糾正膽固醇降低，尤其CHE明顯降低增高CA/CDCA﹤1﹥1,表2肝細(xì)胞性黃疸和梗阻性黃疸實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷,,,36,邢暖寥貉釋諜框譚攢烘吊萬典屁蕾其狡豫錐礁卒騾苫仁施絨成厲瓦般冶處第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),（四）膽汁酸代謝及其異常,1膽汁酸的類型,按結(jié)構(gòu)分按來源分,,游離膽汁酸FREEBILEACIDCA,CDCA,DCA,LCA,結(jié)合膽汁酸CONJUGATEDBILEACID與甘氨酸或牛磺酸結(jié)合,,初級(jí)膽汁酸PRIMARYBILEACIDCA,CDCA,次級(jí)膽汁酸SECONDARYBILEACIDDCA,LCA,37,勻繩粥慣弧湍力跪船讕昨?yàn)⒆抗芸焐葡瓷诿泳┧Ｃ徵犎鎵]病袖包訣凜第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),初級(jí)膽汁酸,概念－－是肝細(xì)胞以膽固醇為原料直接合成的膽汁酸．類型－－膽酸CA、鵝脫氧膽酸CDCA及相應(yīng)結(jié)合型膽汁酸。部位－－肝細(xì)胞的胞液和微粒體中原料－－膽固醇※膽固醇轉(zhuǎn)化成膽汁酸是其在體內(nèi)代謝的主要去路,38,腮亭唬瓜汕忙乓裹內(nèi)營鞭別疥勵(lì)刃撒膩駱皇榔元陳肌潞隴麻笨賽澤訟山贏第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),次級(jí)膽汁酸,概念－－在腸道細(xì)菌作用下初級(jí)膽汁酸7Α羥基脫氧后生成的膽汁酸類型－－脫氧膽酸DCA、石膽酸LCA及相應(yīng)結(jié)合型膽汁酸部位－－小腸下段和大腸,39,現(xiàn)祈殘失沸輻凄爬輯輪癟穎聰訝枉烏跟歧凜更酒埔掂藍(lán)鉸廢丫廚四討爍交第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),2膽汁酸代謝,7Α羥化酶,12Α羥化酶,膽固醇,7Α羥膽固醇,7Α羥4膽固烯3酮,7Α，12Α二羥4膽固烯3酮,脫氧膽酸（3Α，7Α二羥膽固烷酸，CDCA）,膽酸（3Α，7Α，12Α三羥膽固烷酸，CA）,,,,,,,,還原、側(cè)鏈修飾,,,氧化異構(gòu),1）初級(jí)膽汁酸形成,40,妥騰措余瘴篙幻鄙池材突熙臆缽蟄華布顯朱嫡卵潑此示膠貓氟潘蓄甕填圖第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),,2）次級(jí)膽汁酸形成,,7Α脫羥酶,膽酸,脫氧膽酸,初級(jí)膽汁酸,次級(jí)膽汁酸,41,帆驅(qū)莆祿卵緣唐掀足襪洞宅土銅邊演蝦服疫宛洗冗笨蛻甭命腸迭誹茍衛(wèi)軌第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),,初級(jí)膽汁酸,鵝脫氧膽酸,石膽酸,次級(jí)膽汁酸,7Α脫羥酶,,42,斯了鴿木棒寅槍橙冉瘁厄棋黨星裂程豬祖踴阜馴植凡虧寬人乖身算跡轉(zhuǎn)游第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),概念膽汁酸隨膽汁排入腸腔后，通過重吸收經(jīng)門靜脈又回到肝，在肝內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)合型膽汁酸，經(jīng)膽道再次排入腸腔的過程。意義將有限的膽汁酸反復(fù)利用以滿足人體對(duì)膽汁酸的生理需要，促進(jìn)脂類的消化吸收。,3膽汁酸腸肝循環(huán),43,星祖喚趴瞅選閱批絮壁攢谷釩巢植哄煌塊綱掃患久謄鑰睹輔郴潛氛全咐訣第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),膽汁酸腸肝循環(huán)的過程,44,全躺祖偷胡稼候淘鴻必直省映禽紫寅允嗚暈寄叁鞋貯躍學(xué)宜奸丈裸烹帆規(guī)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),4膽汁酸代謝異常,肝膽疾病時(shí)的代謝異常腸道疾病時(shí)的代謝異常高脂蛋白血癥時(shí)的代謝異常膽汁酸代謝遺傳性缺陷,45,趁孫喘申凜鑄居擯緩削是莎每創(chuàng)找費(fèi)惟辟花鎬哩斑宣廚授明季冊逃誡叭仰第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),肝膽疾病與TBA,1肝膽疾病患者，血清膽汁酸水平無區(qū)別升高2對(duì)肝功能評(píng)估具有較高的診斷靈敏度，可作為檢測慢性肝炎中肝損傷的一個(gè)敏感指標(biāo)，用來區(qū)分活動(dòng)性與非活動(dòng)性肝炎。3TBA檢測可用來區(qū)別高膽紅素血癥和膽汁淤積4CA/CDCA比值可作為膽道梗阻性病變和肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞性病變的鑒別指標(biāo)。比值＞１，見于膽道梗阻性病變；反之，見于肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞性病變。,46,綠構(gòu)乃傻缽覓奎接鉤爬焙匪傲溢頹撻公噶皖戀綴曳淹葷縫祈蟻硬宏拱啟眠第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),腸道疾病與TBA,在小腸疾病時(shí)，可引起膽汁酸代謝異常，如回腸切除、炎癥或分流（如造漏）等，因膽汁酸的腸肝循環(huán)受阻，膽汁酸回到肝臟的量減少，血清膽汁酸水平降低；同時(shí)，由于膽汁酸返回肝臟減少，反饋抑制減弱，致肝臟膽汁酸的合成加速，血清膽固醇濃度減低?？梢娧迥懼崴浇档褪腔啬c功能紊亂的一個(gè)反映。,47,咎凈巍先慰劇歷日爆迄姻電耿雛嗆嫂脅勇儲(chǔ)妝愛痹淡尉奪此皆興假叉燥嚴(yán)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),高脂蛋白血癥與膽汁酸代謝,膽汁酸的生成是內(nèi)源性膽固醇的主要代謝去路，而膽汁酸的合成又依賴自身的負(fù)反饋調(diào)控。肝細(xì)胞依靠膽汁酸的乳化及其形成的混合微團(tuán)作用而隨膽汁分泌排泄膽固醇，因此膽汁酸的合成和分泌必然影響膽固醇的排泄。膽汁酸協(xié)助食物膽固醇的吸收，而吸收的膽固醇可直接調(diào)控腸壁細(xì)胞及肝細(xì)胞內(nèi)膽固醇的合成。因此，高脂蛋白血癥時(shí)的代謝紊亂必然涉及膽汁酸的代謝異常。,48,撕盞補(bǔ)粒得浙屹泉?dú)w絮凍喂可毖址罕莢蔭吩劊供鍵泉卿柞卯兵較尼衍各蟬第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),一、血清蛋白質(zhì),急性肝炎肝硬化慢活肝膽汁性肝硬化阻黃肝癌白蛋白N或↓↓↓↓↓N或↓↓球蛋白N或↑↑↑↑NNΑ1↑Α2NN↑↑↑↑Β↑↑↑↑↑↑↑↑NΓ↑↑↑↑↑↑↑NN,,,肝病時(shí)的血清蛋白質(zhì)異常,,備注↓表示降低，↑表示上升，N表示正常,49,第二節(jié)肝膽疾病生物化學(xué)檢測指標(biāo),寵讕丸遭碰失雨珊牙濘同的該較騰絲鼻蔭毯值膘全換孺敝蕭駿餌齲磁廊遵第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),二、血氨,檢測方法可分為直接法和間接法。直接法指不需從全血中分離氨，包括酶法和氨電極法；間接法指先從全血中分離出氨再進(jìn)行測定，包括微量擴(kuò)散法、離子交換法。還有較新的干化學(xué)法。目前應(yīng)用較多的是谷氨酸脫氫酶速率法。,50,箍蔽噪浦揪佐茫櫥鎢廬央拯劊灌蹲洶秀愈弓迅狀摩駁秘粘身逐乘咖耿契貍第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),參考區(qū)間18～72ΜMOL/L（酶法）臨床意義主要用于肝昏迷的監(jiān)測和處理。高血氨有神經(jīng)毒性，容易引起肝性腦病。可用于兒童REYE綜合征的診斷。血氨降低見于低蛋白飲食、貧血。,51,拿搓誕僳緯第呼裕壘望筑牲繕票禹霜戌沏斥陵摹遍頌廢洞撒鄧醒坍朵茄望第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),三、血清總膽紅素、結(jié)合膽紅素及非結(jié)合膽紅素,檢測方法血清膽紅素及其組分測定分為重氮鹽法、膽紅素氧化酶法、高效液相色譜法、導(dǎo)數(shù)分光光度法、直接分光光度法及干片分光光度法等。其中重氮鹽改良JG（JENDRASSIKANDGROFMETHOD，JG）法和膽紅素氧化酶法是臨床最常用的方法。,52,磨醒匠珍伏滿陣槐恭扳戈章預(yù)柞佩羹嘩狠蔬爾呼癱最起引灤茫彎此羌更短第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),血清總膽紅素（STB）新生兒0～1D34～103ΜMOL/L1～2D103～171ΜMOL/L3～5D68～137ΜMOL/L成人34～171ΜMOL/L結(jié)合膽紅素（CB）0～68ΜMOL/L未結(jié)合膽紅素（UCB）17～102ΜMOL/L,參考區(qū)間,53,嗡黍溶淖馭攬查莖廬癡衡母秸懦攙渭坦烙搞狗邁仁熱衫吃薛于撫秩鈕晨模第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),臨床意義判斷有無黃疸、黃疸程度及演變過程根據(jù)黃疸程度推斷黃疸病因根據(jù)膽紅素升高程度判斷黃疸類型根據(jù)結(jié)合膽紅素與總膽紅素比值，可協(xié)助鑒別黃疸類型,54,滑軟絹諺責(zé)疵腸腎緣匆扁開怖頃煩懂孔滴酗趾帥鼎娘遵餡刁更字脫微恭傾第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),三種類型黃疸的實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷,55,他中轅川癸妖帕塹踞子不勻扔謂鋤避盟駒彝蹤摩膳疊才雜收病汕閉悅快盎第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),四、血清總膽汁酸及結(jié)合膽酸,檢測方法常用的測定方法有高效液相色譜法、放射免疫分析法、酶免疫分析法。酶法中又可分為酶熒光法、酶比色法和酶循環(huán)法。其中酶比色法可用于手工操作，亦可用于自動(dòng)分析，應(yīng)用較廣。酶循環(huán)法有其高敏感度，高特異性特點(diǎn)，故成為目前推薦檢測血清總膽汁酸的方法。,,,,,,56,洗茅芝倔寺病梢毀履坑晃莆宣木欺廣擦蛆獰荔馮憶蟄窩喚英撂捉傘虎鈕績第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),參考區(qū)間總膽汁酸49±238ΜMOL/L，餐后2HTBA為822±291ΜMOL/L（酶法）,57,綽戰(zhàn)綻誠窒叫蕊虐服焙潭回競恍似疆藐蓉頌迄菲纏聰天蘆性埃倔猜鍺辟險(xiǎn)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),臨床意義反映肝細(xì)胞損害的一個(gè)敏感指標(biāo)，不僅用于臨床診斷，而且還能反映病情和估計(jì)疾病預(yù)后。病理性增高見于肝細(xì)胞損害（急慢性肝炎、肝硬化等）、膽道梗阻（肝內(nèi)外膽管梗阻）、門脈分流等。CA/CDCA比值可作為膽道梗阻性病變和肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞性病變的鑒別指標(biāo)。比值＞１，見于膽道梗阻性病變；反之，見于肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞性病變。,58,凍幫國面擴(kuò)簿堵埋莆弊請(qǐng)鄧?yán)迥缆櫽僬J(rèn)硒埋茄掃戴證啼螢湊頻琢艙佬廉敢第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),五、血清酶類,（一）血清轉(zhuǎn)氨酶及其同工酶原理轉(zhuǎn)氨酶的測定方法有許多種，其中以賴氏法最常用，由于此法操作簡便、經(jīng)濟(jì)，一些小型實(shí)驗(yàn)室仍在使用。目前，國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室多采用連續(xù)監(jiān)測法進(jìn)行測定。,59,竿銻怯褲砸障實(shí)門半寥俠迸鈉姻璃誠邑濤譏德唐?；翁鸩缢烊f量恫釋猴第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),ALT速率法測定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式為L丙氨酸Α酮戊二酸L谷氨酸L丙酮酸丙酮酸NADHHL乳酸NAD,LD,ALT,60,率騷芒顫施棠刷矗刷亞巧笑佯猖愈朔殿秋臆漸忠字趁非腑棉瑞孩芍罐枝斥第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi)第16章肝膽疾病的生物化學(xué)診斷人衛(wèi),AST速率法測定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式為,L門冬氨酸Α酮戊二酸,草酰乙酸NADHH,L蘋果酸NAD,草酰乙酸L谷氨酸,AST,MD,上述偶聯(lián)反應(yīng)中，NADH的氧化速率與標(biāo)本中酶活性呈正比，可在340NM檢測吸光度下降速率。根據(jù)線性反應(yīng)期吸光

簡介：第六章維生素與輔酶,維生素機(jī)體維持正常功能（主要是調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝）所必需，但自身不能合成或合成量很少，必需由食物供給的一組低分子量有機(jī)物質(zhì)。長期缺乏某種維生素會(huì)導(dǎo)致維生素缺乏癥,第一節(jié)概述,一、概念,二、分類,三、缺乏病發(fā)生原因,特殊原因胃炎可導(dǎo)致維生素B12缺乏，造成巨幼紅細(xì)胞性貧血。原因是萎縮性胃炎導(dǎo)致內(nèi)因子分泌不足，VB12吸收障礙,食物維生素不足或食物烹調(diào)方法不當(dāng)和貯存時(shí)間長，維生素破壞與丟失。造成維生素?cái)z入量不足。,,消化系統(tǒng)疾病造成吸收障礙。如長期慢性腹瀉，消化道梗阻，瘺管，膽道疾病等。,,兒童，孕婦，乳母及重體力勞動(dòng)者及長期高熱和慢性消耗性疾病患者，維生素的需要量高于正常人，但未予足夠的補(bǔ)充。,長期服用抗菌藥物，抑制了腸道細(xì)菌的生長，從而造成由腸道細(xì)菌合成的某些維生素（K，B6，葉酸，B1，B2，PP，生物素，泛酸的缺乏。,第二節(jié)脂溶性維生素,脂溶性維生素維生素A、D、E、K,一、維生素A（抗干眼病維生素）,1、維生素A的化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì),維生素A的活性形式視黃醇、視黃醛、視黃酸,化學(xué)本質(zhì)含Β白芷酮環(huán)的多聚異戊二烯復(fù)合物,維生素A原Β胡蘿卜素性質(zhì)紫外吸收（325NM）；易被氧化；對(duì)光、熱不穩(wěn)定。,主要類型A1（視黃醇）、A2（脫氫視黃醇）,（1）Β胡蘿卜素可作為抗氧化劑捕捉自由基（2）11順視黃醛構(gòu)成視覺細(xì)胞內(nèi)的感光物質(zhì)（3）維生素A磷酸酯參與糖蛋白合成（4）視黃醇和視黃酸具有類固醇激素樣作用，影響細(xì)胞分化，促進(jìn)機(jī)體生長和發(fā)育,3、維生素A的作用,維生素A在血漿中的運(yùn)輸與視黃醇結(jié)合蛋白結(jié)合,2、維生素A的代謝轉(zhuǎn)變,1分子Β胡蘿卜素可生成2分子維生素A,4、維生素A的缺乏癥,缺乏癥夜盲癥、干眼病、皮膚干燥和毛囊丘疹,（6）與上皮細(xì)胞的正常分化直接相關(guān)，維持上皮組織的結(jié)構(gòu)和功能。,（7）與癌癥發(fā)生呈負(fù)相關(guān),（5）增強(qiáng)機(jī)體抵抗力作用,二、維生素D（抗佝僂病維生素/鈣化醇）,1、維生素D的化學(xué)本質(zhì)和性質(zhì),化學(xué)本質(zhì)類固醇激素,主要類型D2（麥角鈣化醇）、D3膽鈣化醇,維生素D3原7脫氫膽固醇維生素D2原麥角固醇,維生素D3在肝內(nèi)的儲(chǔ)存及血液中運(yùn)輸?shù)男问?5OHD3,3、活性維生素D3生化作用,活性維生素D3形式1,25OH2D3,升高血鈣、升高血磷，促進(jìn)骨骼生成和鈣化,缺乏癥佝僂癥（兒童）、軟骨癥（成人）,4、缺乏癥,活性維生素D3生成的關(guān)鍵酶1Α羥化酶,2、維生素D的代謝轉(zhuǎn)變,維生素D3在血中的運(yùn)輸與維生素D結(jié)合蛋白結(jié)合,三、維生素E（抗不育維生素或生育酚）,1、維生素E的化學(xué)本質(zhì)和性質(zhì),維生素E的化學(xué)本質(zhì)苯駢二吡喃衍生物,維生素E的主要類型Α、Β、Γ和Δ,Α生育酚生理活性最高性質(zhì)對(duì)氧敏感；易被氧化；對(duì)酸、堿和熱穩(wěn)定；可被紫外線破壞，259NM有吸收帶。,促進(jìn)血紅素合成,缺乏癥動(dòng)物缺乏時(shí)可引起生殖器官受損而不育，人類尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)不育癥；貧血；神經(jīng)障礙,3、缺乏癥少見,2、活性維生素E的生理功能,維生素E與生殖功能有關(guān),維生素E是最重要的天然抗氧化劑避免脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)生,四、維生素K（凝血維生素）,1、維生素E的化學(xué)本質(zhì)和性質(zhì),維生素K的化學(xué)本質(zhì)2甲基1，4萘醌的衍生物,維生素K的主要類型K1（綠葉）和K2（腸道）,2、維生素K的生理功能,促進(jìn)肝合成凝血酶原及凝血因子VII、IX和X,3、維生素K的缺乏癥,凝血時(shí)間延長，易出血，但一般不缺乏,第三節(jié)水溶性維生素,水溶性維生素維生素B、C,一、維生素B1（抗腳氣病維生素或硫胺素）,1、化學(xué)本質(zhì),化學(xué)本質(zhì)嘧啶環(huán)＋噻唑環(huán),活性形式焦磷酸硫胺素（TPP）,2、主要生理功能,TPP是Α酮酸氧化脫羧酶系的輔酶，參與糖代謝。,TPP抑制膽堿酯酶活性。,3、缺乏癥,腳氣病和末梢神經(jīng)炎；食欲不振、消化不良。,二、維生素B2（核黃素）,1、化學(xué)本質(zhì),化學(xué)本質(zhì)核醇＋6，7二甲基異咯嗪,活性形式黃素單核苷酸（FMN）和黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）,2、主要生理功能,FMN和FAD是許多氧化還原酶的輔酶，是氫的傳遞體,3、缺乏癥,口角炎、唇炎、舌炎、陰囊皮炎、眼瞼炎、角膜血管增生等,三、維生素PP（抗癩皮病維生素）,1、化學(xué)本質(zhì),化學(xué)本質(zhì)吡啶衍生物,活性形式尼克酰胺二核苷酸（NAD）和尼克酰胺二核苷酸磷酸（NADP）,2、主要生理功能,NAD和NADP是多種不需氧脫氫酶的輔酶，是氫的傳遞體,3、缺乏癥癩皮病,尼克酸可抑制脂肪動(dòng)員，降低VLDL合成。,主要類型尼克酸及尼克酰胺,肝內(nèi)可將少量色氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素PP,四、維生素B6（抗皮炎維生素）,1、化學(xué)本質(zhì),化學(xué)本質(zhì)吡啶衍生物,活性形式磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺,2、主要生理功能,磷酸吡哆醛也是Δ氨基Γ酮戊酸（ALA）合成酶的輔酶，參與血紅素的合成,磷酸吡哆醛是糖原磷酸化酶的重要組分,主要類型吡哆醇、吡哆醛和吡哆胺,磷酸吡哆醛是轉(zhuǎn)氨酶和脫羧酶的輔酶，參與傳遞氨基和脫羧基,五、泛酸（遍多酸）,1、化學(xué)本質(zhì),化學(xué)本質(zhì)Β丙氨酸＋二羥二甲基丁酸,活性形式?；d體蛋白（ACP）和輔酶A,2、主要生理功能,ACP和輔酶A是酰基轉(zhuǎn)移酶的輔酶，參與?；\(yùn)轉(zhuǎn),3、缺乏癥,“腳灼熱綜合征”,六、生物素,1、化學(xué)本質(zhì),化學(xué)本質(zhì)噻吩與尿素相結(jié)合的駢環(huán)＋戊酸,活性形式生物素,2、主要生理功能,生物素是體內(nèi)多種羧化酶的輔酶，參與羧化反應(yīng),3、缺乏癥,一般不缺乏,主要類型Α生物素（蛋黃）和Β生物素（肝）,七、葉酸（蝶酰谷氨酸）,1、化學(xué)本質(zhì),化學(xué)本質(zhì)蝶呤啶＋對(duì)氨基苯甲酸＋L谷氨酸,活性形式四氫葉酸,2、主要生理功能,四氫葉酸是一碳單位轉(zhuǎn)移酶的輔酶，作為一碳單位的載體,3、缺乏癥,巨幼紅細(xì)胞性貧血,八、維生素B12（抗惡性貧血維生素或鈷胺素）,1、化學(xué)本質(zhì),化學(xué)本質(zhì)咕啉衍生物,活性形式甲基鈷胺素，5′脫氧腺苷鈷胺素,2、主要生理功能,甲鈷胺素是甲基轉(zhuǎn)移酶的輔酶，參與同型半胱氨酸的甲基化反應(yīng),3、缺乏癥,巨幼紅細(xì)胞貧血（惡性貧血），同型半胱氨酸尿癥,是目前所知唯一含有金屬元素的維生素,5′脫氧腺苷鈷胺素是L甲基丙二酸輔酶A變位酶的輔酶，參與丙二酰輔酶A轉(zhuǎn)變?yōu)殓牾］o酶A的反應(yīng),九、硫辛酸,1、化學(xué)本質(zhì),化學(xué)本質(zhì)6,8二硫辛酸,活性形式硫辛酸、二氫硫辛酸,2、主要生理功能,硫辛酸是Α酮酸氧化脫羧酶系的輔酶,保護(hù)巰基酶免受重金屬離子的毒害,硫辛酸具有抗脂肪肝、降低血膽固醇的作用,十、維生素C（L抗壞血酸）,1、化學(xué)本質(zhì),化學(xué)本質(zhì)6碳多羥基脂肪酸,活性形式L抗壞血酸（主要）和L脫氫抗壞血酸,2、主要生理功能,（1）參與多種羥化反應(yīng),主要類型抗壞血酸和脫氫抗壞血酸,維生素C是脯氨酸羥化酶及賴氨酸羥化酶的輔助因子，促進(jìn)膠原蛋白合成維生素C是7Α羥化酶的輔酶，催化膽固醇轉(zhuǎn)化維生素C參與芳香族氨基酸代謝,3、缺乏癥,壞血病,使難于吸收的三價(jià)鐵還原成易于吸收的二價(jià)鐵保護(hù)維生素A、E及B免遭氧化，促進(jìn)葉酸轉(zhuǎn)變成四氫葉酸,（2）參與氧化還原反應(yīng)維持巰基酶和谷胱甘肽的還原狀態(tài)，發(fā)揮解毒作用使紅細(xì)胞中高鐵血紅蛋白還原成血紅蛋白，恢復(fù)其運(yùn)氧能力,維生素A的消化吸收維生素A酯/胡蘿卜素→維生素A→維生素A酯→以脂蛋白形式儲(chǔ)存于儲(chǔ)脂細(xì)胞。,維生素A酯多存在于動(dòng)物的肝、蛋黃、魚肝油、奶汁；植物中不存在維生素A，但綠葉蔬菜、胡蘿卜、玉米等存在多種胡蘿卜素,維生素A在血液中運(yùn)輸VA（維生素A）RBP（視黃醇結(jié)合蛋白）PA（前清蛋白）,維生素A的代謝轉(zhuǎn)變,脂溶性維生素,維生素A的生理功能,脂溶性維生素,維生素A的需要量正常人每日維生素A生理需要量為800～1000視黃醇當(dāng)量，或2600～3300國際單位。維生素A過量維生素A可在肝內(nèi)積存，故長期大量服用維生素A會(huì)引起中毒。,脂溶性維生素,缺乏病夜盲癥、干眼病、皮膚干燥、毛囊丘疹,維生素D的結(jié)構(gòu),脂溶性維生素,維生素D的代謝轉(zhuǎn)變,脂溶性維生素,脂溶性維生素,維生素D的生理功能,脂溶性維生素,缺乏病當(dāng)維生素D缺乏或轉(zhuǎn)化障礙時(shí)，兒童骨鈣化不良，稱佝僂病，成人引起軟骨病。,D3主要含于肝、奶及蛋黃中，以魚肝油含量最豐富。植物油和酵母中含有不被人體吸收的麥角固醇，在日光或紫外線照射下可轉(zhuǎn)變?yōu)镈2需要量正常成人每日維生素D的需要量為5～10ΜG，或200～400IU。過多癥長期服用維生素D超過需要量10～100倍時(shí)，可引起中毒（嘔吐、腹瀉、頭痛等），嚴(yán)重時(shí)形成腎結(jié)石,脂溶性維生素,Α生育酚,維生素E的結(jié)構(gòu),脂溶性維生素,需要量正常成人812Α生育酚當(dāng)量（ΑTE）/日，（1ΑTE1MGΑ生育酚）,缺乏病動(dòng)物缺乏時(shí)可引起生殖器官受損而不育，人類尚未發(fā)現(xiàn)因維生素E缺乏而引起的不育癥。,食物來源植物油、萵苣,維生素K的結(jié)構(gòu),脂溶性維生素,脂溶性維生素,維生素K的生理功能,脂溶性維生素,需要量成人每日對(duì)維生素K的需要量為60～80ΜG,K1存在于綠葉蔬菜中，K2是人體腸道細(xì)菌的代謝產(chǎn)物。,缺乏病缺乏時(shí)，凝血因子合成障礙，凝血時(shí)間延長，易出血。偶見于新生兒及膽管阻塞患者。,硫胺素的結(jié)構(gòu),水溶性維生素,來源維生素B1主要存在于種子外皮和胚芽中，米糠、麥麩、豆類中含量最為豐富。性質(zhì)酸性液中穩(wěn)定，中、堿性液中易被氧化；脫氫硫胺素藍(lán)色熒光（定量測定）需要量正常成人每日需要10～15MG。缺乏癥腳氣病、末梢神經(jīng)炎,水溶性維生素,水溶性維生素,維生素B2的結(jié)構(gòu),FMN,AMP,核黃素RIBIFLAVIN,維生素B2和黃素單核苷酸（FMN）黃素腺嘌呤二核苷（FAD）,來源維生素B2分布很廣，在酵母、肝、腎、蛋、奶及大豆中含量豐富，易于吸收。性質(zhì)酸性液中穩(wěn)定，在堿性液中易被熱和光破壞；水溶液呈黃綠色熒光（定量測定）需要量正常成人每日需要12～15MG。缺乏癥維生素B2缺乏時(shí)可引起口角炎、唇炎、舌炎、陰囊皮炎、眼瞼炎、角膜血管增生等,水溶性維生素,水溶性維生素,泛酸的結(jié)構(gòu),泛酸在食物中普遍存在，尤其動(dòng)物組織、谷物及豆類等食物含量豐富。腸內(nèi)細(xì)菌可合成性質(zhì)淡黃色油狀物；在酸性溶液中易分解缺乏癥在二戰(zhàn)時(shí)的遠(yuǎn)東戰(zhàn)俘中曾有“腳灼熱綜合癥”，為泛酸缺乏所致。,水溶性維生素,R,,,AMP,尼克酰胺核苷酸,維生素PP和尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（磷酸）NADP,NADPHH,NADP2H,NICOTINAMIDE,來源維生素PP廣泛存在于自然界，以酵母、花生、谷類、豆類、肉類和動(dòng)物肝中最豐富；肝中少量色氨酸能轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素PP。玉米中色氨酸和煙酰胺含量低。性質(zhì)穩(wěn)定。在260NM有吸收；與溴化氫生成黃綠色化合物（定量測定）需要量15～20MG缺乏癥尼克酸缺乏病稱為糙皮病，主要表現(xiàn)為皮炎、腹瀉及癡呆等。抗結(jié)核藥物異煙肼的結(jié)構(gòu)與其相似。過量癥血管擴(kuò)張、痤瘡、胃腸不適,水溶性維生素,水溶性維生素,維生素B6的結(jié)構(gòu),來源自然界的維生素B6存在于種子、谷類、肝、肉類及綠葉蔬菜中。腸道細(xì)菌可合成。性質(zhì)對(duì)酸穩(wěn)定，在堿性溶液中易被破壞，對(duì)光敏感；與三氯化鐵呈紅色。需要量2MG缺乏癥維生素B6缺乏時(shí)可出現(xiàn)低血色素小細(xì)胞性貧血和血清鐵增高。,水溶性維生素,水溶性維生素,生物素的結(jié)構(gòu),水溶性維生素,生物素的功能,來源Α生物素主要存在于蛋黃中；Β生物素主要存在于肝中。腸道細(xì)菌合成。性質(zhì)無色針狀晶體，對(duì)熱、酸堿穩(wěn)定，易被氧化劑破壞。缺乏癥生物素來源廣泛，人體腸道細(xì)菌也能合成，很少出現(xiàn)缺乏癥。生物素缺乏時(shí)可出現(xiàn)疲乏、食欲不振、惡心嘔吐、皮炎及脫屑性紅皮病。,水溶性維生素,水溶性維生素,葉酸的結(jié)構(gòu),來源葉酸廣泛存在于肉類、鮮果及蔬菜中，人類腸道細(xì)菌也能合成葉酸性質(zhì)淡黃色晶體，在水溶液中易被光破壞需要量200～400ΜG缺乏癥葉酸缺乏時(shí)，DNA合成受到抑制，可造成巨幼紅細(xì)胞性貧血。,水溶性維生素,水溶性維生素,維生素B12的結(jié)構(gòu),來源維生素B12廣泛存在于動(dòng)物性食品中，常結(jié)合于蛋白質(zhì)上。人腸道細(xì)菌合成。性質(zhì)紅色晶體，在中性溶劑中耐熱；被日光和氧化劑破壞；在強(qiáng)酸強(qiáng)堿下易分解。需要量2～3ΜG缺乏癥維生素B12缺乏很少見，偶見于年長者由于內(nèi)因子產(chǎn)生不足或嚴(yán)重吸收障礙疾病和長期素食者。,水溶性維生素,水溶性維生素,硫辛酸,二氫硫辛酸,水溶性維生素,維生素C的結(jié)構(gòu),水溶性維生素,維生素C的功能,來源存在于新鮮水果、蔬菜，特別是番茄、橘子、鮮棗中含量較高性質(zhì)無色片狀晶體，味酸；是還原劑（定量測定）；在酸性溶液中穩(wěn)定；易被熱、光和某些金屬離子破壞。需要量60MG,水溶性維生素,

簡介：指人體每日需要量在100MG以下的化學(xué)元素，主要包括鐵、碘、銅、鋅、錳、硒、氟、鉬、鈷、鉻等,二、微量元素,一、維生素A（抗干眼病維生素）,﹡天然形式A1（視黃醇）A2（3脫氫視黃醇）﹡活性形式視黃醇、視黃醛、視黃酸﹡維生素A原Β胡蘿卜素,（一）化學(xué)本質(zhì)與性質(zhì),,脂溶性維生素,（二）生化作用及缺乏癥1生化作用＊構(gòu)成視覺細(xì)胞內(nèi)感光物質(zhì)（暗適應(yīng)）＊參與糖蛋白的合成，維持上皮組織的分化與健全＊其他作用，如影響細(xì)胞的分化2缺乏癥夜盲癥，干眼病，皮膚干燥等,11順視黃醛,,視蛋白,視紫紅質(zhì),,,（感弱光）,,全反視黃醛,,,11順視黃醇,全反視黃醇,,異構(gòu)酶,,異構(gòu)酶,神經(jīng)沖動(dòng),光異構(gòu),肝臟,視網(wǎng)膜,維生素A在視覺中的作用,暗處,二、維生素D（抗佝僂病維生素）,﹡種類VD2（麥角鈣化醇）VD3（膽鈣化醇）﹡VD2原麥角固醇→VITD2VD3原7脫氫膽固醇膽固醇→7脫氫膽固醇→VD3﹡VD3的活性形式1,25OH2VD3,（一）化學(xué)本質(zhì)和性質(zhì),1生化作用作用于小腸粘膜、腎及腎小管，促進(jìn)鈣磷吸收，有利于新骨的形成、鈣化,2缺乏癥兒童佝僂病成人軟骨病,（二）生化作用及缺乏癥,三、維生素E（生育酚、抗不育癥維生素）,（一）化學(xué)本質(zhì)與性質(zhì)﹡種類生育酚，生育三烯酚﹡能保護(hù)其他物質(zhì)不被氧化,2缺乏癥紅細(xì)胞數(shù)量少、壽命縮短紅細(xì)胞脆性增加,（二）生化作用及缺乏癥1生化作用捕捉自由基，抗氧化；維持生殖機(jī)能；促進(jìn)血紅素合成,四、維生素K（凝血維生素）,（二）生化作用及缺乏癥1生化作用維持體內(nèi)凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ的正常水平，參與凝血作用,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì),天然形式K1、K2人工合成K3、K4,2缺乏表現(xiàn)易出血,水溶性維生素,WATERSOLUBLEVITAMINS,硫胺素,活性形式焦磷酸硫胺素（TPP）,一、維生素B1（硫胺素,抗腳氣病因子）,,作為Α酮酸脫羧酶系的輔酶，參與Α酮酸的氧化脫羧作用,（二）生化作用及缺乏癥,1生化作用,乙酰COANADHHCO2,琥珀酰COANADHHCO2,2缺乏癥﹡腳氣病，末梢神經(jīng)炎,作為轉(zhuǎn)酮醇酶的輔酶，參與磷酸戊糖代謝途徑,TPP可抑制膽堿脂酶的活性，參與乙酰膽堿的合成,乙酰膽堿,TPP,,,,,膽堿脂酶,乙酸,膽堿,二、維生素B2（核黃素，RIBOFLAVIN）,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì)核醇與6，7二甲基異咯嗪的縮合物，呈黃色針狀結(jié)晶，易溶于水,體內(nèi)活性形式/輔基黃素單核苷酸FMN黃素腺嘌呤二核苷酸FAD,,VITB2,,FMN,,AMP,,FAD,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,,,,（二）生化作用及缺乏癥生化作用為體內(nèi)氧化還原酶的輔基，起傳遞氫原子的作用,缺乏癥口角炎，唇炎，陰囊炎等,三、維生素PP（抗癩皮病因子）,﹡種類尼克酸NICOTINICACID，煙酸尼克酰胺NICOTINAMIDE，煙酰胺均為吡啶衍生物,﹡體內(nèi)活性形式/輔酶尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD，輔酶Ⅰ尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP，輔酶Ⅱ,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì),RHNAD尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸RH2PO3NADP尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸,尼克酰胺輔酶,生化作用NAD及NADP是體內(nèi)多種脫氫酶的輔酶，起傳遞氫的作用,（二）生化作用及缺乏癥,2缺乏癥癩皮病表現(xiàn)皮炎、腹瀉、癡呆等癥狀,四、維生素B6,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì)種類吡哆醇吡哆醛吡哆胺,體內(nèi)活性形式磷酸吡哆醛磷酸吡哆胺,化學(xué)結(jié)構(gòu),吡哆醇,吡哆醛,吡哆胺,（二）輔酶/活性形式,1、磷酸吡哆醛2、磷酸吡哆胺,PO3H2,磷酸,（二）生化作用及缺乏癥,作為轉(zhuǎn)氨酶和脫羧酶的輔酶，參與氨基酸代謝,作為ALA合酶的輔酶，參與血紅素合成,磷酸吡哆醛作為糖原磷酸化酶的重要組成部分，參與糖原分解為1磷酸葡萄糖的過程,1生化作用,2缺乏癥,Γ氨基丁酸合成障礙，出現(xiàn)過度興奮，過敏甚至驚厥等疾病,低血色素小細(xì)胞性貧血和血清鐵增多,長期服用異煙肼需補(bǔ)充維生素B6,五、泛酸（PANTOTHENICACID，遍多酸）,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì)體內(nèi)活性形式/輔酶1輔酶ACOA2?；d體蛋白ACP,HSCOA的結(jié)構(gòu),,泛酸,,焦磷酸,,腺嘌呤,,3’磷酸核糖,,巰基乙胺,（二）生化作用,構(gòu)成輔酶A，在糖、脂及氨基酸代謝中起著轉(zhuǎn)運(yùn)乙酰基或脂?；淖饔?構(gòu)成?；d體蛋白的輔酶，在脂肪酸的生物合成中起著轉(zhuǎn)運(yùn)脂?；淖饔?六、生物素BIOTIN,生化作用多種羧化酶（如丙酮酸羧化酶）的輔酶，在羧化反應(yīng)中起著固定CO2和傳遞羧基的作用,,七、葉酸FOLICACID,蝶酰谷氨酸,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì),﹡體內(nèi)活性形式四氫葉酸FH4,5,6,7,8四氫葉酸,葉酸,二氫葉酸還原酶,NADPHH,NADP,二氫葉酸,二氫葉酸還原酶,NADPHH,NADP,四氫葉酸,（二）生化作用及缺乏癥,1生化作用FH4作為一碳單位轉(zhuǎn)移酶的輔酶，在嘧啶、嘌呤、蛋氨酸和膽堿等重要物質(zhì)的生物合成中起著傳遞一碳單位的重要作用,2缺乏癥巨幼紅細(xì)胞性貧血,一碳單位氨基酸在分解過程中產(chǎn)生的含一個(gè)碳原子的基團(tuán),八、維生素B12鈷胺素COHOLAMINE,（一）化學(xué)本質(zhì)及性質(zhì),天然形式5’脫氧腺苷鈷胺素、甲基鈷胺素、羥鈷胺素,﹡體內(nèi)活性形式甲基鈷胺素（MEB12）、5?脫氧腺苷鈷胺素（5DARB12）,R5脫氧腺苷5脫氧腺苷鈷胺素,（二）生化作用及缺乏癥,1生化作用參與體內(nèi)烷基轉(zhuǎn)移作用。MEB12作為N5CH3FH4甲基轉(zhuǎn)移酶的輔酶，促進(jìn)FH4的再利用和蛋氨酸的再利用5DARB12是L甲基丙二酰COA變位酶的輔酶，影響脂肪酸的合成2缺乏癥巨幼紅細(xì)胞貧血、神經(jīng)疾患,九、維生素C（L抗壞血酸ASCORBICACID）,

簡介：殺菌劑生物化學(xué)部分內(nèi)容,李園01062815940LIYUANCAAS126COM,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所,20131030,,病原菌對(duì)殺菌劑的抗性機(jī)理,2,,殺菌劑的作用機(jī)理,,殺菌劑混配增效和拮抗機(jī)理,,殺菌劑選擇性作用生化機(jī)制,4,,殺菌劑在環(huán)境或生物體內(nèi)代謝,課程內(nèi)容,第三章殺菌劑混配增效和拮抗機(jī)理,一、化學(xué)作用二、混劑中的藥物與目標(biāo)生物生理生化過程的相互作用（一）增效作用1不依賴載體的通透原生質(zhì)膜的擴(kuò)散作用2依賴載體介質(zhì)的運(yùn)轉(zhuǎn)而通透原生質(zhì)膜3向作用位點(diǎn)的轉(zhuǎn)移4活化作用（二）拮抗作用復(fù)配混劑對(duì)同一種生物的毒力比組成混劑的各藥劑單用毒力之和顯著低時(shí)，稱為拮抗作用。拮抗作用表現(xiàn)在防治效果降低，對(duì)保護(hù)對(duì)象表現(xiàn)藥害減輕。,,例如多氧霉素和滅瘟素混用，降低多氧霉素對(duì)水稻紋枯病的防治效果。拮抗作用在降低對(duì)被保護(hù)對(duì)象的藥害方面也有很多例子，如硫酸鋅和代森錳混用，可降低代森錳的藥害。銅制劑和鏈霉素混用，減輕鏈霉素對(duì)白菜的藥害。利用這些拮抗作用，可以擴(kuò)大藥劑的應(yīng)用范圍。拮抗機(jī)理1、對(duì)酶的競爭作用2、補(bǔ)償作用,將欲混配的兩種單劑按田間推薦使用劑量進(jìn)行混配，并計(jì)算出兩種單劑的質(zhì)量比。測定混配后的藥液對(duì)黃瓜白粉病的防治效果，根據(jù)公式計(jì)算出不同藥劑混配后增效系數(shù)，篩選具有增效作用的配比。,,,,第四章殺菌劑選擇性作用生化機(jī)制,選擇性作用類型真菌與植物間；不同病害/不同菌系間；對(duì)菌類不同反應(yīng)間；類似化合物的不同結(jié)構(gòu)之間；不同藥劑間；藥劑的不同作用點(diǎn)之間的選擇性。,一、內(nèi)吸殺菌劑在病菌和植物之間的選擇性1、藥劑作用點(diǎn)或接受點(diǎn)之間的不同2、藥劑作用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)的化學(xué)組分不同3、藥劑對(duì)生物合成的干擾在病菌和植物的影響不同4、藥劑所影響的酶類在含量上或活性上在菌類和植物中有很大的不同5、抑制病菌的致病力或降低其毒力的藥劑對(duì)植物生長完全沒有影響6、植物抗病誘導(dǎo)劑,二、內(nèi)吸殺菌劑對(duì)不同菌之間的選擇性1、病菌體內(nèi)藥劑接受點(diǎn)或藥劑作用系統(tǒng)的不同萎銹靈對(duì)擔(dān)子菌呼吸鏈上復(fù)合物Ⅱ處的電子傳遞，QPS蛋白質(zhì)子囊菌或霜霉菌復(fù)合物Ⅱ處缺乏QPS蛋白質(zhì)，因而對(duì)該藥不敏感。2、藥劑吸收量的不同或藥劑在細(xì)胞內(nèi)累積量的不同在非內(nèi)吸殺菌劑中較為明顯3、鈍化和強(qiáng)化藥物能力的不同4、藥劑作用系統(tǒng)或作用點(diǎn)在不同菌體中對(duì)生命力影響程度不同,（一）、保護(hù)性殺菌劑1、無機(jī)銅殺菌劑防治小麥腥黑穗病、葡萄霜霉病等多種作物病害。代表藥劑波爾多液、硫酸銅、氫氧化銅、氧化亞銅等。作用機(jī)制殺菌、抑菌效果歸因于銅離子。表現(xiàn)為1）與菌體細(xì)胞膜上含巰基的酶作用，使酶失去活性。2）與細(xì)胞膜表面的鈣、鎂、鉀等陽離子交換，影響菌體細(xì)胞膜蛋白質(zhì)的活性。3）局部深入菌體內(nèi)與某些酶結(jié)合，影響其活性。,2、無機(jī)硫殺菌劑石硫合劑防治白粉病代表藥劑石硫合劑、硫磺、膠體硫作用機(jī)制對(duì)靶標(biāo)菌的毒力作用主要?dú)w因于硫離子和少量硫化氫氣體對(duì)病原菌的殺菌和抑菌效果，是菌體細(xì)胞的呼吸抑制劑，作用于1）病原菌細(xì)胞色素B和C之間的氧化還原體系之間的電子傳遞過程；2）阻礙菌體內(nèi)三羧酸循環(huán)中的琥珀酸的氧化。,3、有機(jī)硫殺菌劑防治果樹、蔬菜霜霉病、白粉病、炭疽病等。代表藥劑“福美”類、“代森”類等二硫代氨基甲酸衍生物“福美”類作用機(jī)制抑制一些酶的活性，干擾三羧酸循環(huán)。在菌體內(nèi)代謝為含硫氰基（NCS）的化合物，硫氰基使病原菌細(xì)胞體內(nèi)氨基酸和酶的巰基失活，最終抑制這些物質(zhì)的合成和功能?！按鳖愖饔脵C(jī)制表現(xiàn)為1）破壞了輔酶A，直接影響了需要有輔酶A參與的脂肪酸的Β氧化，丙酮酸脫氫酶系、Α酮戊二酸脫氫酶系的活性；2）抑制以銅、鐵為輔基的酶的活性。,4、取代苯類殺菌劑對(duì)立枯絲核菌有特效，對(duì)甘藍(lán)根腫病菌、白絹病菌、馬鈴薯瘡痂病菌、油菜菌核病菌、放線菌均有防效。對(duì)腐霉菌、疫霉菌、鐮刀菌、輪枝菌等土傳病菌防效差。代表藥劑五氯硝基苯、百菌清作用機(jī)制五氯硝基苯影響菌體細(xì)胞有絲分裂。百菌清能與真菌細(xì)胞中的3磷酸甘油醛脫氫酶發(fā)生作用，與該酶體中含有半胱氨酸的蛋白質(zhì)結(jié)合，破壞酶的活力，使真菌細(xì)胞的呼吸代謝受到破壞而喪失生命力。,5、酰亞胺類殺菌劑對(duì)灰霉孢屬、核盤菌屬、葡萄孢屬、鏈格孢屬、絲核菌屬真菌有特效。代表藥劑異菌脲、腐霉利、乙菌利、乙烯菌核利作用機(jī)制這類藥劑能夠抑制含有NH2和SH的重要物質(zhì)，如氨基酸和酶的合成，對(duì)細(xì)胞膜和細(xì)胞壁也有影響，改變膜的滲透性和功能。此外，異菌脲也能抑制蛋白激酶，控制一些細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳遞。,腐霉利（PROCYMIDONE）,乙烯菌核利（VINCLOZOLIN）,異菌脲（IPRODIONE）,（二）、內(nèi)吸性殺菌劑1、羧酰替苯胺類防治大麥及小麥的散黑穗和銹病。代表藥劑萎銹靈、氧化萎銹靈、拌種靈、麥銹靈作用機(jī)制該類殺菌劑為呼吸抑制劑。可在真菌細(xì)胞中有選擇性地積累，最終抑制線粒體呼吸中重要的琥珀酸脫氫酶的活性。對(duì)孢子萌發(fā)不產(chǎn)生完全抑制作用，而是延緩了孢子萌發(fā)的時(shí)間，抑制芽管的伸長。,2、苯并咪唑類對(duì)大多數(shù)子囊菌、半知菌、擔(dān)子菌引起的病害有特效，但對(duì)半知菌中的交鏈孢、長蠕孢、輪枝孢引起的病害效果差，對(duì)細(xì)菌和卵菌無效。代表藥劑多菌靈、苯菌靈、硫菌靈、甲基硫菌靈作用機(jī)制苯并咪唑類作用方式與秋水仙素十分相似，在病原物細(xì)胞分裂過程中，藥劑可與紡錘絲的Β微管蛋白相結(jié)合，干擾細(xì)胞核有絲分裂，導(dǎo)致真菌細(xì)胞內(nèi)染色體加倍。作用位點(diǎn)單一，選擇性較強(qiáng)，病原菌易產(chǎn)生抗藥性。,3、有機(jī)磷類防治稻瘟病，對(duì)水稻菌核病、紋枯病、玉米大小斑病也有效，對(duì)絲核菌、灰霉菌、核盤菌、青霉菌、霜霉病菌、疫霉菌、白粉菌效果好。代表藥劑稻瘟凈、甲基立枯磷、乙膦鋁、三乙膦酸鋁作用機(jī)制稻瘟凈主要通過影響細(xì)胞膜上的卵磷脂合成過程的甲基轉(zhuǎn)移酶的活性，表現(xiàn)為對(duì)細(xì)胞壁合成的影響。甲基立枯磷殺菌作用機(jī)制是抑制DNA、RNA、蛋白質(zhì)的生物合成及氧的吸收。三乙膦酸鋁對(duì)靶標(biāo)病原菌除直接的抑菌作用外，還可能通過誘導(dǎo)寄主植物體內(nèi)產(chǎn)生酚類、倍半萜類物質(zhì)，增強(qiáng)寄主抗病能力。,4、酰苯胺類對(duì)卵菌中腐霉屬、疫霉屬、霜霉病菌有特效。代表藥劑苯霜靈、甲霜靈、呋霜靈、甲呋酰胺等。作用機(jī)制抑制RRNA聚合酶的活性，從而抑制了RRNA的生物合成。表現(xiàn)出菌體細(xì)胞壁加厚，影響病原菌侵入后菌絲在寄主植物體內(nèi)的發(fā)育，對(duì)孢子囊的萌發(fā)沒有影響。,5、三唑類對(duì)各種銹病、白粉病、麥類根腐病、黑穗病、葉枯病、全蝕病效果好，對(duì)子囊菌、擔(dān)子菌、半知菌均有一定效果，對(duì)卵菌無活性。代表藥劑三唑酮、三唑醇、苯醚甲環(huán)唑、氟硅唑、丙環(huán)唑、乙環(huán)唑、戊唑醇等。作用機(jī)制三唑類化合物的含氮雜環(huán)部分的氮與細(xì)胞色素P450的鐵離子結(jié)合，抑制麥角甾醇的生物合成，破壞菌體細(xì)胞膜功能。三唑類化合物影響了植物中赤霉素的合成，具有植物生長調(diào)節(jié)劑的作用。,6、甲氧基丙烯酸酯類對(duì)小麥葉枯病、網(wǎng)斑病、云紋病、白粉病等效果顯著。代表藥劑嘧菌酯、唑菌胺酯、醚菌酯、肟醚菌胺、苯醚菌酯等。作用機(jī)制甲氧基丙烯酸酯類為線粒體呼吸抑制劑，藥劑與線粒體電子傳遞鏈中復(fù)合物III（CYTBC1復(fù)合物）結(jié)合，阻斷電子從CYTBC1復(fù)合物流向CYTC，阻止ATP合成，干擾真菌細(xì)胞的呼吸作用，破壞能量形成，從而抑制靶標(biāo)病原菌生長或殺死病原菌。,7、羧酸氨基化合物類殺菌劑對(duì)多數(shù)卵菌植物病原菌，如霜霉屬、疫霉屬病菌效果顯著。代表藥劑烯酰嗎啉、氟嗎啉、異丙菌胺、雙炔酰菌胺等。作用機(jī)制尚未明確。研究表明，該類殺菌劑對(duì)游動(dòng)孢子的釋放和游動(dòng)沒有抑制作用，對(duì)細(xì)胞壁的所有階段均具有明顯的抑制作用，推測可能影響細(xì)胞壁物質(zhì)的合成。,（三）植物誘導(dǎo)抗病激活劑作為植物誘導(dǎo)抗病激活劑的殺菌劑自身并無殺菌或抑菌活性，但可作為植物免疫系統(tǒng)的激活劑（ELICITOR），能在DNA轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控特殊代謝相關(guān)基因的表達(dá)及PR蛋白的產(chǎn)生，激發(fā)植物啟動(dòng)自身的防御系統(tǒng)，以抵抗病原菌的侵染。這種現(xiàn)象通常稱為植物誘導(dǎo)抗病性（INDUCEDRESISTANCE），包括局部誘導(dǎo)抗病性和系統(tǒng)獲得抗性（SAR）。系統(tǒng)獲得抗性是植物病害防治研究領(lǐng)域的重要內(nèi)容，指植物經(jīng)局部誘導(dǎo)后，在侵染點(diǎn)產(chǎn)生的抗病信號(hào)可傳播至其他非誘導(dǎo)部位而使植物產(chǎn)生抗病性的現(xiàn)象。,MODEOFACTIONACTIGARD,INDUCTIONOFSYSTEMICACQUIREDRESISTANCE,1、烯丙異噻唑（PBZ）作用機(jī)制具有內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，誘導(dǎo)水稻植株體內(nèi)產(chǎn)生Α亞麻酸。亞麻酸是茉莉酸的前體，而茉莉酸是植物抗病反應(yīng)中的重要信號(hào)分子，可增強(qiáng)與植物抗病性相關(guān)的酶的活性，并使侵染部位寄主細(xì)胞形成了類木質(zhì)素的保護(hù)屏障。,2、苯并噻二唑（BTH代表產(chǎn)品苯并噻二唑7硫代羧酸甲酯，中文通用名為活化酯（ACIBENZOLAR）。典型植物誘導(dǎo)激活劑，發(fā)病早期施用，對(duì)多種真菌、細(xì)菌病害產(chǎn)生防御作用，尤其是對(duì)白粉病、銹病、霜霉病效果顯著。,作用機(jī)制具有較強(qiáng)內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，通過根部施藥可迅速被植物吸收和傳導(dǎo)到植株各個(gè)部位，激活植物的免疫系統(tǒng)，使其表現(xiàn)為“系統(tǒng)獲得抗性”?？烧T導(dǎo)植物體內(nèi)病程相關(guān)PR蛋白的產(chǎn)生，苯丙氨酸解氨酶、幾丁質(zhì)酶、Β1,3葡聚糖酶、過氧化物酶等一系列防御酶系活性的提高，以及木質(zhì)素和酚類物質(zhì)含量的提高。包括使植物細(xì)胞產(chǎn)生乳狀突起、形成胼胝質(zhì)等。,3、寡糖真菌病原PMG（PHYTOPHTHORAMEGASPERMAFSPGLYCINEA）的菌絲體壁上分離到帶分枝的Β1,3和Β1,6連接組成的葡聚七糖是首次被發(fā)現(xiàn)的寡糖激活劑。作用機(jī)制寡糖可誘導(dǎo)植保素、蛋白酶抑制劑的合成以及與病程相關(guān)PR蛋白的積累，并可使苯丙氨酸解氨酶、過氧化物酶等多種防御酶系活性增強(qiáng)。,（四）殺菌農(nóng)用抗生素是指由細(xì)菌、真菌或放線菌等微生物產(chǎn)生的可以在較低濃度下殺死或抑制植物病原菌的次生代謝產(chǎn)物。作用位點(diǎn)單一，大多是蛋白質(zhì)合成抑制劑，靶標(biāo)病原菌易對(duì)其產(chǎn)生抗藥性，不宜單一長期使用。,1、春雷霉素水溶性內(nèi)吸性抗生素，對(duì)稻瘟病、甜菜葉斑病、番茄葉霉病等真菌病害及黃瓜角斑病、蘋果炭疽病等細(xì)菌性病害都有良好的防效。作用機(jī)制微生物蛋白合成抑制劑，通過氨酰RNA與核糖體30S小亞基及70S大亞基結(jié)合抑制蛋白質(zhì)合成，抑制菌絲生長。,2、多抗霉素水溶性內(nèi)吸性殺菌抗生素，對(duì)多種真菌病害，尤其是對(duì)交鏈孢菌引起的梨黑斑病、蘋果斑點(diǎn)落葉病、灰葡萄孢引起的灰霉病防效好。作用機(jī)制干擾病原菌細(xì)胞壁（幾丁質(zhì)）合成，阻止病菌產(chǎn)生孢子和病斑擴(kuò)大。,3、井岡霉素水溶性抗生素，對(duì)立枯絲核菌引起的病害效果顯著，對(duì)水稻紋枯病有特效。作用機(jī)制是立枯絲核菌AG1海藻糖酶的抑制劑，能有效阻止紋枯病菌從菌絲的基部向頂端輸送營養(yǎng)（如葡萄糖），從而抑制菌絲的生長和發(fā)育。,,4、武夷菌素1979年從福建省武夷山區(qū)采土分離出來的鏈霉菌。對(duì)黃瓜、花卉白粉病有明顯的防治效果，對(duì)番茄灰霉病、葉霉病、小麥白粉病也有效。作用機(jī)制能抑制菌絲蛋白質(zhì)的合成，使細(xì)胞膜破裂，原生質(zhì)滲漏。,第五章殺菌劑在環(huán)境或生物體內(nèi)的代謝,一、前言殺菌劑代謝殺菌劑受生物體內(nèi)多種因素或自然環(huán)境條件的影響而改變其化學(xué)結(jié)構(gòu)的過程發(fā)生的變化涉及藥效、毒性和對(duì)環(huán)境的影響殺菌劑使用后的變化一是無酶參與的純化學(xué)分解（自然水解、氧化）二是發(fā)生在有機(jī)體（植物、動(dòng)物、微生物）代謝系統(tǒng)、由酶催化的生化反應(yīng)。包括氧化反應(yīng)、還原反應(yīng)、水解作用及結(jié)合物的形成,根據(jù)代謝后的活性/毒性變化分1、失活代謝藥劑本身有活性，代謝后活性降低，或完全失效。（多數(shù)）2、活化代謝藥劑離體時(shí)無殺菌活性，使用后代謝成有殺菌或抑菌活性的物質(zhì)。如敵枯唑、稻枯磷、立枯靈、抑菌嗪酮、托布津、苯來特、三唑酮等3、增毒代謝對(duì)高等動(dòng)物而言，大多數(shù)藥劑的代謝最終變成無毒無害物質(zhì)，但有的仍然保持相當(dāng)?shù)亩拘裕蛘咦兂啥拘愿叩奈镔|(zhì)，甚至致畸致癌，污染環(huán)境、危害人類。如代森類,二、各類殺菌劑的代謝途徑,殺菌劑在生物體或環(huán)境中的不同反應(yīng)途徑A動(dòng)物；B細(xì)菌；E酶；F真菌；L光；P植物；S土壤；W水1、苯并咪唑類苯來特和多菌靈（MBC）苯來特在溶液、微生物培養(yǎng)物、土壤、動(dòng)植物體內(nèi)脫去丁基氨基甲?；鶊F(tuán)，形成多菌靈（MBC），但速度不同還可產(chǎn)生正丁胺及CO2正丁胺在大豆中能誘導(dǎo)羥基菜豆朊的生成羥基菜豆朊對(duì)植物有毒,2、托布津類甲基托布津及乙基托布津環(huán)化作用/關(guān)環(huán)反應(yīng)?多菌靈及乙基多菌靈轉(zhuǎn)化條件光、鄰苯醌、MFO3、丁烯酰胺類萎銹靈及氧化萎銹靈動(dòng)植物、土壤中萎銹靈?亞砜的衍生物（萎銹靈亞砜）?砜的衍生物（氧化萎銹靈）氧化萎銹靈毒性不及萎銹靈，但對(duì)銹菌的毒性比萎銹靈高，對(duì)黑粉菌特效。,4、有機(jī)磷類（1）定菌磷?PP定菌靈（活化）（2）異稻瘟凈?二異丙基磷酸酯（活化）5、嘧啶類（1）甲菌定和乙菌定N脫羥基作用，丁基羥基化，形成結(jié)合物（2）抑菌嗪酮?6氮雜尿嘧啶（活化）,6、三唑類（1）三唑酮及三唑醇三唑酮?三唑醇影響活性因素A轉(zhuǎn)化程度；B三唑醇對(duì)映體組成；C失活代謝過程；D真菌對(duì)三唑醇單個(gè)對(duì)映體的敏感性7、代森類乙撐硫脲（ETU），致畸、致癌、阻礙甲狀腺功能在動(dòng)物體內(nèi)，能很快排出體外土壤及植物體內(nèi)，能很快轉(zhuǎn)化成2咪唑啉和乙撐脲8、有機(jī)氯類地茂散、菌核利,1苯并咪唑類殺菌劑的代謝⑴苯菌靈苯來特和多菌靈,三、殺菌劑代謝途徑詳解,⑵涕必靈和麥穗寧,2、托布津類,3、丁烯酰胺類及有關(guān)化合物⑴萎銹靈及氧化萎銹靈,⑵滅銹胺,⑶2，5－二甲基3呋喃甲酰替苯胺,⑷比銹靈,4、有機(jī)磷酸酯類⑴定菌磷,⑵克瘟散,5、嘧啶類及有關(guān)化合物⑴甲菌定和乙菌定,⑵丁嘧酯⑶十三嗎啉克啉菌,⑷嗪胺靈,⑸抑菌嗪酮、卵菌靈和胺丙威,6、三唑類⑴三唑酮,影響三唑酮離體活性的有①三唑酮轉(zhuǎn)化為三唑醇的程度；②三唑醇對(duì)映體的定性和定量組成；③失活代謝過程；④真菌對(duì)三唑醇單個(gè)對(duì)映體的敏感性。根據(jù)真菌對(duì)三唑酮的代謝和敏感性的相互關(guān)系，可把一些真菌分為三種類型Ⅰ對(duì)三唑酮和三唑醇均敏感；Ⅱ?qū)@兩種化合物均不敏感；Ⅲ對(duì)三唑酮不敏感，但對(duì)三唑醇中等敏感。,⑵烯唑醇,7、代森類,8、有機(jī)氯類⑴稻瘟酞,⑵地茂散,THANKYOU,分子克隆的基本操作技術(shù),體外剪切、拼接、重組,轉(zhuǎn)化基因重組體（RECOMBINANTDNA）,基因產(chǎn)物,,,,目的基因的獲得,PCR技術(shù),酶切，連接策略,轉(zhuǎn)化技術(shù)，目的重組子的篩選,高效表達(dá)方法,,,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)POLYMERASECHAINREACTION,PCR一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法,又稱為基因的體外擴(kuò)增法。1985年美國CETUS公司MULLIS等人開發(fā)1993年MULLIS諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng),目的基因的獲得和序列分析,PCR的反應(yīng)體系,模板DNA（TEMPLATE）引物（PRIMER）與被分離的目的基因的DNA雙鏈兩端序列相互補(bǔ)的DNA，約20個(gè)堿基左右；TAQDNA聚合酶／PFU高保真聚合酶；DNTP緩沖液（BUFFER）（PCR增強(qiáng)劑）一般PCR反應(yīng)可擴(kuò)增出1005000BP的目的基因,PCR基本反應(yīng)過程,1，變性95℃，雙鏈解開成單鏈2，退火55℃左右，引物配對(duì)3，延伸72℃，合成新鏈30個(gè)循環(huán)左右,PCR的目的,引物的設(shè)計(jì),1、引物長度（PRIMERLENGTH）常用的是1824BP，不要大于38BP，因?yàn)檫^長會(huì)導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃，不適于TAQDNA聚合酶進(jìn)行反應(yīng)。,2引物GC含量在4060之間，TM值最好接近72℃。GC含量（COMPOSITION）過高或過低都不利于引發(fā)反應(yīng)。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的TM值（MELTINGTEMPERATURE）是寡核苷酸的解鏈溫度，即在一定鹽濃度條件下，50寡核苷酸雙鏈解鏈的溫度。有效啟動(dòng)溫度，一般高于TM值510℃。若按公式TM4（GC）2（AT）估計(jì)引物的TM值，則有效引物的TM為5580℃，其TM值最好接近72℃以使復(fù)性條件最佳。,3引物3′端不能選擇A，最好選擇T。引物3′端錯(cuò)配時(shí)，不同堿基引發(fā)效率存在著很大的差異，當(dāng)末位的堿基為A時(shí)，即使在錯(cuò)配的情況下，也能有引發(fā)鏈的合成，而當(dāng)末位鏈為T時(shí)，錯(cuò)配的引發(fā)效率大大降低，G、C錯(cuò)配的引發(fā)效率介于A、T之間，所以3′端最好選擇T。,4堿基要隨機(jī)分布引物序列在模板內(nèi)應(yīng)當(dāng)沒有相似性較高，尤其是3’端相似性較高的序列，否則容易導(dǎo)致錯(cuò)誤引發(fā)（FALSEPRIMING）。降低引物與模板相似性的一種方法是，引物中四種堿基的分布最好是隨機(jī)的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不應(yīng)超過3個(gè)連續(xù)的G或C，因這樣會(huì)使引物在GC富集序列區(qū)錯(cuò)誤引發(fā)。,5引物的5′端可以修飾，而3′端不可修飾。引物的5′端決定著PCR產(chǎn)物長度，它對(duì)擴(kuò)增特異性影響不大。因此，可以被修飾而不影響擴(kuò)增的特異性。引物5′端修飾包括加酶切位點(diǎn)；標(biāo)記生物素、熒光、地高辛等；引入蛋白質(zhì)結(jié)合DNA序列；引入點(diǎn)突變、插入突變、缺失突變序列；引入啟動(dòng)子序列等。引物的延伸是從3′端開始的，不能進(jìn)行任何修飾。,給酶切位點(diǎn)添加保護(hù)堿基,限制性內(nèi)切酶識(shí)別特定的DNA序列，除此之外，酶蛋白還要占據(jù)識(shí)別位點(diǎn)兩邊的若干個(gè)堿基，這些堿基對(duì)內(nèi)切酶穩(wěn)定的結(jié)合到DNA雙鏈并發(fā)揮切割DNA作用是有很大影響的，被稱為保護(hù)堿基。保護(hù)堿基常見于PCR引物設(shè)計(jì)時(shí)，為保護(hù)5端外加的內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)，使酶切完全而添加。其次，在分子克隆時(shí)，選擇載體的酶切位點(diǎn)也會(huì)碰到，相臨的2個(gè)酶切位點(diǎn)往往不能同時(shí)使用，因?yàn)橐粋€(gè)位點(diǎn)切割后留下的堿基過少以至于影響旁邊的酶切位點(diǎn)切割。,6引物自身及引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，否則引物自身會(huì)折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)（HAIRPIN）使引物本身復(fù)性。這種二級(jí)結(jié)構(gòu)會(huì)因空間位阻而影響引物與模板的復(fù)性結(jié)合。引物自身不能有連續(xù)4個(gè)堿基的互補(bǔ)。兩引物之間也不應(yīng)具有互補(bǔ)性，尤其應(yīng)避免3′端的互補(bǔ)重疊以防止引物二聚體（DIMER與CROSSDIMER）的形成。引物之間不能有連續(xù)4個(gè)堿基的互補(bǔ)。,7引物應(yīng)具有特異性引物設(shè)計(jì)完成以后，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行BLAST檢測。如果與其它基因不具有互補(bǔ)性，就可以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)了。,各種模板的引物設(shè)計(jì)難度不一。有的模板本身?xiàng)l件比較困難，例如GC含量偏高或偏低，導(dǎo)致找不到各種指標(biāo)都十分合適的引物；用作克隆目的的PCR，因?yàn)楫a(chǎn)物序列相對(duì)固定，引物設(shè)計(jì)的選擇自由度較低。在這種情況只能退而求其次，盡量去滿足條件。至于設(shè)計(jì)軟件，PRIMER3，PRIMER5，PRIMEREXPRESS都應(yīng)該可以的。,MYPROTOCOL?,MYPROTOCOL?,BIORADMJRESEARCHER2BLOCKS195℃,5’,95℃45’’,60℃1’,72℃2’30,72℃10’,4℃FOREVER1KBS295℃,5’,95℃1’’,60℃90’’,72℃4’35,72℃10’,4℃FOREVER2KBS395℃,5’,95℃45’’,60℃1’,72℃3’30,72℃10’,4℃FOREVER14KBEXTENSIONTIME2DNASIZE,另外幾種PCR介紹,巢式PCR（NESTPCR）遞減PCR（TOUCHDOWNPCR）重疊PCR（OVERLAPPCR）逆轉(zhuǎn)錄PCR（RTPCR）,巢式PCR（NESTPCR）,,,巢式PCR的使用降低了擴(kuò)增多個(gè)靶位點(diǎn)的可能性，因?yàn)橥嗵滓锒蓟パa(bǔ)的靶序列很少。,巢式PCR可以增加有限量靶序列（如稀有MRNA）的靈敏度，并且提高了困難PCR（如5RACE）的特異性。,遞減PCR（TOUCHDOWNPCR）,遞減PCR通過在PCR的前幾個(gè)循環(huán)使用嚴(yán)謹(jǐn)?shù)耐嘶饤l件提高特異性。循環(huán)設(shè)在比估算的TM高大約5℃的退火溫度下開始，然后每個(gè)循環(huán)降低12℃,直到退火溫度低于TM5℃。,特異性最高的目的模板會(huì)被優(yōu)先擴(kuò)增，這些產(chǎn)物在隨后的循環(huán)中繼續(xù)擴(kuò)增占據(jù)優(yōu)勢。,遞減PCR對(duì)于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法更為有用，如AFLP、DNA指紋分析等。,重疊PCR（OVERLAPPCR）,將不同來源的擴(kuò)增片段重疊拼接起來。此技術(shù)利用PCR技術(shù)能夠在體外進(jìn)行有效的基因重組，而且不需要內(nèi)切酶消化和連接酶處理，可利用這一技術(shù)很快獲得其它依靠限制性內(nèi)切酶消化的方法難以得到的產(chǎn)物。,逆轉(zhuǎn)錄PCR（RTPCR）,由一條RNA單鏈轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNACDNA稱作“逆轉(zhuǎn)錄”，由依賴RNA的DNA聚合酶（逆轉(zhuǎn)錄酶）來完成。隨后，DNA的另一條鏈通過脫氧核苷酸引物和依賴DNA的DNA聚合酶完成，隨每個(gè)循環(huán)倍增，即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解，留下互補(bǔ)DNA。,PCR擴(kuò)增的改進(jìn),1、改變退火溫度2、改變模板的量3、改變引物的量4、擴(kuò)增長片段改變酶和DNTP的量5、添加PCR擴(kuò)增穩(wěn)定劑（DMSO5）,THANKYOU,

簡介：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)I,,1課程規(guī)劃,課程規(guī)劃目標(biāo)以培育手腦並用、思維清晰的中堅(jiān)科技專業(yè)人才在配合本校學(xué)生特質(zhì)及學(xué)校發(fā)展特色、教師專業(yè)背景及教學(xué)研究方向、科技進(jìn)步迅速及社會(huì)實(shí)際需求、兼顧同學(xué)興趣及未來發(fā)展等諸多考量之下課程設(shè)計(jì)的特色理論與實(shí)驗(yàn)技能並重,課程內(nèi)容的安排,,基礎(chǔ)課程,核心課程,,各種領(lǐng)域的專業(yè)選修課群,基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)?zāi)芰τ?xùn)練,,兼顧基礎(chǔ)理論及應(yīng)用實(shí)務(wù)各層面,核心實(shí)驗(yàn)?zāi)芰τ?xùn)練,專題討論與論文,,,,,,,實(shí)驗(yàn)?zāi)芰φn程,,課程編排內(nèi)容兩方面的要求,一是要灌輸學(xué)生正確的實(shí)驗(yàn)室使用觀念及態(tài)度，尤其是實(shí)驗(yàn)室安全使用態(tài)度的建立另一方面則是要給予學(xué)生基礎(chǔ)且完整的生物分子化學(xué)性質(zhì)及各種生化儀器的操作訓(xùn)練，以為將來所有相關(guān)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。,教學(xué)目標(biāo),學(xué)生能學(xué)會(huì)各種生化實(shí)驗(yàn)的操作方法包括儀器使用。學(xué)生能經(jīng)由實(shí)際的實(shí)驗(yàn)操作過程的養(yǎng)成，建立正確的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室操作的基本概念與態(tài)度。,實(shí)驗(yàn)課程表,實(shí)驗(yàn)課程表,實(shí)驗(yàn)室安全上課內(nèi)容,實(shí)驗(yàn)室安全實(shí)驗(yàn)室環(huán)境介紹化學(xué)儀器使用注意玻璃刻度吸管及安全吸球試管震盪器使用及收放電動(dòng)天平使用及清理微量吸管輔助器使用及收放離心機(jī),實(shí)驗(yàn)室安全,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有的防護(hù)設(shè)備實(shí)驗(yàn)室逃生路線及消防設(shè)備個(gè)人防護(hù)意外緊急處理配藥安全MSDS網(wǎng)站藥品安全查詢藥品標(biāo)示認(rèn)識(shí)化學(xué)藥品安全注意事項(xiàng)配藥注意事項(xiàng)參見實(shí)驗(yàn)手冊P1P2,藥品安全標(biāo)示,,鹽酸配製步驟,,準(zhǔn)備一大於1公升的燒杯加入蒸餾水600ML，放入一支STIRBAR。將此容器放入一有碎冰的平盤中作成冰浴的裝置，放在STIRPLATE上。將濃HCL以量筒準(zhǔn)備好1724ML量轉(zhuǎn)開STIRPLATE的開關(guān)，調(diào)控轉(zhuǎn)速，使之混合均勻。倒回量筒加至體積1000ML,PHMETER,,,雙質(zhì)子酸滴定曲線圖,光電比色計(jì)UV1201,,UV1201外型,,,,,,程式卡插孔,操作面板,螢?zāi)?電源開關(guān)在右後下方,CUVETTE插座,BROPHENOLBLUE之吸光圖譜,醣類定性實(shí)驗(yàn),,多醣測試IODINETEST,?奈酚測試MOLISCHTEST結(jié)果,,恩酮測試BIALTEST結(jié)果,,間二苯酚反應(yīng)測試結(jié)果,,胺基酸定性實(shí)驗(yàn),,NINHYDRINTEST,,加熱後,胺基酸定性實(shí)驗(yàn)SAKAGUCHITEST,加入氨水,胺基酸定性實(shí)驗(yàn)XANTHOPROTEICTEST,蛋白質(zhì)定量法,,BIURETMETHOD,蛋白質(zhì)定量法LOWRYMETHOD,蛋白質(zhì)的濃度與吸光質(zhì)關(guān)係圖,核酸萃取及電泳分析,,使用儀器,,核酸電泳裝置,,,圖一質(zhì)體核酸（PLASMIDDNA）經(jīng)不同的限制酶作用後跑12％膠的電泳結(jié)果LANE1、7PBR322PLASMIDDNA經(jīng)限制酶PSTI作用；LANEM、11ΛDNA/HINDIIIMARKER；LANE2、8PBR322PLASMIDDNA經(jīng)限制酶ECORI作用；LANE3、6PUC19PLASMIDDNA經(jīng)限制酶ECORI作用；LANE4、9PBR322PLASMIDDNA經(jīng)限制酶ECORIPSTI作用；LANE5PUC19PLASMIDDNA未經(jīng)作用；LANE12PBR322PLASMIDDNA未經(jīng)限制酶作用。,學(xué)生課堂問卷,96學(xué)年度第一學(xué)期生化實(shí)驗(yàn)問卷調(diào)查結(jié)果調(diào)查班級(jí)微三填卷人數(shù)54人，其中一人期末考前休學(xué),,,實(shí)驗(yàn)儀器調(diào)查,實(shí)驗(yàn)儀器調(diào)查,

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