簡介：腫瘤是嚴重威脅人類生命健康的重大疾病，免疫功能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。隨著對腫瘤發(fā)生、發(fā)展和治療的研究，尤其是細胞與分子水平的研究逐步深入，轉染抗瘤相關細胞因子基因，已成為探索腫瘤免疫的新熱點。腫瘤免疫主要是細胞免疫，CD8細胞毒T細胞CD8CTL和NK細胞是細胞免疫的主體抗瘤細胞。IL15是1994年發(fā)現，與IL2有許多重疊生物活性的細胞因子；是能顯著提高CD8CTL細胞和NK細胞增殖和殺瘤活性，而備受關注的抗瘤細胞因子。雖然已有一些關于IL15基因轉染腫瘤細胞對其在動物體內成瘤影響的報道，但原型IL15基因轉染的研究未達到預期的抗瘤效果，曾懷疑是其長信號肽影響分泌所致；轉染促其分泌信號肽的改型IL15基因研究也未達到預期結果。由于已知CD8CTL殺瘤識別的抗原，需要腫瘤細胞表面的HLAⅠ類分子提呈；CD8CTL的殺瘤功能活化，需要腫瘤細胞表面HLAⅡ類分子提呈抗原激活的CD4TH細胞輔助；NK細胞殺瘤，需要腫瘤細胞對其殺傷敏感；腫瘤細胞表達NK細胞活化性受體NKG2D的配體MICA，可活化NK細胞對腫瘤細胞的殺傷；IFNΓ能活化CD8CTL細胞和NK細胞，并能促進HLAⅠ類和Ⅱ類分子表達。為此，本研究在已成功構建三種不同IL15基因轉染NCIH446細胞TC模型基礎上，研究不同IL15基因轉染，對NCIH446細胞的HLAⅠ類和Ⅱ類分子及MICA基因表達、NK殺傷敏感性、誘導T細胞殺瘤和IFNΓ分泌的影響，從基因轉染對腫瘤細胞免疫生物學特性改變的角度，揭示其腫瘤免疫的意義，為IL15基因轉染的抗瘤研究提供新的實驗和理論依據。

簡介：中國協和醫(yī)科大學博士學位論文外周T細胞淋巴瘤的臨床和生物學特征研究姓名于燕霞申請學位級別博士專業(yè)腫瘤學指導教師石遠凱林晨20070501中國協和醫(yī)科太學博士學位論文PARTISTUDYONCLINICALFEATURESANDTREATMENTOUTCOMESOFPERIPHERALTCEULYMPHOMASUNSPECIFIEDABSTRACTOBJECTIVETOSUMMAL誣CLINICAIFCATURESANDTREATMENTOUTCOMESOFPERIPHERALTCELLLYMPHOMANONSPECIFIEDMETHODSRECORDSOF78PATIENTSWITHPTCLUSTREATEDFROMJAN1994TODEC2004INCANCCRHOSPITALOFCHINESEMEDICALSCIENCEINSTITUTEWERERETROSPECTIVELYANALYZEDALLPATIENTSWERECLASSIFIEDACCORDINGTEALOFWHOCRITERIARESULTSMEDIANAGEOFTHEWHOLEGROUPWAS39YEARSRANGED775YEARS；OF78PETIENTS，20WEREFEMALE58WEREMALE；34437％WERETREATEDWITHCHEMORADIOTHERAPY，4355％WERETREATEDWITHCHEMOTHERAPYALONE；T355S／0PATIENTSTREATEDWITHAUTOLOGOUSBLOODSTEMCELLTRANSPLANTATIONAFTERACHIEVEINGCRORPRW酏AMEDIANFOLLOWUPOFMONTHS，THE5YEARSURVIVALRATESOFTHEWHOLEGROUPWAS41A％，THE5YEARPROGRESSIVEFREESURVIVALRATEWAS338％；THE5YEARSURVIVALRATESOFCR，PR、PD／SDGROUPWERE65I％、219％ANDO％THE5YEAROSFORPATIENTSTREATEDWITHFIRSTLINEAPBSCTWAS615％WHILE523％FORTHOSETREATEDWITHCONVENTIONALDOSETHERAPYALONEPO894INTERNATIONALPROGNOSTICINDEXANDPROGNOSTICINDEXFORPERIPHEMLTCELLLYMPHOMAWERESIGNIFICANTFACTORFORPREDICTINGOVERALLSURVIVALTHE5YEARSURVIVALRATEOFLOWRISKLOWINTERMEDIATERISK，INTERMEDIATEHIGHRISKANDHIGILRISKGROUPWERE6790、350／0、222％、91％。CONCLUSIONPTCLUSARERARELYMPHOMASPRESENTTREATMENTMODILITIESFORTCELLNHLPATIENTSESPECIALLYTHEHIGHRISKPATIENTS枷’TACHIEVESATISFACTORYOUTCOMESNEWTREATMENTMODALITYFORTHESEPATIENTSNEEDTOBE_EXPLOREDKEYWORDSNONHODGKIN’SLYMPHOMA；PROGNOSIS；OVEMUSURVIVAL2

簡介：華中科技大學同濟醫(yī)學院博士研究生畢業(yè)論文DOCTORATEGRADUATLONTHESISHUST靶向SURVIVIN的SIRNA對肝癌細胞生物學行為的影響及增強絲裂霉素敏感性的實驗研究STUDYOFTHEINFLUENCEOFSIRNATARGETINGSURVIVINGENEONTHEBIOLOGICALBEHAVIORSANDENHANCEMENTOFMITOMYCINEFFECTSTOHEPATOCELLULARCARCINOMACELLS研究生姓名導師姓名學科專業(yè)指導小組成員盧昕鄭啟昌教授外科學普通外科毒蛾教授教授教授單位單位單位單位華申科技大學同濟醫(yī)學院研究生部博士學位論文翮舀正常哺乳動物細胞進化形成了～整套精細的調節(jié)機制，如原癌基因的激活和抑癌基因的失活都可導致細胞的過度增殖，而細胞凋亡能降低細胞的增殖能力，使失控的細胞增殖得到平衡和抑制。一旦細胞凋亡途徑受到障礙，就會打破這種平衡，引起細胞過度增殖，繼而癌變IJ“。就已經惡變的細胞而言，抑制細胞凋亡一方面有助于維系腫瘤細胞過度增殖的特性，另一方面也很可能成為抗腫瘤藥物殺傷腫瘤細胞的障礙。由于大多數抗腫瘤藥物殺瘤效應是通過誘導細胞凋亡來實現的，所以從某種意義上而言，細胞凋亡障礙可能是腫瘤細胞耐藥的重要機制之一【12】131。外部觸發(fā)因子能否誘導細胞凋亡，不僅取決于凋亡信號傳遞是否完整或通暢，而且還取決于維系細胞生存的信號傳遞系統(tǒng)是否存在缺陷或阻滯。最近與腫瘤生存密切相關的SURVIVIN基因在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉移中的作用正成為國內外學者研究的熱點。SURVIVIN是新近發(fā)現的凋亡抑制基因家族成員，在胎兒組織中廣泛表達，在正常成人組織中不表達，而特異性表達于人類多種常見腫瘤中，包括肺癌、乳腺瘸、結腸癌、前列腺癌、胰腺癌、晚期淋巴瘤、成神經纖維瘤和胃癌等【”J。SURVIVIN蛋白與細胞有絲分裂裝置微管結合，參與細胞周期調控，在G2／M期表達水平達到高峰，可能具有選擇性的細胞分裂中抗凋亡作用，以使轉化細胞通過有絲分裂進行惡變【L。SURVIVIN的高度表達會抑制多種因素引起的凋亡，如腫瘤壞死因子TNF、FAS、2甲基萘醌、星形孢菌素、ETOPOSIDEVPL6和生長因子撤除等17US】。目前在國內外SURVIVIN基因與肝癌的發(fā)生、發(fā)展、預后的研究為數尚不多。已有的研究報告表明SURVIVIN通過與CDK4相互作用釋放P21而促進肝癌細胞的增殖19J，在臨床研究中，SURVIVIN的表達與較差的預后指標如組織分級、微血管侵潤、局部復發(fā)及短期無瘤生存期相關剛J。另外，有研究表明SURVIVIN基因在肝癌耐藥過程中發(fā)揮作用，作者通過反義技術降低SURVIVIN的表達后增強了肝癌細胞對化療藥物5一FU的敏感性【2IJ。SURVIVIN基因在肝癌細胞對其它化療藥物產生耐藥過程中的表達變化是否具有普遍性，如何克服反義技術相關缺陷以有效降低SURVIVIN的表達，目前國內外尚無報道。

簡介：研究背景骨缺損是指由于外傷、感染、腫瘤切除等因素造成骨質喪失，從而在骨組織中形成間隙。較小范圍的骨缺損可以由機體自身的再生得到修復，而較大間隙的骨缺損則由于成骨細胞難以越過而不能正常愈合，若不采用適當治療則最終僅由纖維組織充填，形成骨不連。有研究表明，當長骨骨干缺損長度超過其直徑的15～25倍時，機體便難以自行愈合，因而造成永久性骨不連。骨缺損的病人在骨科患者中占有很高的比例，大約有10～15％的病人需要進行骨移植治療。在美國，每年涉及骨移植的病例已超過100萬，而在我國這樣一個人口眾多的發(fā)展中國家，需要進行骨移植治療的病例數目巨大更是不言而喻的，并且隨著社會的發(fā)展，交通事故的增多，骨缺損病人數目更是在不斷地逐年攀升，現今已經發(fā)展成為嚴重威脅人們生活質量的主要病癥之一。目前，主要應用于臨床骨缺損修復的方法有自體骨移植和異體骨移植等，但自體骨移植存在材料來源有限、供骨部位的損傷以及塑形困難等問題異體骨移植也有潛在的疾病傳播隱患以及移植排斥反應等嚴重后果，因此無論自體骨移植還是異體骨移植均無法完全滿足需求，臨床急需尋找一種安全有效的骨移植替代材料。近年來隨著組織工程化人工骨的誕生，骨移植治療中材料短缺的問題將有望得到成功的解決。組織工程骨是由可吸收的支架材料、種子細胞和／或成骨促進因子構成的。近年來，將細胞與特定支架材料聯合培養(yǎng)，形成具有生命的活性組織工程化復合材料用于修復骨缺損已經取得了初步成效，但毫無疑問，如何構建更理想的組織工程化人工骨仍舊是一個值得被重視的熱點。骨髓間充質干細胞（MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS）作為組織工程的優(yōu)秀種子細胞之一，具有很強的成骨分化潛力，在特定的環(huán)境中能夠被誘導分化成為成骨細胞，促進骨修復過程，因此被廣泛應用與骨組織工程領域；另外，很多國內外的研究也發(fā)現，有許多成骨分化因子以及血管誘導因子局部使用均有促進骨再生的作用。但單純的MSCS與材料的復合物誘導骨化過程很慢，而細胞因子局部給藥持續(xù)時間短、需反復給藥，并且價格非常昂貴?；诮陙硖岢龅膬仍葱怨巧L因子治療骨折的新理論，基因治療的手段被逐漸應用到骨組織工程領域中，并充分展現出了巨大的潛力，它使我們能夠將編碼各種細胞因子的基因導入到MSCS中，復合適當材料后植入骨缺損部，這樣就能夠在局部持續(xù)高效地產生細胞因子，以自分泌和旁分泌地方式誘導MSCS和組織中間充質干細胞的成骨分化，促進骨缺損的修復。本實驗中，我們以大鼠MSCS作為轉基因的靶細胞，分別將骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BONEMPHOGEICPROTEIN2，BMP2）、堿性成纖維細胞生長因子（BASICFIBROBLASTGROWTHFACTBFGF）和血管內皮細胞生長因子（VULARENDOTHELIALGROWTHFACT，VEGF）的基因分別導入MSCS中，并且首次將BMP2、BFGF基因以及BMP2、VEGF基因共同導入MSCS中，分別在體內和體外觀察對比了這幾種基因單獨修飾和共同修飾對RMSCS細胞活性的影響以及誘導異位成骨的情況，為構建更優(yōu)化的骨組織工程種子細胞和組織工程化骨提供了重要的實驗基礎。方法1BMP2，VEGF165，BFGF基因真核表達載體的構建提取腦組織和骨髓組織RNA，反轉錄成EDNA，通過PCR方法自CDNA庫中獲取全長BMP2、VEGF165及BFGF基因，酶切連接克隆入真核表達載體PCDNA30，測序并與GENEBANK中序列進行比較分析。2不同基因遺傳修飾的大鼠骨髓間充質干細胞的建立（1）采用PERCOLL分離液密度梯度離心和差速貼壁傳代篩選法相結合，分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞。（2）以脂質體介導分別將真核表達質粒PEDNA30BMP2、PCDNA30VEGF和PCDNA30BFGF單獨轉染MSCS，PCDNA30BMP2和PCDNA30VEGF以及PEDNA30BMP2和PCDNA30BFGF共同轉染MSCS，G418壓力篩選穩(wěn)定表達株。（3）RTPCR檢測各轉染組細胞中目的基因MRNA表達情況；WESTERNBLOT、細胞免疫化學檢測各轉染組細胞胞漿中目的蛋白表達情況；ELISA檢測各各轉染組細胞培養(yǎng)上清中目的蛋白的分泌情況。3不同基因修飾的RMSCS細胞生物學特性分析將外源基因修飾的MSCS分為6組進行AMSCS對照組；BBMP2基因修飾組；CVEGF165基因修飾組；DBFGF基因修飾組；EBMP2和VEGF基因聯合修飾組；FBMP2和BFGF基因聯合修飾組。（1）采用MTT方法測定各組細胞增殖能力；（2）酶促反應檢測細胞堿性磷酸酶活性；（3）放射免疫法檢測各組細胞培養(yǎng)上清中骨鈣素含量。4不同基因轉染的RMSCS成骨活性的體內實驗研究實驗共分為6組進行ARMSCSAWGC對照組；BBMP2基因修飾RMSCSAWGC組；CVEGF基因修飾RMSCSAWGC組；DBFGF基因修飾RMSCSAWGC組；EBMP2和VEGF基因聯合修飾RMSCS＋AWGC組FBMP2和BFGF基因聯合修飾RMSCSAWGC組。（1）在體外分別將不同種基因轉染的RMSCS接種于多孔支架材料AWGC上。（2）將不同種細胞材料復合物植入裸鼠后腿肌袋。（3）每組分別于植入后1、2、3月取材，石蠟包埋，組織病理學切片，HE、MASSON染色分析新骨形成情況；（4）免疫組織化學CD31染色，分析新骨形成區(qū)域內新生血管密度。結果1RTPCR自腦組織CDNA庫中擴增出了VEGF165及BFGF基因，自骨髓組織EDNA庫中擴增出了BMP2全長基因；2成功將BMP2全長基因、VEGF165基因及BFGF基因分別克隆入真核表達載體PCDNA30中，構建了真核表達質粒PCDNA30BMP2、PCDNA30VEGF和PEDNA30BFGF。DNA測序證明，所克隆目的基因序列與GENEBANK收錄一致。3各種真核表達質粒轉染了大鼠骨髓間充質干細胞后，經抗生素壓力篩選獲得了具有G418抗性的細胞克隆。4RTPCR結果顯示抗性細胞克隆中均有大量目的基因MRNA轉錄，ELISA檢測培養(yǎng)上清中目的蛋白表達陽性，WESTERNBLOT、免疫組化結果顯示胞漿中有目的蛋白的表達。5不同基因修飾后的MSCS增殖能力均得到不同程度的增強，其中BFGF和BMP2基因的修飾以及BMP2基因與BFGF基因或VEGF基因的共同修飾對MSCS的增殖能力促進最為明顯。6體外結果顯示BMP2基因的單獨修飾明顯上調了MSCS的堿性磷酸酶活性并促進了骨鈣素的分泌；VEGF基因的單獨修飾對堿性磷酸酶活性有一定程度的提高，但與對照組相比骨鈣素分泌量減少BFGF基因的單獨修飾抑制了細胞堿性磷酸酶的活性卻能夠促進骨鈣素的大量分泌；BMP2基因與BFGF基因或VEGF基因的共同修飾使得MSCS堿性磷酸酶活性成倍增加，骨鈣素分泌明顯上調。7裸鼠肌袋異位誘導成骨實驗顯示各基因修飾MSCS組與單純MSCS對照組相比，材料降解和替代的速度均明顯提高，有大面積新骨形成。植入一個月后就有大量軟骨細胞和成骨樣細胞產生，細胞外基質堆積，新生血管形成并深入支架材料。BMP2基因與BFGF基因或VEGF基因共同修飾的MSCS組在各階段均有比其他組更明顯的材料替換速度，擁有更高的相對骨面積和更豐富的新生毛細血管網。結論1人BMP2、VEGF165和BFGF基因可以通過脂質體介導有效地導入大鼠MSCS中并得到表達。2BMP2、VEGF165、BFGF基因對RMSCS單獨修飾，BMP2基因與BFGF基因或VEGF基因對RMSCS聯合修飾后，能夠有效改變RMSCS的部分生物學特性細胞外形發(fā)生改變，增殖能力明顯提高；細胞內堿性磷酸酶活性發(fā)生不同程度的改變；骨鈣素分泌水平變化顯著。3以能夠啟動或誘導MSCS成骨方向分化的基因（BMP2、BFGF）和能夠促進新生血管形成的基因（BFGF、VEGF）對RMSCS進行修飾后，能夠在裸鼠體內有效地促進異位骨的形成和血管化。4BMP2BFGF基因和BMP2VEGF基因的聯合修飾，對于體外培養(yǎng)的RMSCS增殖及成骨分化能力有著較單獨基因修飾更加明顯的促進作用，并且能夠在裸鼠肌袋內誘導形成擁有更大的相對骨面積和更高的血管密度的新生骨組織。

簡介：河北醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產權歸屬承諾本學位論文在導師或指導小組的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內容相關的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數據、申報的專利等知識產權均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應法律責任。研究生簽名燃師簽鼉≥夠刑1二級學河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內容外，文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名癯嬲翮麟砂弓年3R15B中文摘要MIRNA449A在肺癌細胞株中的表達及其生物學功能研究摘要目的MICRORNAMIRNA、是一類長度為20～23NT的在多種真核生物中可以調控基因表達的高度保守非編碼小RNA【L，2】。MIRNA可以通過與一個或多個MRNA的部分序列互補而調控基因表達進而影響生命活動，它的功能失調常常會引起重要過程出現紊亂，包括器官變化、細胞分化、細胞增殖、細胞存活等【34】。而在腫瘤的發(fā)生過程中，不同的MIRNA可能起著癌基因或者抑癌基因的作用。目前，肺癌是發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤之一，其病理類型主要為兩種，一是進展性較快的小細胞癌，占總體比例的13～15％左右，二是非小細胞癌，包括腺癌，鱗狀細胞癌，大細胞癌，大細胞神經內分泌癌等，占總體比例的85％左右【56】。肺癌預后較差的原因有多方面，轉移是影響肺癌患者療效和生存時間的關鍵問題之一，明確的轉移機制目前仍然不清楚，因此缺乏有效的治療手段。目前研究發(fā)現，MIRNA449A在胃癌、膀胱癌、前列腺癌等癌癥中均有抑癌作用，而MIRNA一449A對于肺癌的生物學功能影響尚不清楚，在本研究中我們試圖通過對MIRNA449A在肺癌中的生物學作用進行研究，探討肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的內在機制，為提高肺癌的早期診斷、特異性治療及預后判斷水平提供新的思路，同時探索肺癌的特異性新靶標。方法1基因芯片分析分別提取高、低不同轉移潛能人肺巨細胞癌細胞株95D／95C的總RNA，應用MICRORNA芯片技術檢測95C／95D中MIRNA一449A的差異性表達水平；2使用REALTIMEPCR技術對差異表達的MIRNA449A進行驗證首先提取人肺巨細胞癌細胞株95C／95D的總RNA，然后設計MIRNA449A的反轉錄引物及上游引物和下游引物，設置內參U6為對照，反轉錄RNA檢測MIRNA449A在95C／95D細胞株中的表達水平，同時使用瓊脂糖凝膠電泳對REALTIMEPCR產物進行鑒定。3構建過表達MIRNA一449A的真核表達載體PCDNA31一MIR449A首先根據MIRBASE數據庫確定MIRNA449A的序列，設計MIRNA449A的擴增引物進行擴增，擴增目的基因并進行鑒定后構建真核表達載體PCDNA31MIR449A，通過酶切及基因測序再次鑒定。4建立過表達

簡介：V905800分婁號亙壘8土單位代碼10159學號2M316264⑨審回罄封夫拳博士學位論文題目剛A干擾凋亡抑制基因SURVIIN表達及對骨吶瘟細胞系U一20S相關生物學特性的影響KNOKDOⅦAOFSUZVIVINE‘P2I∞BYSMALLULERFETINGRN‘TINDUCEAPOPTOSISINHUMAN0SLEOSEOMACELLH叫1520S研究生至壁一導師墨墮學科專業(yè)￡鹽生做課翹起止時間墊堅主旦堂生月論文完成耐同她主墨RNA干擾凋亡抑制基因SURVIVIN表達及對骨肉瘤細胞系U一20S相關生物學特性的影響背景骨肉瘤是人類最常見的原發(fā)惡性骨腫瘤，最常見于20～30歲的年輕人。單純截肢治療患者常常在一年內死于肺轉移。隨著外科技術，影像學、化療放療的發(fā)展，患者長期生存率從1020％上升到6070％。但是諸如腫瘤轉移、復發(fā)等問題仍然沒有得到完全解決。隨著腫瘤的研究已進入到基因與分子水平，人們認識到腫瘤的發(fā)生是一個多因素參與、多種途徑、多階段的復雜過程，許多基因與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、演變相關，包括癌基因、抑癌基因、細胞凋亡基因、凋亡抑制基因、細胞周期調節(jié)基因等，其中細胞內腫瘤相關基因，如癌基因、凋亡抑制基因、細胞凋亡基因等的異常表達是腫瘤發(fā)生的重要原因之一，它能引起細胞的某些生物學特性的變化，導致細胞無限制繁殖和癌變。腫瘤細胞凋亡抑制因子活性的增強，能抵抗細胞凋亡信號通路的激活，使腫瘤細胞逃避體內免疫系統(tǒng)的識別和清除，最后導致腫瘤的形成忙’。因此，特異性抑制細胞內凋亡抑制因子的表達己成為腫瘤治療新途徑。細胞凋亡抑制因子INHIBITOROFAPOPTOSIS，IAP家族是一類分布廣泛的抗凋亡蛋白，存在于病毒、酵母和哺乳動物細胞等生物中，家族成員在結構上的特點是具有一個或多個高度保守的約70個氨基酸重復序列，稱為桿狀病毒IAP重復序列BACULOVIRALIAPREPEAT，BIR，在功能上具有抑制細胞凋亡的作用。1997年耶魯大學的AMBROSINI等用效應細胞蛋白酶受體IEF_FECTORCELLPROTEASERECEPTORI，EPRICDNA在人類基因文庫中進行篩選，克隆出的一個新基因，命名為SURVIVIN。SURVIVIN結構較獨特，只有單一BIR，羧基末端不含環(huán)指結構，其基因定位于染色體17Q25，有4個外顯子和3個內含子，基因全長147KB，編碼產生一個由142個氨基酸組成的分子量為165KDA的胞漿蛋白，為IAPS中分子量最小的成員“1。SURVIVIN表達于

簡介：分類號UDC密級編號午I初大學CENTRALSOUTHUNIVERSITY碩士學位論文論文題目盎咽疸紫杉醒耐葒細胞丕的生物堂繾眭區(qū)墨藥耐藥性撿測專業(yè)方向互皇噬頭頸窆I科研究生姓名塞』理導師姓名及其專業(yè)技術職稱逢國撻熬援中南大學二。一。年五月分類號VDC碩士學位論文密級㈣M刪『『JF『刪刪舢Ⅲ＼1721486鼻咽癌紫杉醇耐藥細胞系的生物學特性及多藥耐藥性檢測THESTUDYOFBIOLOGICALCHARACTERISTICSANDMULTIPLEDRUGRESISTANCEOFTAXOLRESISTANTNASOPHARYNGEALCARCINOMACELLS一●LINES研究生姓名學科專業(yè)學院系、所指導教師劉理耳鼻喉頭頸外科湘雅三醫(yī)院譚國林答辯委員會中南大學二。一O年五月

簡介：安徽醫(yī)科大學碩士學位論文S100A14基因轉染人食管鱗癌細胞系的生物學觀察姓名王云海申請學位級別碩士專業(yè)外科學（胸心外）指導教師于在誠劉芝華20040601安徽醫(yī)科大學碩士學位論文S100A14基因轉染人食管鱗癌細胞系的生物學觀察中文摘要目的了解S100A14對人食管鱗狀細胞癌細胞系KYSE2生物學特征的影響。方法分別構建PCDNA31一S100A14正義、反義真核表達載體，將其分別轉染人食管鱗狀細胞癌細胞系KYSE2，隨后觀察KYSE一2的生長情況。應用MTT比色法繪制細胞生長曲線；克隆形成實驗了解細胞增殖情況；流式細胞儀觀察細胞周期。結果MTT比色法顯示轉染正義S100A14、反義S100A14和KYSE2細胞的吸光度在每一天都有轉染正義S100A14的細胞KYSE2和轉染反義S100A14的細胞，細胞生長曲線顯示轉染正義S100A14的細胞生長最快，而KYSE2與轉染反義S100A14的細胞之間差別不大?？寺⌒纬蓪嶒烇@示與轉染正義S100A14的細胞相比，KYSE一2細胞和轉染反義S100A14細胞形成的克隆數較少，并且體積較小轉染反義S100A14的細胞與KYSE2細胞之間無明顯差別。流式細胞儀觀察細胞周期的結果顯示與轉染反義S100A14的KYSE2及KYSE2相比，轉染J下義S100A14者細胞周期發(fā)生改變。結論S100A14可加快人食管鱗狀細胞癌細胞系KYSE。2的增殖速率，KYSE一2的惡性程度可能有所增加。關鍵詞S100A14基因；食管鱗癌細胞系KYSE2；細胞生長曲線；克隆形成率；細胞周期2

簡介：中山大學博士學位論文鼻咽癌腫瘤干細胞的分離、鑒定以及生物學特性研究姓名莊惠文申請學位級別博士專業(yè)耳鼻咽喉科學指導教師文衛(wèi)平20100521中IL】大學博J學位論文鼻咽癌腫瘤于細胞的分離、鑒定以及生物學特性研究中文摘要癌腫瘤干細胞足以一種以LINESACD44CD24AOW為特異性表面標志的細胞【101。SINGH等也以CDL33為特征性膜蛋白標志，在腦腫瘤中分離出了腫瘤干細胞【L。在于細胞研究熱潮的帶動下，科研人員用各種不同的方法分別得到并鑒定了前列腺癌、胰腺癌、結腸癌、卵巢癌、肝癌、肺癌等部位的實體腫瘤干細胞【B1引。越來越多的實驗結果使學者們相信實體瘤組織中確實存在少數具有自我更新和分化能力，增殖速度明顯高于其他腫瘤細胞的干細胞。對這群特殊細胞的深入研究有可能為人類更全面地理解腫瘤的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律并探索靶向治療腫瘤疾病的方向開辟一條新的道路。腫瘤干細胞理論的出現，從新的視角為鼻咽癌發(fā)生和復發(fā)機制提供了合理的解釋。近年來，鼻咽癌腫瘤干細胞的研究也逐步展開。如ZHANG等發(fā)現，小鼠鼻咽粘膜基底部存在一群具有正常干細胞特性的標記滯留細胞LRC。隨后以同樣的方法研究鼻咽癌細胞株。證實在裸鼠體內，人體鼻咽癌細胞種植形成的瘤體中，也可以找到約占總數03％的標記滯留細胞P。WANG等利用HOECHST33342在從5種鼻咽癌細胞株中檢測到側群細胞SP細胞，其中來自細胞株CNE2的SP細胞具有極強的致瘤能力，而且對放化療表現出一定的耐受能力。進一步的研究認為，CKL9可能是鼻咽癌干細胞的潛在標志物13列。雖然實驗結果揭示了鼻咽癌中存在腫瘤干細胞的可能，但迄今為止還沒有系統(tǒng)的試驗去探索鼻咽癌腫瘤干細胞理想的表面標記物。因此，如何選擇合適的候選特異性表面標記物，探索有效的腫瘤干細胞分離和鑒定方法是目前鼻咽癌研究的迫切任務之一。干細胞研究的發(fā)展很大程度上依賴特異性細胞表面標志物的研究進展。一旦確定這些標志，就可以通過細胞分選和功能測定的方式來純化并鑒定腫瘤干細胞。近年來，已經在多種實體腫瘤中鑒定出各種特異的干細胞表面標記物。其中CD34、CD44和CDL33是得到廣泛認可的代表標記之一。CD34抗原屬I型跨膜蛋白，無種屬特異性。在早期造血系統(tǒng)的調控以及呼吸系統(tǒng)的修復方面起著重要的作用【52】。它不但在定向祖細胞、造血干細胞以及血管內皮細胞中高表達，而且是首先被證實的血液系統(tǒng)腫瘤干細胞【81；CD44抗原屬于黏附分子家族透明質酸受體，可表達于淋巴細胞、問質細胞或特定的腫瘤細胞表面。是腫瘤細胞侵襲、黏附和轉移過程中重要的參照物。近年文獻報道CD44也是乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、直腸癌、肝癌等腫瘤干細胞特異性表面標記物之一【105457】。參與了這些腫

簡介：華中科技大學博士學位論文RECK基因在胃癌中的表達及其對胃癌細胞生物學行為的影響的研究姓名張勇申請學位級別博士專業(yè)外科學指導教師鄭啟昌20050401華中科技大學同濟醫(yī)學院博L畢業(yè)論文目的克隆人RECKREVERSIONINDUCINGCYSTEINERIOHPROTEINWITHKAZALMOTIFS基因，并構建RECK基因的真核表達載體PEDNA3RECK。方法從人的胎盤組織中提取總RNA，經逆轉錄一聚合酶鏈式反應RTPCR擴增出人RECK基因；將RECK基因克隆入載體PBLUESCRIPTIISK中，陽性克隆經酶切、電泳鑒定并測定RECK基因序列確認后將PBLUESCRIPTIISK一RECK酶切所得RECK基因片段插入真核表達載體PCDNA3中，構建RECK基因的真核表達載體PCDNA3一RECK并經酶切鑒定。結果PCR擴增得到了特異性的44KB基因片段。基因片段的大小與預期一致。所獲得的RECK基因測序及BLAST分析證明克隆的人RECK基因序列正確，PCDNA3RECK經酶切后得到54KB和44KB兩個片段。結論成功的克隆了人RECK基因并正確構建了其真核表達載體PCDNA3一RECK。關鍵詞R醒K原核表達載體；克隆與表達；PBLUESCRIPTSKPCDNA3第三部分RECK基因對人胃癌細胞株MKN一45生物學行為的影響的研究目的探討轉染外源性的RECK基因對MEN一45胃癌細胞體外及體內生物學活性的影響。方法采用脂質體LIPOFECTAMINE2000介導將真核表達載體PCDNA3一RECK導入體外培養(yǎng)的MKN45細胞，RTPCR及WESTERNBLOT檢測轉染前后MEN一45細胞中RECKMRNA和蛋白質的表達。明膠酶譜試驗檢測轉染前后細胞中刪P一9的活性。細胞計數法繪制各組細胞的生長曲線以觀察RECK基因對細胞增殖能力的影響；利用流式細胞儀方法檢測轉染前后細胞凋亡率；BOYDEN小室實驗計算各組穿膜的細胞數以比較轉染RECK基因對細胞侵襲能力的變化；比較裸鼠成瘤大小及腫瘤轉移的比例；應用免疫組織化學方法檢測裸鼠腫瘤組織中血管內皮細胞特異性第Ⅷ因子相關抗原FⅧRAG和各組細胞ICAML的表達，依據FⅧRAG的表達評價腫瘤組織內微血管密度MVD。結果轉染PCDNA3一RECK真核表達載體后MKN一45細胞能穩(wěn)定高表達RECKMRNA

簡介：【研究背景】大面積深度燒傷后，由于供皮區(qū)缺乏，導致創(chuàng)面修復困難1，給患者留下了嚴重的傷殘。為此，人們在解決大面積燒傷后皮源短缺的問題上已經探索了很長時間，然而傳統(tǒng)的方法，比如自體網狀皮、大張異種皮開窗嵌入自體微型皮片、微粒皮以及自體表皮細胞培養(yǎng)擴增后移植等雖然一定程度上解決了一些問題，但是這些方法面臨著一個共同的不足不同程度的瘢痕形成致外觀不佳、畸形嚴重致功能障礙等25。對此，近年來人們開始構建組織工程學皮膚以期望解決這個問題，從最初由BURK和YANNAS設計的人工真皮到現在美國FDA批準用于臨床的含有人體活細胞皮膚替代品APLIGRAF的發(fā)展，證明了構建組織工程皮膚的可行性，雖然這些產品還面臨一些缺點缺少汗腺及毛囊等皮膚附屬器官（附件）而難以獲得正常皮膚所應具有的外觀及生理功能6。大面積深度燒傷病人修復創(chuàng)面無毛發(fā)，尤其是無汗腺，則不僅影響美觀，更嚴重地影響創(chuàng)面愈合后的生活質量；因此，重建皮膚附件已成為皮膚組織修復領域的重要課題。本課題以表皮干細胞（ESC）為種子細胞，鼠尾膠原作為支架材料，借助對皮膚附件汗腺及毛囊形成有重要誘導效應的表皮生長因子（由本實驗室構建的HEGF基因轉染HACAT細胞分泌）及真皮成纖維細胞和脂肪干細胞，作為ESC增殖分化的因子，構建組織工程皮膚。以探索人體ESC分化為皮膚附件汗腺、毛囊的可能性，并分析探討其分化機制?！狙芯磕康摹?、觀察本實驗室已經構建的表達質粒PCDNA31HEGF轉染HACAT細胞的形態(tài)學、增殖、分泌EGF免疫表型等生物學特性。2、探索高效分離和培養(yǎng)人ESC方法，觀察其生物學特性，并行形態(tài)學、免疫表型等鑒定。3、探索不同方法、條件對構建以ESC為種子細胞的組織工程皮膚生物學影響。4、利用表皮（干）細胞復合細胞化真皮的體外培養(yǎng)模型，對皮膚附件的體外表型轉化進行探索性研究。【研究內容】1、對本實驗室已經構建的HEGF基因轉染HACAT細胞進行形態(tài)學、增殖、分子表型等生物學特性。2、分離、培養(yǎng)表皮干細胞，觀察其形態(tài)學特征、測定其增殖曲線及分子表型鑒定。3、分離、培養(yǎng)脂肪干細胞，觀察形態(tài)學特征，成骨、成脂誘導分化，流式細胞儀分子表型鑒定。4、建立穩(wěn)定的三維立體組織工程皮膚，觀察EGF對其生物學影響。5、觀察外源性EGF誘導ESC復合組織工程真皮向汗腺轉化的趨勢。【研究結果】1、HEGF轉染HACAT細胞具有高分泌EGF，HACAT細胞穩(wěn)定轉染EGF基因后，經分子表型鑒定，K19、整合素Β1表達量升高。2、利用改良方法可獲得大量活性較高的ESC。分子表型鑒定其高表達K19、整合素Β1。3、分離、培養(yǎng)ADSCS。流式細胞儀檢測CD29、CD90、CD105陽性表達；CD31、CD43、CD45陰性表達。成骨、成脂誘導分化后，ADSCS分別呈現骨細胞、脂肪細胞的表性特征。4、以ESC作為種子細胞，鼠尾膠原為支架，EGF作為生長因子構建三維組織工程皮膚，組織切片顯示其分為三層，具有皮膚組織的基本特點。5、構建組織工程皮膚經RTPCR檢測，其汗腺細胞表面抗原CK19、CEA的MRNA水平上升。【研究結論】1、HEGF轉染HACAT細胞具有高效穩(wěn)定分泌EGF，分子表型鑒定HEGF轉染HACAT細胞具有表皮細胞的一般生物學特性。2、利用改良、分離培養(yǎng)方法可獲得大量活性較高的ESC，具有ESC的一般生物學特性。3、酶消化法可有效分離純化人ADSCS細胞生長穩(wěn)定、增殖能力活躍，具有ADSCS的一般生物學特性。4、以ESC作為種子細胞，鼠尾膠原為支架，EGF作為生長因子可穩(wěn)定構建三維組織工程皮膚，其結構接近生理皮膚構造。5、EGF可能誘導ESC復合組織工程真皮向皮膚附件（汗腺）轉化，并起著決定性的作用。

簡介：南京醫(yī)科大學碩士學位論文VEGF真核表達載體在HACAT細胞中的表達及其生物學活性的研究姓名周乃慧申請學位級別碩士專業(yè)皮膚病與性病學指導教師范衛(wèi)新20050420南京醫(yī)科大學碩士學位論文VEGF真核表達裁體在HACAT細胞中的表達及其生物學活性的研究研究背景研究生周乃慧導師范衛(wèi)新教授摘要毛囊是一種結構復雜的皮膚附屬器官，始終處于生長期、退行期和休止期的周期性循環(huán)中，許多激素、生長因子、細胞因子及其受體等相互作用，形成網絡，共同調控著毛囊的周期性循環(huán)和毛發(fā)生長‘11。雄激素性脫發(fā)和斑禿是皮膚科臨床中的常見病，不僅影響美觀，而且給患者的心理帶來很大的壓力。因此，進一步深入地探討其發(fā)病機理和防治措施便成為毛發(fā)研究中急待解決的難題。血管內皮細胞生長因子VASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR，VEGF又稱血管滲透因子VASCULARPERMEABILITYFACTOR，VPF或血管調理素VASCULOTROPIN，是新近發(fā)現的一種作用于毛囊的生長因子。VEGF至少存在五種亞型，分別為VEGFL2L、VEGFL45、VEGFL65、VEGFL89和VEGF206。其中VEGFJ2L和VEGFL65由于缺少第6個外顯子而以游離形式存在，因此容易達到靶細胞發(fā)揮生物學效應I。研究發(fā)現，人生長期毛囊的毛乳頭細胞、真皮鞘細胞、外毛根鞘細胞和皮膚的角質形成細胞等均可以合成與分泌VEGF，而退行期和休止期

簡介：X90S241西咪替丁對胃癌細胞生物學行為的影響EFFECTSOFCIMETIDINEONBIOLOGICALBEHAVIORSOFHUMANGASTRICCANCERCELLSGC7901碩士研究生姜成鋼指導教師僚意綿中國醫(yī)科大學沈陽110001中國二零零六年五月C∞D岫FORM雒TORDEGREEJIANGCHENGGANGSUPERVISORXUHUIMLANC|脅住MEDK坦JUNLVEM夥GRADUATESCHOOLNORTH2NDROAD92，HEPLNGWARD，SHENYANG110001，CHINEMAY2006，一～～、L一中塞娑黃攛摹，西咪替丁對胃癌細胞生物學行為的影響刖吾西咪替丁是一種H受體阻斷劑，近年來研究發(fā)現西咪替丁對消化系統(tǒng)腫瘤的治療有良好的輔助作用。但其作用機制尚不明確6本研究以人胃癌細胞株SGC一7901作為實驗模型，觀察西咪替丁對SGC一7901細胞的生長、凋亡、粘附、侵襲及裸鼠體內成瘤性的影響，以期為西瞇替丁用于胃癌的臨床治療提供理論和實驗依據。材料與方法用MIT法檢測不同濃度西咪替丁對胃癌SGC一7901細胞生長的影響；流式細胞術檢測細胞周期和凋亡；用吖啶橙AO染色后熒光顯微鏡觀察藥物作用后細胞的形態(tài)變化；透射電鏡觀察用藥后細胞超微結構的改變；以MATRIGEL為對象，檢測西咪替丁對胃癌細胞與細胞外基質粘附作用的影響；利用MILLICELL小室檢測西咪替丁對胃癌細胞侵襲人工基底膜能力的影響。并分別向裸鼠腹腔內注射胃癌細胞和西咪替丁，觀察裸鼠體內成瘤性。結果在055MMOVL濃度內，西咪替丁對SGC一7901的生長具有顯著的抑制作用，并呈時間和劑量依懶性；O5一LOMMOL／L西咪替丁作用后，可觀察到典型細胞凋亡形態(tài)學改變；流式細胞儀檢測可見凋亡峰，GO／G1期細胞明顯增多；00625025MMOL／L西咪替丁可抑制胃癌細胞和細胞外基質的粘附及對重組基底膜的侵襲。西咪替丁在50MG／KG／DAY，200RAG／KG／DAY，劑量下可使裸鼠體內成瘤性受到抑制。1

簡介：河北醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產權歸屬承諾本學位論文在導師或指導小組的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內容相關的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數據、申報的專利等知識產權均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應法律責任。僦虢懈刪蓋軍謠㈣河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內容外，文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名、絮唧斗?章鷺琶導師簽章∞歹謹J20孵’多月硼中文摘要共刺激分子B7．H3在食管癌中的表達及對食管癌細胞生物學特性的影響摘要惡性腫瘤嚴重威脅全球人類健康。由于腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有多元性及復雜性，認識腫瘤發(fā)生發(fā)展機制和尋找治療腫瘤方法成為遏制腫瘤面臨的巨大挑戰(zhàn)。腫瘤免疫療法是繼手術、化療、放療后第四大有效的抗腫瘤療法。近年來，作為B7免疫球蛋白超家族的新成員，共刺激分子B7H3在多種腫瘤組織異常高表達，并與腫瘤的生物學特性密切相關，被認為可能是一種新的腫瘤標志物和潛在的治療靶點。目的本課題旨在通過檢測人食管鱗癌組織、相應癌旁正常組織及食管鱗狀上皮不典型增生組織中B7．H3分子的表達，分析其與患者I臨床病理因素以及術后生存時間之間的關系。檢測食管癌細胞株TE．1、TE．13、ETA．109細胞中B7．113的表達，并通過靶向干擾B7．H3基因表達來研究B7．H3對食管癌細胞增殖、侵襲等生物學行為的影響。方法L用免疫組織化學法檢測食管鱗癌組織、癌旁正常組織及食管鱗狀上皮不典型增生組織中B7H3蛋白的表達以及CD8T淋巴細胞的浸潤程度。2用RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION方法檢測食管癌細胞株TE．1、TE．13、ECA109中B7．H3的表達情況。3用RTPCR、WESTERNBLOT等方法檢測B7．H3SIRNA基因沉默后ECA．109細胞中B7．H3的M_RNA和蛋白表達情況。4通過MTT實驗分析沉默B7．H3后食管癌細胞的增殖活性。5通過劃痕實驗分析沉默B7一H3后食管癌細胞的遷移運動能力。6通過TRANSWELL實驗分析沉默B7H3后食管癌細胞的侵襲能力。結果L免疫組化結果顯示，B7．H3陽性著色主要定位在腫瘤細胞的細胞質和細胞膜。在82例ESCC患者中，B7．H3陽性率為98．8％。癌旁正常組

簡介：間充質干細胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS存在于成人體內許多組織內，可以通過其貼壁能力分離出來。間充質干細胞有很強的克隆形成和擴增能力，并且具有向成骨，脂肪，軟骨，神經和內皮等多向分化潛能。MSCS已經應用于很多疾病的臨床治療，包括急性心梗，自身免疫，輔助骨髓移植，神經系統(tǒng)損傷等。本文的第一部分對骨髓和脂肪來源的MSCS骨髓MSCS簡稱BMSCS，脂肪MSCS簡稱ADAS在生物學特性上的比較。我們的結果顯示，BMSCS和ADAS細胞在細胞表型上類似，只有CD106的表達有差異，而且兩種來源的細胞都能向成骨，成脂肪，成軟骨分化，證明了其干細胞的特性。在增殖速率上，ADAS細胞比BMSCS要快群體倍增時間28HVS39H。干細胞的應用中細胞來源和豐度的問題是一個決定其應用前景的因素，我們的結果顯示，在相同體積的脂肪組織能夠得到的干細胞前體細胞CFUF的數量是骨髓的10倍以上。這個結果提示，在BMSCS和ADAS細胞具有相同功能的前提下，脂肪組織是一個更有應用前景的干細胞來源。第二部分中，我們研究了ADAS細胞向內皮細胞分化的能力。ADAS細胞在體外經過誘導之后，表達內皮細胞的一系列標志和功能，而利用下肢缺血動物模型也證明，ADAS細胞在缺血下肢分化成內皮細胞，并且實驗動物的下肢缺血狀況得到改善。利用信號通路特異性抑制劑抑制實驗，提示PI3K在ADAS細胞向內皮細胞分化中本論文的第三部分我們對MSCS在急性肝損傷中的作用進行了檢驗。MSCS的輸注能夠減少實驗小鼠的肝臟損傷，而且這種效果是細胞劑量和治療時間依賴的。我們在24H時檢測到MSCS在肝臟組織的定位，提示組織損傷對MSCS有趨化作用。我們證明，MSCS的給予，降低了肝內NKT細胞的活化，但這種免疫抑制作用不僅僅局限于肝臟組織，是全身性的。這些結果提示，MSCS的免疫調節(jié)能力在各種疾病的MSCS細胞治療中可能發(fā)揮重要作用。