簡介：肝纖維化HEPATICFIBROSIS是由于各種慢性肝病反復損傷導致的以細胞外基質EXTRACELLULARMATRIX，ECM過度沉積為特征的病理生理過程，其病因主要包括病毒感染、非酒精或酒精性脂肪性肝炎、免疫損傷和膽汁淤積等。包括肝星狀細胞HEPATICSTELLATECELLS，HSCS在內的不同來源的肝臟肌成纖維細胞是此病理生理過程的主要驅動因素。靜態(tài)的HSCS富含維生素A，位于肝細胞及竇內皮細胞之間的狄氏間隙。肝臟受到損傷時，細胞內維生素A脂滴消失，靜態(tài)HSCS轉化為肌成纖維樣細胞。這一轉化過程對肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展至關重要，稱作靜態(tài)HSCS的“激活”?；罨腍SCS被賦予了多種能力，包括增殖速度加快、ECM分泌增加、遷移能力提高等。目前，肝纖維化尚缺乏有效治療手段。肝纖維化逆轉需要纖維瘢痕降解消退，此基于膠原分泌細胞數(shù)量減少、能力弱化。已有研究證實活化的HSCS是最主要的促纖維化因素，因此，清除活化的HSCS、抑制其增殖、誘導凋亡、抑制其膠原分泌及遷移能力，是逆轉肝纖維化的關鍵治療靶點和重要策略。星型膠質細胞升高基因1ASTROCYTEELEVATEDGENE1，AEG1，也被稱作異粘蛋白METADHERIN，MTDH，于2002年在人類免疫缺陷病毒HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUS，HIV及腫瘤壞死因子ΑTUMNECROSISFACTTNFΑ感染的星型膠質細胞中首次被發(fā)現(xiàn)。在過去的十余年間，對AEG1的研究多集中在與腫瘤的關系上，包括乳腺癌、惡性膠質瘤、成神經(jīng)細胞瘤及肝癌等。研究認為，AEG1能夠促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，與腫瘤的預后密切相關，被認為是一種癌基因。例如，AEG1在肝細胞癌中高表達，且表達量與癌癥分期相關，表達越高則預后較差。近年來，隨著國內外學者研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)AEG1的功能并非只是局限在腫瘤范圍，在非腫瘤的生理、病理過程中也發(fā)揮著重要作用，如生長發(fā)育、炎癥、神經(jīng)退行性變等。這也促進人們對此基因功能譜的認識及內在機制的研究日益深入。AEG1可通過多條信號轉導通路發(fā)揮作用，最重要的有磷脂酰肌醇3激酶PHOSPHATIDYLINOSITOL3KINASE，PI3KAKT、核因子ΚBNUCLEARFACTΚB，NFΚB、細胞外信號調節(jié)激酶EXTRACELLULARREGULATEDKINASE，ERK等通路，而這些通路在肝纖維化發(fā)生、發(fā)展中均發(fā)揮重要作用。研究證明，在多種細胞中過表達AEG1可促進細胞的增殖及侵襲、遷移能力，抑制其凋亡。更重要的是，上調AEG1能促進細胞的炎癥反應及血管新生能力，而這些也是肝纖維化形成的關鍵因素。但迄今為止，AEG1與肝纖維化及HSCS之間的關系尚無報道。本課題旨在研究AEG1在肝纖維化形成及活化HSCS中的表達，應用慢病毒介導的RNA干擾RNAINTERFERENCE，RNAI技術下調AEG1表達后，觀察其對HSCS細胞活化、凋亡和遷移等生物學行為的影響，并進一步研究導致此些影響所涉及的信號轉導通路。本學位論文由以下四部分組成第一部分、星形膠質細胞升高基因1在肝纖維化大鼠肝組織及活化HSCS中的表達目的研究AEG1在大鼠纖維化肝臟及促纖維化因子刺激后HSCS中的表達。方法應用膽總管結扎BILEDUCTLIGATION，BDL及二甲基亞硝胺DIMETHYLNITROSAMINE，DMN腹腔注射兩種方法建立大鼠肝纖維化模型。BDL模型組結扎膽總管，假手術組只分離膽總管不結扎，均于術后2WK取材。DMN模型組腹腔注射1％DMN，每周連續(xù)3D，對照組腹腔注射生理鹽水，均于4WK后取材。肝組織石蠟切片經(jīng)HE與天狼星紅染色SIRIUSRED檢測肝臟病理變化。免疫組織化學法IMMUNOHISTOCHEMISTRYIHC觀察AEG1的表達及定位。WESTERNBLOT及RTREALTIMEPCR檢測AEG1蛋白及MRNA的表達。采用原位灌流、梯度密度離心技術分離大鼠原代HSCS，倒置熒光顯微鏡觀察剛分離靜止的大鼠原代HSCS，應用免疫細胞化學染色技術檢測ΑSMA表達以鑒定活化的大鼠原代HSCS。應用細菌脂多糖LIPOPOLYSACIDE，LPS∶0ΜGML，05ΜGML，15ΜGML及轉化生長因子ΒTRANSFMINGGROWTHFACTBETA，TGFΒ∶0NGML，5NGML，10NGML刺激HSCT624H，應用LPS15ΜGML或TGFΒ10NGML刺激HSCT6或原代大鼠HSCS0H，24H或48H，WESTERNBLOT檢測干預前后AEG1蛋白的表達變化。結果①HE與天狼星紅染色結果證明BDL和DMN誘導的大鼠肝纖維化模型成功建立。BDL誘導的纖維化模型可見肝臟結構紊亂，大量膠原沉積，膽管明顯擴張和增生DMN誘導的肝纖維化模型除肝臟結構紊亂外，尚可見明顯的出血性壞死、肝竇充血及大量炎細胞浸潤。②免疫組織化學法染色顯示，BDL及DMN誘導的肝纖維化大鼠肝臟細胞AEG1表達明顯升高，主要定位于細胞質，而對照組基本無表達。③WESTERNBLOT及RTREALTIMEPCR檢測顯示，BDL及DMN模型組較對照組AEG1均明顯升高P＜005）。④TGFΒ0NGML，5NGML，10NGML刺激HSCT624H，5NGML刺激組AEG1蛋白水平無明顯升高，10NGML組AEG1蛋白水平明顯升高。應用10NGMLTGFΒ刺激HSCT624H及48H，結果顯示，48H刺激組較24H組AEG1蛋白水平進一步升高P＜005）。⑤LPS0ΜGML05ΜGML15ΜGML刺激HSCT624H05ΜGML刺激組AEG1蛋白水平無明顯升高，15ΜGML組AEG1蛋白水平明顯升高。應用15ΜGMLLPS刺激HSCT624H及48H，結果顯示，48H刺激組較24H組AEG1蛋白水平進一步升高（P＜005）。⑥采用肝臟原位灌注鏈酶和膠原酶，以NYCODENZ為介質，密度梯度離心一步法成功分離出大鼠原代HSCS。細胞得率為10107至15107只，細胞存活率和純度均大于90％。在倒置顯微鏡下觀察剛分離的HSCS呈圓形，胞漿中富含脂滴，在波長328NM的熒光顯微鏡下觀察，剛分離的原代HSCS呈自發(fā)藍色熒光。培養(yǎng)至14D，大鼠HSCS呈活化狀態(tài)，脂滴消失，變成梭形肌成纖維樣細胞。⑦原代HSCS性質鑒定。剛分離的HSCS免疫細胞化學染色Α平滑肌肌動蛋白ΑSMOOTHMUSCLEACTIN，ΑSMA表達陰性原代培養(yǎng)14D后ΑSMA陽性染色率達100％。⑧應用10NGMLTGFΒ及15ΜGMLLPS刺激原代大鼠HSCS24H及48H，刺激24H組AEG1蛋白表達無明顯升高，刺激48H組AEG1蛋白表達則明顯升高P＜005）。結論AEG1在大鼠BDL及DMN誘導的肝纖維化組織中明顯升高。TGFΒ及LPS刺激HSCT6及原代大鼠HSCS可使AEG1表達升高，且呈時間、劑量依賴性。第二部分、星形膠質細胞升高基因1表達下調對肝星狀細胞活化的影響目的構建慢病毒介導的短發(fā)卡RNASHTHAIRPINRNA，SHRNA下調AEG1的表達，觀察其對HSCT6細胞增殖、凋亡及膠原合成的影響。方法設計并合成可抑制AEG1表達的SHRNA，根據(jù)轉染率摸索出適合靶細胞的感染復數(shù)MULTIPLICITYOFINFECTION，MOI，轉染進入HSCT6細胞中。利用WESTEMBLOT和RTREALTIMEPCR方法檢測AEG1蛋白和MRNA表達情況，篩選出一條抑制效率最高的SHRNA。成功下調HSCT6的AEG1表達后，CCK8CELLCOUNTINGKIT8檢測細胞增殖流式細胞學分析細胞周期變化WESTERNBLOT和RTREALTIMEPCR方法檢測Ⅰ型膠原及ΑSMA水平的變化。結果①通過預實驗摸索出MOI值為20。轉染進入細胞后，根據(jù)蛋白及MRNA檢測結果，所設計的3條SHRNA質粒片段均可顯著抑制AEG1蛋白及基因的表達，蛋白干擾的效果分別達到7522％、6021％及6436％，MRNA表達分別下降8552％、6996％及7110％，與空白對照組相比均有顯著性差異P＜005）。②下調AEG1表達促進了HSCT6細胞增殖，培養(yǎng)24H，LENTISHAEG1組113±013較LENTISHCON組157±022明顯下降P＜005）。培養(yǎng)48H，LENTISHAEG1組149±019較LENTISHCON組212±024進一步下降P＜001）。LENTISHCON組與UNINFECTED組相比均無明顯變化。③流式細胞學檢測下調AEG1表達可影響HSCT6的細胞周期。LENTISHAEG1組4867±435％較LENTISHCON組2970±308％G0G1期細胞比例上升P＜005），而G2M期細胞比例下降490±171VS1507±337，P＜005，表明細胞被阻滯在G0G1期。④下調AEG1后，HSCT6的ΑSMA的蛋白031±011VS078±012，P＜005及MRNA057±027VS114±023，P＜005水平較陰性對照組分別下降了6032％及4134％。⑤Ⅰ型膠原蛋白036±012VS073±023，P＜005及MRNA057±011VS099±011，P＜005水平較陰性對照組分別下降了5072％及4254％。而兩者的陰性對照組較未感染組無明顯變化。結論成功構建靶向AEG1的SHRNA并下調AEG1表達。下調AEG1表達可抑制HSCT6的活化。第三部分、星形膠質細胞升高基因1表達下調誘導肝星狀細胞凋亡、抑制遷移目的觀察SHRNA下調AEG1表達后對HSCT6細胞的凋亡和遷移的影響。方法下調HSCT6的AEG1表達后，膜聯(lián)蛋白ANNEXINⅤ藻紅蛋白PHYCOERYTHRIN，PE聯(lián)合標記流式細胞術檢測HSCS凋亡率末段脫氧核苷酸轉移酶介導的脫氧三磷酸尿苷缺口末段標記TERMINALDEOXYNUCLEOTIDYTRANSFERRASEUTPNICKENDLABELINGTUNEL檢測HSCT6凋亡掃描電鏡觀察細胞形態(tài)RTREALTIMEPCR測定CASPASE3MRNA的表達劃痕實驗及TRANSWELL小室檢測細胞遷移。結果①下調AEG1后，HSCT6的TUNEL染色陽性細胞率較對照組提高了193倍（P＜005）。②流式細胞技術檢測顯示，下調AEG1表達后，LENTISHAEG1組細胞凋亡率2712±572％較LENTISHCON組（888±320％）及UNINFECTED797±252％組明顯升高P＜001）。③AEG1SHRNA干擾HSCT6細胞后，與陰性對照組相比，細胞體積縮小，細胞表面微絨毛縮短，偽足縮短或消失。④下調AEG1升高了CASPASE3的MRNA表達，LENTISHAEG1組較LENTISHCON組升高了186倍P＜005。⑤劃痕愈合實驗劃痕后培養(yǎng)24H，LENTISHAEG1組劃痕愈合率041±006較LENTISHCON組056±005下降268％P＜005。培養(yǎng)48H后，劃痕愈合率LENTISHAEG1組059±013較LENTISHCON組088±012下降337％P＜005。⑥TRANSWELLASSAY實驗TANSWELL小室中接種細胞后，細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24H，結果顯示，LENTISHAEG1組細胞遷移數(shù)1820±344較LENTISHCON組4660±485，P＜005降低了7121％。結論下調AEG1表達后，可以促進HSCT6的凋亡，抑制其遷移。第四部分、星形膠質細胞升高基因1調控肝星狀細胞生物學行為的信號轉導機制目的研究慢病毒介導SHRNA下調AEG1表達對HSCT6細胞內PI3KAKT、ERK及P38MAPK信號轉導通路的調節(jié)作用。方法慢病毒介導的SHRNA下調HSCT6的AEG1表達后，WESTERNBLOT檢測PI3KAKT及ERK、P38MAPK磷酸化及總蛋白活化表達情況。結果①下調AEG1表達可以抑制PI3K、AKT水平，而對總蛋白無明顯影響。SHAEG1組與SHCON組比較，PPI3KPI3K、PAKTTHR308AKT和PAKTSER473AKT明顯下調（P＜005）。②下調AEG1表達可以抑制ERK、P38MAPK水平，而對總蛋白無明顯影響。SHAEG1組與SHCON組比較，PERKERK和PP38P38明顯下調（P＜005）。結論下調AEG1表達對HSCT6生物學行為的調控可能是通過抑制PI3KAKT及ERK、P38的磷酸化實現(xiàn)的。

簡介：南方醫(yī)科大學2010級碩士學位論文RUNX2基因突變對人牙囊細胞的生物學特性的研究EFFECTOFR【刀、【【2MUTATIONONCHARACTERIZATIONOFHUMANDENTALFOLLICLECELLSINVITRO課題來源廣東省醫(yī)學科學技術研究基金項目編號A2012106國家自然科學基金項目編號81271160學位申請人導師姓名專業(yè)培養(yǎng)培養(yǎng)所在名稱類型層次學院魏迪欣章錦才教授軒東英副教授口腔臨床醫(yī)學學術型碩士研究生廣東省口腔醫(yī)院南方醫(yī)科大學附屬醫(yī)院2013年5月6日廣州中文摘要第一章顱骨鎖骨發(fā)育不良綜合癥患者的臨床資料收集和突變檢測目的收集CCD病例，獲取RUNX2基因突變患者牙囊組織，為后續(xù)實驗打下基礎。方法對具有相關臨床癥狀的先證者詳細采集病史，明確單發(fā)或家族聚集傾向；利用X線檢查全面了解患者及其父母的全身骨骼發(fā)育情況；詳細進行口腔檢查，記錄恒牙萌出及乳牙遲萌以及埋藏牙、多生牙等典型臨床癥狀；綜合上述臨床資料，明確診斷。取CCD患者及其姐姐的靜脈血，抽提基因組DNA，L％瓊脂糖電泳檢查抽取的DNA質量，用核酸及蛋白定量儀對其進行定量，PCR擴增RUNX2的序列，純化PCR產(chǎn)物，進行雙向直接測序，對RUNX2基因測序結果進行核酸序列同源性比較分析BLASTN，分析突變位點；結果收集到一例CCD患者，具有明顯的臨床特征，符合臨床診斷。RUNX2基因測序結果核酸序列同源性比較分析BLASTN發(fā)現(xiàn)在EXON2上發(fā)現(xiàn)插入TG堿基突變，突變型為C．309310INSTG?；颊呓憬慵案改笩o明顯CCD臨床表現(xiàn)，患者姐姐基因組DNA未發(fā)現(xiàn)RUNX2突變位點，為散發(fā)病例。結論發(fā)現(xiàn)RUNX2基因C．309310INSTG突變位點為該患者的致病基因突變位點，而且該位點為首次檢出的新的突變位點。第二章RUNX吵／M人牙囊細胞的分離培養(yǎng)和鑒定目的建立攜帶RUNX2基因突變位點C．309310INSTG的人牙囊細胞體外培養(yǎng)體系RUNXZ／MHDFC。方法選取CCD患者埋伏恒牙的牙囊作為實驗組RUNX．．Z／M，要求恒牙上方?jīng)]有滯留乳，牙囊完整；對照組牙位、年齡、性別與實驗組匹配的正常人埋伏恒牙牙囊，牙囊完整。運用組織塊法對兩組牙囊進行體外原代、傳代培養(yǎng)，第3代細胞制備細胞爬片進行波形絲蛋白和角蛋白免疫細胞化學染色鑒定其細胞來源。選取CCD患者RUA冗Z／／M及正常對照組RUNXZI第3代牙囊

簡介：復旦大學碩士論文姜黃素納米粒NANOCURCTM聯(lián)合索拉非尼對肝細胞癌生物學特性的協(xié)同作用及機制研究SYNERGISTICEFFECTSANDMECHANISMOFAPOLYMERICNANOPARTICLEFORMULATIONOFCURCUMINNANOCURCTMCOMBINEDWITHSORAFENIBINBIOLOGICALBEHAVIORSOFHEPATOCELLULARCARCINOMA碩士研究生胡博導師徐泱副教授指導組成員楊欣榮博士課題基金資助國家自然科學基金重點項目NO81071661國家科技重大專項課題2013ZXLO002011004復旦大學碩士論文致謝。69論文聲明。封二

簡介：點擊查看更多IL--1β對大鼠髓核間質干細胞的細胞生物學特性的影響.pdf精彩內容。

簡介：分類號分類號學號學號D201178098學校代碼學校代碼10487密級密級博士學位論文士學位論文谷氨酰胺轉運體谷氨酰胺轉運體T2在MYCN擴增的擴增的神經(jīng)母細胞瘤中的生物學功能及分子調控機神經(jīng)母細胞瘤中的生物學功能及分子調控機制研究制研究學位申請人學位申請人任平任平學科專業(yè)學科專業(yè)藥理學藥理學指導教師指導教師卿國良卿國良答辯日期答辯日期2014年5月獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果的總結。盡我所知，除文中已經(jīng)標明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本人將承擔本聲明引起的一切法律后果。學位論文作者簽名日期年月日學位論文版權使用授權書學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權華中科技大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在_____年解密后適用本授權書。本論文屬于不保密□。（請在以上方框內打“√”）學位論文作者簽名指導教師簽名日期年月日日期年月日

簡介：間充質干細胞MESENCHYMALSTEMCELL，MSCS是一種具有自我更新和多向分化能力的干細胞，有著良好的臨床應用價值。以往研究主要集中在入骨髓來源的間充質干細胞，但由于人骨髓來源的間充質干細胞的獲得需要通過骨髓穿刺，而且其數(shù)量隨年齡的增長而急劇下降，限制了人骨髓源間充質干細胞的應用。因此，越來越多的研究者開始尋找間充質干細胞的其他來源，例如外周血、臍帶血、臍帶、乳牙以及胎盤。胎盤作為孕婦妊娠后的廢棄物，易于獲得且對其研究和應用無倫理道德的爭論，成為間充質干細胞來源的新的研究熱點。2007年人胎盤源間充質干細胞研究國際會議對人胎盤源間充質干細胞的臨床應用潛能給予了充分肯定。但是MSCS在胎盤組織中的分布以及如何有效地在體外獲得和擴增是亟待解決的問題。為此，本研究采用常規(guī)方法獲取人胎盤絨毛層間充質干細胞HUMANPLACENTACHIONDERIVEDMSCS，HCMSCS，在此基礎上，對HCMSCS體外擴增的條件及生物學特性作初步分析，從而為實驗研究和臨床應用快速有效提供種子細胞奠定基礎。第一部分HCMSCS的組織定位及體外分離培養(yǎng)與鑒定目的確定HCMSCS的組織定位，從胎盤絨毛層組織體外分離培養(yǎng)HCMSCS，在此基礎上誘導其向神經(jīng)元樣細胞和脂肪細胞分化，為體外優(yōu)化培養(yǎng)HCMSCS提供實驗參數(shù)。方法采用免疫組織化學染色確定HCMSCS在胎盤絨毛層中的組織定位；選擇性剪取胎盤絨毛層組織，經(jīng)IV型膠原酶消化、貼壁和傳代培養(yǎng)獲得HCMSCS；流式細胞儀FLOWCYTOMETRY，F(xiàn)CM檢測其表面標志；倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)；采用多種誘導條件分別將其向脂肪細胞、神經(jīng)元樣細胞方向誘導以觀察細胞的分化潛能。結果1免疫組織化學染色結果顯示，胎盤絨毛層中軸血管周圍富有CD105、CD90陽性的間充質干細胞；2采用機械分離和IV型膠原酶消化法體外分離培養(yǎng)能有效獲得HCMSCS；3倒置顯微鏡觀察HCMSCS呈典型的成纖維樣貼壁生長，流式細胞儀分析顯示，HCMSCS高表達CD73、CD90和CD105，不表達CD14、CD34、CD45和HLADR；4HCMSCS向神經(jīng)元樣細胞誘導后，誘導細胞呈神經(jīng)元樣細胞形態(tài)，NSE免疫熒光染色呈陽性；5HCMSCS經(jīng)成脂誘導2周后，胞內有明顯的脂滴出現(xiàn)，油紅染色呈陽性。結論從人胎盤絨毛層組織富集HCMSCS，經(jīng)機械分離和酶消化法結合，能有效地獲得HCMSCS，流式細胞術及誘導分化結果提示獲得的HCMSCS具有間充質干細胞標志及誘導分化能力，可以成為體外優(yōu)化培養(yǎng)的種子細胞。第二部分細胞因子對HCMSCS體外促增殖作用及其生物學特性的影響目的優(yōu)化HCMSCS的體外培養(yǎng)條件，并對優(yōu)化培養(yǎng)條件培養(yǎng)的HCMSCS生物學特性進行初步分析，為實驗研究和臨床應用快速有效地提供種子細胞奠定基礎。方法選擇性剪取人胎盤絨毛層組織，通過01％Ⅳ型膠原酶消化，按常規(guī)培養(yǎng)方法培養(yǎng)兩代后用于細胞增殖實驗，MTT法檢測下列不同濃度不同細胞因子人白細胞介素6INTERLEUKIN6，IL6、激發(fā)型鼠抗人IL6信號傳導鏈GP130GLYCOPROTEIN130，GP130、人巨噬細胞集落刺激因子MACROPHAGECOLONYSTIMULATINGFACT，MCSF、人干細胞生長因子STEMCELLFACT，SCF、人FLT3配體FLT3LIG，F(xiàn)L、人堿性成纖維細胞生長因子BASICFIBROBLASTGROWTHFACT，BFGF對HCMSCS的增殖作用；光學顯微鏡觀察優(yōu)化培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的HCMSCS的細胞形態(tài)；流式細胞儀檢測優(yōu)化培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的HCMSCS的細胞表型；油紅染色及免疫熒光分別鑒定優(yōu)化培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的HCMSCS向脂肪細胞及神經(jīng)元樣細胞誘導分化的潛能；RTPCR分析FL的受體FLT3的基因表達。結果1MTT法檢測及細胞計數(shù)結果表明，比較不同濃度的不同細胞因子對HCMSCS體外增殖作用的影響，含BFGF、FL的培養(yǎng)條件均能有效地促進細胞的體外增殖，而FL的促增殖作用更強；2光學顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)含BFGF、FL的培養(yǎng)條件培養(yǎng)的細胞呈典型的成纖維樣貼壁生長；3流式細胞儀檢測結果顯示含BFGF、FL的培養(yǎng)條件培養(yǎng)的HCMSCS高表達CD73、CD90、CDL05，不表達CD14、CD34、CD45和HLADR；4含BFGF、FL的培養(yǎng)條件培養(yǎng)的細胞經(jīng)神經(jīng)元樣細胞誘導分化后NSE免疫熒光染色呈陽性；向脂肪細胞誘導后有脂滴的出現(xiàn)；5RTPCR結果顯示HCMSCS表達FLT3的MRNA。結論諸多生物因子中BFGF和FL具有較強的促HCMSCS體外增殖作用而FL作用更為明顯，同時其能保持HCMSCS的細胞形態(tài)、細胞表型及多向分化潛能，因此FL可以作為體外培養(yǎng)HCMSCS的良好生長因子。本研究明確了人胎盤源間充質干細胞在胎盤絨毛層的組織定位，建立了有效分離、體外擴增HCMSCS的實驗體系，在此基礎上，證明了FL具有有效地促HCMSCS體外增殖的作用，而且HCMSCS表達FL的受體FLT3，為下一步研究FL對HCMSCS促增殖作用的作用機制研究提供實驗依據(jù)。

簡介：碩士學位論文學校代碼10023學號2012003003腫瘤轉移相關基因LMTAL在食管癌細胞上皮間質轉化過程中的促進作用干細胞培養(yǎng)基成球培養(yǎng)法篩選宮頸癌干細胞的生物學特性鑒定THEEFFECTOFTUMORMETASTASISASSOCIATEDGENELMTALONTHEPROCESSOFEMTINESOPHAGEALSQUAMOUSCELLCARCLNOMAISOLATIONANDBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFSPHERECELLSFROMCERVICALCANCERCELLLINE所院腫瘤研究所姓名劉歡指導教師錢海利教授導師小組錢海利教授詹啟敏教授宋詠梅教授學科專業(yè)細胞生物學研究方向分子腫瘤學完成日期二0一五年五月北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院碩士研究生學位論文圖表索G第一部分圖表索引圖1不同食管癌細胞中MTAL的表達情況28圖2熒光顯微鏡下確定MTAL過表達或敲降的情況29圖3蛋白水平確定MTAL過表達或敲降的情況29圖4敲降MTAL對食管癌增殖能力的影響30圖5過表達MTAL對食管癌增殖能力的影響30圖6敲降VITAL對食管癌克隆形成能力的影響31圖7過表達MTAL對食管癌克隆形成能力的影響31圖8MTAL在食管癌細胞中的表達定位32圖9MTAL表達水平的改變對食管癌細胞中EMT相關標志物表達的影響32圖10免疫熒光檢測敲降MTAL對食管癌細胞EIDT相關標志物表達水平的影響33圖1L免疫熒光檢測過表達MTAL對食管癌細胞EMT相關標志物表達水平的影響34圖12MTAL表達水平的改變對食管癌細胞遷移能力的影響35圖13MTAL表達水平的改變對SOX2表達的影響36

簡介：摘要●_，，’●●目的獲得高轉移舌鱗狀細胞癌細胞，為建立高轉移舌癌動物模型奠定基礎。方法采用改良侵襲實驗篩選出高低不同的轉移潛能細胞；采用MTT實驗和平板克隆實驗檢測兩種細胞的克隆差異；侵襲性實驗和遷移性實驗檢測兩種細胞侵襲和轉移差異；流式細胞儀用來檢測兩種細胞生長周期的差異；采用WESTERNBLOT矛DREALTIMEPCR方法檢測兩種細胞ZESTE基因增強子同源物2EZH2的蛋白干HMRNA表達差異。結果分離出兩種不同轉移潛能細胞。兩種不同轉移細胞的克隆形成、侵襲和遷移、細胞周期矛DEZH2蛋酐HMRNA表達均有顯著性差異T3423～59300，PO05～0001。結論從舌鱗癌細胞系中分離得到了兩種不同轉移潛能的細胞亞群，且兩種細胞具有不同釣生物學特牲關鍵詞鱗癌；舌；EZH2；細胞系研究生劉陽口腔頜面外科學指導老師陳萬濤教授英漢縮略名詞對照英文縮寫英文全稱中文全稱EZH2ENHANCEROFZESTEHOMOLOG2ZESTE基因增強子同源物2MTT3一4，5DIMETHYLTHIAZOL一2Y1一2，53一4，5一二甲基噻嘩一2一2，5PDIPHENYITETRAZOIUMBROMIDE二苯基四氮唑溴鹽PROPIDIUMIODIDE碘化丙啶RPM1640ROSWELLPARKMEMORIALINSTITUTE一1640培養(yǎng)基PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖溶液RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASE逆轉錄PCRRNASEACHAINREACTIONRIBONUCLEASE核糖核酸酶PRC2POLYCOMBREPRESSIVECOMPLEX2POLYCOMB抑制復合物2SUZL2SUPPRESSOROFZESTE12ZESTE抑制子12EEDEMBRYONICECTODERMDEVELOPMENT胚胎外胚層發(fā)育因了EDTAETHYLENEDIAMINETETRAACETICACID乙二胺四乙酸PVDFPOLYVINYLIDENEFLUORIDELITERMMOL／IMOLE／LITER“LMLHMICROLITERMILLILITERHOUR4聚偏二氟乙烯升摩爾濃度毫升小時微升

簡介：中山大學博士學位論文人牙髓側群細胞生物學特性及體外誘導分化研究姓名王勁茗申請學位級別博士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學指導教師凌均棨20100426人牙髓側群細胞生物學特性及體外誘導分化研究中山大學博士學位論文第一章人牙髓細胞體外培養(yǎng)及SP鑒定目的從人健康恒牙及乳牙牙髓組織中分離、培養(yǎng)牙髓細胞，檢測第2代DPCS中SP含量，ABCG2的表達情況，結合ABCG2在牙髓組織中的定位，分析ABCG2表達對維持牙髓SP細胞表型所起作用。方法酶消化法原代培養(yǎng)人恒牙及乳牙牙髓細胞。HOECHST33342染色后，流式細胞儀檢測恒牙牙髓細胞和乳牙牙髓細胞中SP比例。用ABCG2抗體進行免疫熒光染色，定位ABCG2在人牙髓細胞中的表達。采用熒光定量RT．PCR檢測兩種細胞中ABCG2基因表達水平。免疫組化染色確定ABCG2在正常和炎癥牙髓組織中的表達。結果體外培養(yǎng)的恒牙和乳牙牙髓細胞中均檢測到SP細胞，其中恒牙SP比例約占1％，乳牙SP約為2％。免疫熒光結果顯示ABCG2表達在牙髓細胞的胞膜。熒光定量RT．PCR檢測到兩種牙髓細胞均有ABCG2基因表達，其中乳牙牙髓細胞略高于恒牙牙髓細胞PO．05。免疫組化染色顯示ABCG2在正常牙髓中主要表達于血管周和成牙本質細胞層，而在炎癥牙髓組織中可見ABCG2細胞增多。結論人恒牙和乳牙牙髓細胞中均可檢測到SP細胞及其標志物ABCG2的表達，其中乳牙牙髓SP比例稍高。ABCG2在正常牙髓組織定位于血管周和成牙本質細胞層，炎癥牙髓組織中ABCG2表達增高。第二章體外缺血培養(yǎng)對牙髓SP的影響目的本部分將在體外模擬缺血培養(yǎng)牙髓細胞，檢測缺血培養(yǎng)對牙髓SP表型，SP標志ABCG2及干細胞標志OCT4的影響。方法確定體外模擬缺血條件2％02AND2％FBS，實驗分三組正常組，24H缺血組，48H缺血組。MTT法檢測缺血培養(yǎng)對牙髓細胞增殖的影響。流式細胞儀檢測正常組，24H和48H缺血組SP細胞比例。細胞免疫熒光檢測三個實驗組中ABCG2與OCT4的蛋白表達。熒光定量RTPCR檢測各組ABCG2和OCT4MRNA表達。結果MTT檢測數(shù)據(jù)顯示從57天開始，缺血組細胞增殖與正常組相比呈明顯抑制趨勢P0．05，尤其是48H缺血組班0．01。流式檢測發(fā)現(xiàn)不同培N

簡介：分類號單位代碼10752密級公開學號201200310寧夏醫(yī)科大學寧夏醫(yī)科大學碩士碩士專業(yè)專業(yè)學位論文學位論文小窩蛋白小窩蛋白1與基質金屬蛋白酶與基質金屬蛋白酶2在小細胞小細胞肺癌中的表達及生肺癌中的表達及生物學意義物學意義EXPRESSIONOFCAV1MMP2INSMALLCELLLUNGCANCERTHEIRBIOLOGICALSIGNIFICANCE學位申請人桑迎竹桑迎竹指導教師雷豐豐雷豐豐申請學位門類級別醫(yī)學醫(yī)學專業(yè)名稱內科學內科學研究方向呼吸病呼吸病學（肺間質纖維化肺間質纖維化）所在學院臨床醫(yī)學院臨床醫(yī)學院論文完成日期2015年3月寧夏醫(yī)科大學研究生院寧夏醫(yī)科大學研究生院NINGXIAMEDICALUNIVERSITY

簡介：分類號密級UDC學號416523211503南昌大學專業(yè)學位研究生學位論文NOTCHNOTCH1信號的激活對食管鱗狀細胞癌信號的激活對食管鱗狀細胞癌上皮上皮間質轉化和生物學的影響間質轉化和生物學的影響THEACTIVATIONOFNOTCH1SIGNALTHATEFFECTFTHEEPITHELIALMESENCHYMALTRANSFMATIONTHEBIOLOGYINTHEESOPHAGEALSQUAMOUSCELLCARCINOMA龔強培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱吳起才教授專業(yè)學位種類臨床醫(yī)學專業(yè)領域名稱外科學（心胸外科）論文答辯日期2014年6月答辯委員會主席評閱人2014年6月摘要摘要目的目的探討NOTCH1信號通路對ECA109EMT的調控作用，明確激活NOTCH1信號通路后對ECA109的增殖、凋亡、遷移能力的影響。方法方法明確NOTCH1信號通路調節(jié)食管鱗狀細胞癌EMT的作用機制，將實驗分為CONTROL、DMSO、MOCK、N1ICD、TGFΒ1、DAPTTGFΒ1、DAPT組，N1ICD慢病毒過表達載體（LVN1ICD）轉染ECA109上調NOTCH1信號通路。72H后根據(jù)分組情況分別加入5NGMLTGFΒ1誘導ECA109發(fā)生EMT和15ΜMOLMLDAPT抑制ECA109發(fā)生EMT，48H后CCK8檢測細胞活力；WESTERN–BLOTTING檢測ECADHENRIN、VIMENTIN、NOTCH1、HES1、HEY1、JAGGED1蛋白的表達變化；5周后用結晶紫染液對克隆細胞進行染色并計數(shù)；觀察ECA10924H內遷移能力的變化；ANNEXINVPI對ECA109染色并檢測細胞凋亡情況。結果結果1CCK8檢測細胞活力結果示ECA109在N1ICD組中增殖活力最強，與CONTROL組、MOCK組、TGFΒ1、TGFΒ1DAPT、DMSO、DAPT組比較具有顯著性差異（P005）。2細胞克隆計數(shù)結果示N1ICD組與CONTROL組、MOCK組、TGFΒ1、DAPTTGFΒ1和DMSO、DAPT組比較，ECA109克隆形成率及數(shù)量最多，統(tǒng)計學差異比較明顯（P005）。3劃痕試驗結果顯示N1ICD組與CONTROL組、MOCK組、TGFΒ1、TGFΒ1DAPT和DMSO、DAPT組比較，ECA109細胞劃痕愈合明顯，統(tǒng)計學差異明顯（P005）。4細胞自動分析和分選裝置檢測細胞凋亡結果示N1ICD組與CONTROL組、MOCK組、TGFΒ1、DAPTTGFΒ1和DMSO、DAPT組比較，ECA109細胞凋亡率顯著減少，有顯著的統(tǒng)計學差異（P005）。5WESTERNBLOTTING檢測結果顯示在N1ICD組中，ECADHERIN蛋白表達量明顯減少，與CONTROL組、MOCK組、TGFΒ1、DAPT、DAPTTGFΒ1和DMSO組比較有顯著性差異（P005）；VIMENTIN、NOTCH1、HES1、HEY1、JAGGED1

簡介：北京協(xié)和醫(yī)學院博士學位論文MIR181A表達載體的驗證及其對胰腺癌細胞生物學行為的影響姓名朱玥璐申請學位級別博士專業(yè)臨床醫(yī)學指導教師陳杰20090601ABSTRACTBACKGROUNDPANCREATICCANCERISAKINDOFMALIGNANTTUMORWITHPOORSURVIVALANDHIGHMORTALITYTHATISDIFFICULTFORDIAGNOSISANDTREATMENT，F(xiàn)ORTHATNOVELTUMORBIOMARKERSANDEFFECTIVETHERAPEUTICSTRATEGESAREURGENTLYNEEDEDMICRORNASMIRNASARESMALLRNASWITHALENGTHRANGEBETWEEN2024NUCLEOTIDESWHICHPARTICIPATELIFEPROGRESSASNEGATIVEPOSTTRANSCRIPTIONALREGULATORSMIRNASMAYBECOMETHENEWMARKERSANDTHERAPEUTICTARGETSACCORDINGTOITSABNORMALITYINTHEEXPRESSIONPATTERNSAMONGTHEDIFFERENTCANCERTISSUESTHEHIGHEL“EXPRESSIONLEVELOFMIR181AINPANCREATICADENOCARCINOMARELATIVETOCHRONICPANCREATITISANDNORMALPANCREASMAYREVEALTHEROLEOFTHISMIRNAINPANCREATICCARCINOGENESISTOSOMEEXTENTOBJECTIVEEVALUATETHEEFFECTOFEETOPICMIR一181AEXPRESSIONONBIOLOGICALBEHAVIOROFPANCREATICCANCERCELLMETHODTRANSFECTTHERECOMBINANTVECTORWITHPREMIR181ASEQUENCEANDBLANKCONTROLVECTORINTOTHEPANCREATICCANCERCELLMIAPACA2，RESPECTIVELYCONFIRMTHEEFFICIENCYOFTHEINSTANTEXPRESSIONUSINGREALTIMEPCRANDLUCIFERASEASSAYSYSTEMCOMPARETHEDIFFERENCEOFCELLGROWTH，CELLCYCLES，APOPTOSIS，MIGRATIONANDINVASIONBETWEENTHEGROUPSRESULTTHEREALTIMEPCRANDLUCIFERASEASSAYDEMONSTRATEDSUCCESSFULCONSTRUCTIONOFMIR181AOVEREXPRESSIONMODELINVITROBYTHERECOMBINANTVECTOR咖NSFECTIONOVEREXRESSIONOFMIR181AENHANCEDTHEINVASIONOFTHEPANCREATICCANCERCELLMIAPACA2WHILETHEREWERENOSIGNIFICANTEFFECTSONCELLGROWTH，CELLCYCLE，APOPTOSISANDMIGRATIONBYECTOPICEXPRESSIONOFMIR181ACONCLUSIONTHEOVEREXPRESSIONOFMIR181ACOULDPROMOTEINVASIONOFTHEPANCREATICCANCERCELLSBYTHETRANSFECTIONOFRECOMBINANTVECTORKEYWORDSPANCREATICCANCER；MICRORNA；RECOMBINANTVECTOR；GENEEXPRESSION4

簡介：碩士學位論文CPGODN107增強人腦膠質瘤U87細胞放射敏感性的體內外生物學活性及機制研究劉丹劉丹指導教師周紅教授導師組成員培養(yǎng)單位第三軍醫(yī)大學藥學院申請學位類別碩士學術學位專業(yè)名稱藥理學論文提交日期2013年5月論文答辯日期2013年5月答辯委員會主席評閱人二〇一三年五月分類號分類號R965密級公開學開學號2002010293學校代碼學校代碼90031目錄縮略語表1英文摘要2中文摘要7論文正文CPGODN107增強人腦膠質瘤U87細胞放射敏感性的體內外生物學活性及機制研究11第一章前言1111研究背景1112研究內容13第二章CPGODN107增強U87細胞放射敏感性的體內外生物學活性研究1421CPGODN107增強U87細胞放射敏感性的體外生物學活性研究1422CPGODN107增強U87細胞放射敏感性的體內生物學活性研究2123小結2924討論29第三章CPGODN107聯(lián)合射線對U87細胞增殖與死亡的影響3331實驗材料3332實驗方法3433實驗結果3834小結4635討論46第四章CPGODN107放射增敏作用機制的初步研究4941實驗材料4942實驗方法5143實驗結果5744小結6345討論63全文結論67參考文獻68文獻綜述73研究生期間發(fā)表的文章81致謝82

簡介：目的分析膝關節(jié)韌帶成纖維細胞的生物學特性和觀察酸性成纖維細胞生長因子ACIDFIBROBLASTGROWTHFACTAFGF、堿性成纖維細胞生長因子BASICFIBROBLASTGROWTHFACTBFGF、表皮生長因子EPIDERMALGROWTHFACTEGF和內皮細胞生長因子ENDOTHELIALCELLGROWTHFACTECGF對其增殖行為的影響。方法采用膠原酶消化培養(yǎng)法或組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)原代新西蘭大白兔的膝關節(jié)前十字韌帶ANTERICRUCIATELIGAMENTACL、內側副韌帶MEDIALCOLLATERALLIGAMENTMCL及人膝關節(jié)ACL細胞選擇合適的條件進行體外培養(yǎng)觀察膝關節(jié)韌帶成纖維細胞的生物學特性；在培養(yǎng)液中分別加入AFGF、BFGF、EGF和ECGF以XTT法測定細胞的增殖行為。結果在含體積分數(shù)為10胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中細胞生長良好、增殖快。在體外培養(yǎng)條件下兔ACL和MCL細胞形態(tài)相似都具成纖維細胞表型但MCL細胞較ACL細胞生長快；兩種細胞合成膠原的總量相同相對于MCL細胞ACL細胞合成的Ⅰ型膠原多而Ⅲ型膠原較少。人ACL細胞在體外亦具成纖維細胞表型免疫細胞學方法檢測表明人ACL細胞Ⅰ、Ⅲ型膠原及纖維連接蛋白表達呈陽性。AFGF、BFGF、EGF和ECGF四種生長因子對兔膝關節(jié)韌帶成纖維細胞有明顯的促增殖作用在某一濃度范圍內對細胞增殖的影響與因子的濃度有依賴性超過其最佳作用濃度后增加因子的濃度促進作用不再增強即呈現(xiàn)一平臺期。結論1、用膠原酶消化培養(yǎng)法或組織塊培養(yǎng)法在體外可成功培養(yǎng)出膝關節(jié)韌帶成纖維細胞。2、兔ACL、MCL細胞生物學特性存在差異這些差異有助于解釋二者不同的愈合特性。3、AFGF、BFGF、EGF和ECGF四種生長因子對兔膝關節(jié)韌帶成纖維細胞有明顯的促增殖作用。

簡介：】8S9175ATHESISDISSENATIONSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFDOCTOREFFECTOFGINSENOSIDER93ONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFLUNGSQUAMOUSCARCINOMASKMES1CELLLINEBYXINWANGSUPERVISORPROFYULINGZHENGONCOLOGYTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALMAY2010原創(chuàng)性聲明IIIJIIIILIPIIIIILLIIIIII＼1835471本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。學位論文作者日期年月日學位論文使用授權聲明本人在導師指導下完成的論文及相關的職務作品，知識產(chǎn)權歸屬鄭州大學。根據(jù)鄭州大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權鄭州大學可以將本學位論文的全部或部分編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。本人離校后發(fā)表、使用學位論文或與該學位論文直接相關的學術論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定。學位論文作者日期年月日