簡介：山東天地健生物工程有限公司山東天地健生物工程有限公司天地健保健品生產(chǎn)項目天地健保健品生產(chǎn)項目竣工環(huán)境保護驗收監(jiān)測報告表竣工環(huán)境保護驗收監(jiān)測報告表項目名稱天地健保健品生產(chǎn)項目建設單位山東天地健生物工程有限公司2018年11月36、山東君恒環(huán)?？萍加邢薰旧綎|天地健生物工程有限公司天地健保健品生產(chǎn)項目環(huán)境影響報告表（2018年9月）；7、濟南市環(huán)境保護局關于山東天地健生物工程有限公司天地健保健品生產(chǎn)項目環(huán)境影響報告表的審批意見（濟環(huán)報告表2018G134號，2018年10月8日）；8、山東天地健生物工程有限公司天地健保健品生產(chǎn)項目竣工環(huán)境保護驗收監(jiān)測委托書。驗收監(jiān)測標準驗收監(jiān)測標準標號、級別標號、級別1、廢氣顆粒物環(huán)境空氣總懸浮顆粒物的測定（重量法）（GBT154321995）。無組織非甲烷總烴環(huán)境空氣總烴、甲烷和非甲烷總烴的測定直接進樣氣相色譜法（HJ6042017）；無組織氯化氫固定污染物排氣中氯化氫的測定硫氰酸汞分光光度法（HJT271999）。2、廢水水質PH值的測定玻璃電極法（GBT69201986）；水質化學需氧量的測定重鉻酸鹽法（HJ8282017）；水質氨氮的測定納氏試劑分光光度法（HJ5352009）；水質懸浮物的測定重量法（GBT119011989）。3、噪聲工業(yè)企業(yè)廠界環(huán)境噪聲排放標準（GB123482008）。

簡介：安徽田壯生物科技有限公司年產(chǎn)5萬噸生物有機肥工程項目I安徽田壯生物科技有限公司年產(chǎn)5萬噸生物有機肥工程項目III

簡介：外科常見疾病山東中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院趙敏20179161山東中醫(yī)藥大學2017生物醫(yī)學工程引起疾病的病因20179163山東中醫(yī)藥大學2017生物醫(yī)學工程

簡介：建設項目環(huán)境影響報告表建設項目環(huán)境影響報告表項目名稱項目名稱凱賽（金鄉(xiāng)）生物材料有限公司取水工程凱賽（金鄉(xiāng)）生物材料有限公司取水工程建設單位（蓋章）建設單位（蓋章）凱賽（金鄉(xiāng)）生物材料有限公司凱賽（金鄉(xiāng)）生物材料有限公司編制日期編制日期2018年8月6日生態(tài)環(huán)境生態(tài)環(huán)境部制部制建設項目環(huán)境影響報告表編制說明建設項目環(huán)境影響報告表編制說明建設項目環(huán)境影響報告表由具有從事環(huán)境影響評價工作資質的單位編制。1、項目名稱指項目立項批復時的名稱，應不超過30個字（兩個英文字段作一個漢字）。2、建設地點指項目所在地詳細地址，公路、鐵路應填寫起止地點。3、行業(yè)類別按國標填寫。4、總投資指項目投資總額。5、主要環(huán)境保護目標指項目區(qū)周圍一定范圍內集中居民住宅區(qū)、學校、醫(yī)院、保護文物、風景名勝區(qū)、水源地和生態(tài)敏感點等，應盡可能給出保護目標、性質、規(guī)模和距廠界距離等。6、結論與建議給出本項目清潔生產(chǎn)、達標排放和總量控制的分析結論，確定污染防治措施的有效性，說明本項目對環(huán)境造成的影響，給出建設項目環(huán)境可行性的明確結論。同時提出減少環(huán)境影響的其他建議。7、預審意見由行業(yè)主管部門填寫答復意見，無主管部門項目，可不填。8、審批意見由負責審批該項目的環(huán)境保護行政主管部門批復。

簡介：污水處理設施技改及廠房建設項目污水處理設施技改及廠房建設項目竣工環(huán)境保護驗收監(jiān)測報告竣工環(huán)境保護驗收監(jiān)測報告建設單位山東勝利生物工程有限公司建設單位山東勝利生物工程有限公司編制單位山東勝利生物工程有限公司編制單位山東勝利生物工程有限公司2019年1月1目錄1驗收項目概況驗收項目概況12驗收依據(jù)驗收依據(jù)221法律、法規(guī)222驗收技術規(guī)范223工程技術文件及批復文件23工程建設情況工程建設情況331地理位置及平面布置332建設內容333主要原輔材料434生產(chǎn)設備435給排水536生產(chǎn)工藝537項目變更情況64環(huán)境保護設施環(huán)境保護設施741污染物治理處置設施742其他環(huán)保措施843環(huán)保設施投資及“三同時”落實情況95環(huán)評主要結論與環(huán)評批復要求環(huán)評主要結論與環(huán)評批復要求1051環(huán)評文件主要結論與建議1052審批部門審批意見106驗收執(zhí)行標準驗收執(zhí)行標準1261廢氣1262廢水1263噪聲127驗收監(jiān)測內容驗收監(jiān)測內容1371環(huán)保設施調試效果138質量保證及質量控制質量保證及質量控制1681監(jiān)測分析方法及儀器1682人員資質1783氣體監(jiān)測分析過程中的質量保證和質量控制1784廢水監(jiān)測分析過程中的質量保證和質量控制1885噪聲監(jiān)測分析過程中的質量保證和質量控制189驗收監(jiān)測結果驗收監(jiān)測結果1991生產(chǎn)工況1992環(huán)境保護設施調試效果2010驗收監(jiān)測結論驗收監(jiān)測結論30101環(huán)境保護設施調試效果30102審批意見落實情況31附件附件1審批意見審批意見36附件附件2生產(chǎn)運行記錄生產(chǎn)運行記錄37附件附件3應急預案備案表應急預案備案表39建設項目工程竣工環(huán)境保護建設項目工程竣工環(huán)境保護“三同時三同時”驗收登記表驗收登記表40

簡介：酵母中含有豐富的蔗糖酶EC32126,細胞膜內側細胞質，含有少量的糖。,,,,,,,,,,,外蔗糖酶,內蔗糖酶,細胞膜的外側，占蔗糖酶活力的大部分，是含有50糖成分的糖蛋白。,由于內酶含量很少，極難提取，本實驗提取純化的主要是外酶。,實驗一酵母蔗糖酶的提取與純化,本實驗以酵母為原料，通過破碎細胞、加熱除雜蛋白、乙醇沉淀、離子交換柱層析等步驟，分離純化酵母蔗糖酶，并用聚丙稀酰胺凝膠電泳對其純度進行初步檢驗。,,有機溶劑分級的原理有機溶劑分級是利用不同蛋白質在不同濃度的有機溶劑中溶解度的差異分離酶蛋白的一種方法。其原理是1、有機溶劑能降低溶液的介電常數(shù)，增加蛋白質分子上不同電荷的引力，使蛋白質溶解度下降；2、有機溶劑與水作用，能破壞蛋白質的水化膜，使蛋白質的溶解度下降。,結合力的大小取決于彼此之間相反電荷基團的靜電引力,靜電引力大小與溶液的PH值有關，因PH值決定蛋白質的解離程度。,陽離子交換劑樣品溶液PH＜PI時，酶帶正電荷；陰離子交換劑樣品溶液PH＞PI時，酶帶負電荷一般樣品溶液的PH與酶PI相差一個PH以上,樣品溶液的PH與酶PI相差越大的，帶電荷越多,通過逐漸增加洗脫液離子強度的梯度洗脫方式，可使結合在層析柱上的蛋白質按照結合力由小到大的順序依次被洗出層析柱。,,,,SAMPLEAPPLICATIONANDWASH,ELUTION,EQUILIBRATION,REGENERATION,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,本實驗中使用的DEAE52是弱堿性的陰離子纖維素，其基本骨架是纖維素、活性基團為二乙基氨乙基（DEAE）。該纖維素的吸附量大，分辨率高，化學性質穩(wěn)定。,控制樣品溶液PH＞PI時，酶帶負電荷,離子交換柱層析的原理根據(jù)物質的酸堿度、極性和分子大小的差異，使其分離的技術在分離過程中，以離子交換劑作用為主導。在眾多的交換劑中，離子交換纖維素的優(yōu)點是1、開放性的長鏈結構、較大的表面積，所以對蛋白質吸附容量大；2、纖維素上離子基團數(shù)量不多且排列疏散，對蛋白質的吸附不是太牢固，所以用緩和的洗脫條件即可達到分離目的，不致引起蛋白質變3、用其裝好的層析柱在較廣的PH和鹽濃度范圍內都不會發(fā)生體積的改變，所以有利于蛋白質層析。本實驗中使用的DEAE52是弱堿性的陰離子纖維素，其基本骨架是纖維素、活性基團為二乙基氨乙基（DEAE）。該纖維素的吸附量大，分辨率高，化學性質穩(wěn)定。,為了確定哪個峰是含目標酶，要進行酶活力的測定；用蔗糖做底物反應一段時間后，檢測生成的葡萄糖的量；用尿糖試紙初步檢測；用DNS法精確檢測。,SUCRASE（蔗糖酶）,GLUCOSE＋FRUCTOSE,SUCROSE,SEMIQUANTITATIVEASSAYOFYEASTSUCRASEACTIVITYWITHUGLUTESTTAPESUCROSEGLUCOSEOXIDASE（葡萄糖氧化酶）GLUCONICACID＋H2O2（葡萄糖酸）H2OO2COLOUREDSUBSTANCE,SUCRASE（蔗糖酶）,GLUCOSE＋FRUCTOSE,HYDROGENPEROXIDASE（過氧化氫酶）,COLOURLESSSUBSTANCE（無色物質）,,,UGLUTESTTAPE尿糖試紙,DNS法精確檢測,黃色的3,5二硝基水楊酸（DNS）試劑與還原糖在堿性條件下共熱后，自身被還原為棕紅色的3氨基5硝基水楊酸。在一定范圍內，反應液里棕紅色的深淺與還原糖的含量成正比而葡萄糖生成量又與待測液的酶活力大小成正比。,酶活定義在37℃，PH45，每分鐘催化蔗糖生成1ΜM葡萄糖的酶量為1個酶活力單位。,DNS法測葡萄糖濃度,附圖葡萄糖標準曲線,為了確定獲得的目標酶純不純，要進行SDSPAGE電泳檢測；,二、實驗步驟,1破碎細胞取5G干酵母，加5G石英砂，置于預先冷卻的研缽中，加30ML去離子水，研磨30MIN，在冰箱中冰凍約10MIN（研磨液面上剛出現(xiàn)冰結為宜），重復2次。將研磨液轉移至大離心管中，12000R/MIN離心15MIN，棄去沉淀。留05ML上清液為第一組分。,2加熱除雜蛋白將上清液轉入三角瓶，用1MOL/L醋酸溶液逐滴加入，調其PH值至50，然后迅速放入50℃的水浴中，保溫30MIN。在溫育過程中，注意經(jīng)常緩慢攪拌液體。之后在冰浴中迅速冷卻之，以12000R/MIN的轉速離心20MIN，棄去沉淀。留05ML上清液為第二組分。,3乙醇沉淀量出上清液的體積，加入等體積的95冷乙醇溶液預先放在20℃低溫下的時間不少于30MIN，于冰浴中溫和攪拌20MIN。然后以12000R/MIN的轉速離心25MIN，小心棄去上清液，沉淀瀝干。將沉淀溶解在6ML005MOL/LTRISHCL緩沖液PH值73中，攪拌5MIN以上使其完全溶解，以12000R/MIN的轉速離心25MIN，取出05ML上清液作為第三組分，剩余部分乙醇抽提液進行第4步操作。,4上柱裝DEAESEPHAROSEFASTFLOW離子交換柱層析，用005MOL/LTRISHCL緩沖液PH值73平衡。將乙醇抽提液上柱，上樣后用005MOL/LTRISHCL緩沖液PH值73平衡，然后用005MOL/LTRISHCL緩沖液內含05MOL/LNACL溶液，PH值73進行NACL梯度NACL溶液濃度為005MOL/L洗脫。,層析柱連上梯度混合器，混合器分別裝30ML005MOL/LTRISHCL緩沖液PH值73和30ML含有05MOL/LNACL的005MOL/LTRISHCL緩沖液PH值73，每1MIN收集1管。洗脫至混合器中液體流完為止，測定各接收管在280NM下的光吸收值，并用尿糖試紙半定量測定各管的酶活力。收集酶活力最高的1管酶液作為第四組分用于純度測定。,5用尿糖試紙進行半定量測定在白瓷板每孔中分別滴3滴待測酶液，再加3滴含10％蔗糖的PH45的醋酸緩沖液，攪勻，37℃放置10MIN，浸入尿糖試紙，1S后取出，60S后比較顏色的深淺，與比色卡對照。,6DNS法精確檢測,,試劑配制,葡萄糖標準液配制（1MG/ML）預先將分析純葡萄糖置80℃烘箱內約12小時。準確稱取500MG葡萄糖于燒杯中，用蒸餾水溶解后，移至500ML容量瓶中，定容，搖勻（冰箱中4℃保存期約一星期）。醋酸BUFFER02MOL/L稱取328G無水乙酸鈉，溶解于150ML蒸餾水，用冰乙酸調節(jié)其PH至45，然后定溶至200ML。10蔗糖溶液10G蔗糖溶解于醋酸BUFFER02MOL/L中，定容至100ML1MOL/LNAOH溶液4GNAOH溶解于100ML蒸餾水中,四、結果分析以梯度洗脫出的管數(shù)為橫坐標，以吸光度A280、酶活、NACL濃度為縱坐標，繪出層析曲線和酶活曲線圖。五思考題離子交換纖維素層析的優(yōu)點有哪些有機溶劑抽提蛋白質的原理是什么,數(shù)據(jù)處理,REVIEWTOTALACTIVITYSPECIFICACTIVITYHOWTOCALCULATEIT,WHATITMEANS,HOWITCHANGESDURINGAPURIFICATIONFOLDPURIFICATIONWHATITIS,HOWTOCALCULATEITYIELDWHATITIS,HOWTOCALCULATEIT,HOWITCHANGESDURINGAPURIFICATION,兩重要概念,1回收率是純化后的總活力除以純化前的總活力2純化倍數(shù)是純化后的比活力除以純化前的比活力（第一次的比活力）注比活力比活力＝活力單位數(shù)／MG蛋白,實驗二SDSPAGE電泳,一、實驗步驟1試劑配制,（1）丙烯酰胺和N,N’亞甲雙丙烯酰胺。以溫熱（利于溶解雙丙烯酰胺）的去離子水配制含有29（W/V）丙烯酰胺和1（W/V）N,N’亞甲雙丙烯酰胺的貯存液。,（2）15MTRIS，PH88（分離膠緩沖液）15MTRISHCL，04SDS（3）05MTRIS，PH68（濃縮膠緩沖液）05MTRISHCL，04SDS（4）10過硫酸銨,以上先配,等待凝膠聚合時再配（8）TRIS甘氨酸電泳緩沖液PH830025MTRIS，0192M甘氨酸，01SDS（9）樣品處理液50MMTRISHCLPH68，100MMDTTOR5巰基乙醇，2SDS，01溴酚藍，10甘油,（10）染色液01考馬斯亮藍R250，40甲醇，10冰醋酸（11）脫色液10甲醇，10冰醋酸,2SDS聚丙烯酰胺凝膠的灌制,（1）根據(jù)廠家說明書安裝玻璃板（2）確定所需凝膠溶液體積，按下表給出的數(shù)值在一小燒杯中按所需丙烯酰胺濃度配制一定體積的分離膠溶液。一旦加入TEMED，馬上開始聚合，故應立即快速旋動混合物并進入下步操作。,（3）迅速在兩玻璃板的間隙中灌注丙烯酰胺溶液,留出灌注濃縮膠所需空間梳子的齒長再加05CM。再在膠液面上小心注入一層水（約23MM高），以阻止氧氣進入凝膠溶液。（4）分離膠聚合完全后（約30分鐘），傾出覆蓋水層，再用濾紙吸凈殘留水。,（5）制備濃縮膠按下表給出的數(shù)據(jù)，在另一小燒杯中制備一定體積及一定濃度的丙烯酰胺溶液，一旦加入TEMED，馬上開始聚合，故應立即快速旋動混合物并進入下步操作。,（6）聚合的分離膠上直接灌注濃縮膠,立即在濃縮膠溶液中插入干凈的梳子。小心避免混入氣泡，再加入濃縮膠溶液以充滿梳子之間的空隙，將凝膠垂直放置于室溫下。（7）在等待濃縮膠聚合時，可對樣品進行處理，在樣品中按11體積比加入樣品處理液，在100℃加熱3分鐘以使蛋白質變性。,（8）濃縮膠聚合完全后（30分鐘），小心移出梳子。把凝膠固定于電泳裝置上，上下槽各加入TRIS甘氨酸電極緩沖液。必須設法排出凝膠底部兩玻璃板之間的氣泡。,3樣品的處理,將100UL蛋白樣品與100UL樣品處理液混合均勻，然后將此混合液在100攝氏度中水浴10MIN，冷卻至室溫后，12000RPM離心10分鐘，即做成電泳樣品。,4加樣電泳,（1）按予定順序加樣，加樣量通常為10～25ΜL（15MM厚的膠）。（2）將電泳裝置與電源相接，凝膠上所加電壓為8V/CM。當染料前沿進入分離膠后，把電壓提高到15V/CM，繼續(xù)電泳直至溴酚藍到達分離膠底部上方約1CM，然后關閉電源。,,（3）從電泳裝置上卸下玻璃板，用刮勺撬開玻璃板。緊靠最左邊一孔（第一槽）凝膠下部切去一角以標注凝膠的方位。,5染色經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的蛋白質樣品可用考馬斯亮藍R250染色。染色1～2小時或過夜。,6脫色,需3～10小時，其間更換多次脫色液至背景清楚脫色后，可將凝膠浸于水中，長期封裝在塑料袋內而不降低染色強度。為永久性記錄，可對凝膠進行拍照，或將凝膠干燥成膠片。此方法檢測靈敏度為02～10G。,二結果分析,觀察并記錄實驗結果，判斷酶的純度，拍出電泳酶純度的檢驗結果。,實驗三酵母蔗糖酶的結晶（蒸發(fā)和沉淀法相結合的懸滴蒸汽擴散結晶法）,一、原理將含有一定鹽濃度的緩沖液與含有低于這種鹽濃度的蛋白質混合溶液在一個密封體系內一起蒸發(fā)擴散，最后達到平衡，使蛋白質溶液內鹽濃度提高，而PH值接近待結晶蛋白質等電點的緩沖液又使中性鹽對蛋白質的鹽析作用更為顯著，因此導致蛋白質溶解度降低，溶液逐漸達到過飽和而析出結晶。,二、實驗步驟,1用“吹氣法”除去酒精泡洗后的24孔組織培養(yǎng)板和蓋玻片上可能帶有的灰塵，以防形成不必要的成核中心而影響晶體的觀察。,2在24孔組織培養(yǎng)板的某孔中加入1ML含02MOL/LNACL的磷酸緩沖液（PH65）作為池液,孔邊緣均勻涂抹上高真空油脂，勿使其進入孔內。,3吸取1ΜL待結晶酶蛋白溶液置蓋玻片中央,加等體積池液至此液滴中，用槍頭輕輕地的吹吸液滴以保證混合液的均勻性并避免氣泡出現(xiàn)。,4小心、迅速地翻轉蓋玻片并蓋在培養(yǎng)板的孔上,旋轉45度以保證密封良好。5室溫下靜置狀態(tài)培養(yǎng)一周以上。,三、實驗結果一周后于體視鏡下觀察酵母蔗糖酶的晶體結構。,實驗四蔗糖酶酶學性質的研究,,一、實驗原理,酶學性質的研究包括最適溫度、最適PH、米氏常數(shù)、激活劑、抑制劑等。一般通過單因素實驗確定。,二、實驗步驟,配如下溶液02MOL/L磷酸氫二鈉02MOL/L乙酸鈉02MOL/L檸檬酸02MOL/L乙酸02MOL/L磷酸二氫鈉,1、最適PH的測定（1）按下表配制緩沖溶液將兩種緩沖試劑混合后總體積均為10ML，其溶液PH值以酸度計測量值為準。,（2）準備二組各7支試管，第一組7支試管每支都加入02ML上表中相應的緩沖液，然后加入一定量的蔗糖酶。另一組7支試管也是每支都加入02ML上表中相應的緩沖液，但不再加酶而加入等量的去離子水，分別作為測定時的空白對照管。所有的試管都用水補足到08ML。,4米氏常數(shù)（KM）的測定,6DNS法精確檢測,,（3）所有的試管按一定時間間隔加入02ML蔗糖（02MOL/L開始反應，反應10MIN后分別加入1ML1MOL/LNAOH終止酶促反應，加水楊酸試劑1ML，沸水浴精確反應5MIN,冷卻后定容至20ML，然后測定A540的吸光值。,2、最適溫度的測定測定室溫、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃不同溫度下蔗糖酶催化和酸催化的反應速度。每個溫度準備1支試管，以乙酸緩沖液作為緩沖液。,6DNS法精確檢測,,（1）確定酶的稀釋倍數(shù)，試管中加入02ML02MOL/LPH45的乙酸緩沖液，02ML稀釋的酶，加水至08ML加入1ML10的蔗糖開始計時，在室溫下反應10MIN，后分別加入1ML1MOL/LNAOH終止酶促反應，加水楊酸試劑1ML，沸水浴精確反應5MIN,冷卻后定容至25ML，然后測定A540的吸光值。須得到02～03A的吸光度，準備一個水的空白對照管用于測定所有的樣品管。,（2）測定上列各個溫度下的反應速度，每次用1支試管，均加入02ML乙酸緩沖液均用水調至08ML，放入水浴溫度下使反應物平衡30秒，加入10蔗糖02ML，準確反應10分鐘，后分別加入1ML1MOL/LNAOH終止酶促反應，加水楊酸試劑1ML，沸水浴精確反應5MIN,冷卻后定容至25ML，然后測定A540的吸光值。記錄每個水浴的準確溫度。,（3）酶催化的各管A540值均進行酸催化的校正。畫出酶催化的反應速度對溫度的關系曲線。,3變性劑乙醇對游離酶活力的影響,4米氏常數(shù)（KM）的測定,三、結果分析,1畫出蔗糖酶活性與PH的關系曲線。2畫出酶催化的反應速度對溫度的關系曲線。3畫出乙醇對酶催化的反應速度影響的曲線。4采用雙倒數(shù)作圖法得出蔗糖酶的KM值。,實驗四蔗糖酶的固定化,一、實驗原理,本實驗用殼聚糖固定化酵母蔗糖酶屬共價偶聯(lián)法。為了評價固定化方法的好壞，需進行酶回收率和酶相對活力的計算。,實驗步驟,1殼聚糖載體的制備及戊二醛的偶聯(lián)（1）稱取3G殼聚糖溶于98ML蒸餾水中，攪拌均勻，再滴加2ML冰醋酸，攪拌至均勻的粘稠狀；（2）稱取8GNAOH置大燒杯中，加入180ML蒸餾水及20ML甲醇。,（3）將拔出推塞的注射器架在鐵架臺上，倒入粘稠狀的殼聚糖溶液，使殼聚糖溶液從20CM高的注射器出口滴入大燒杯中，以制備殼聚糖微球載體。,（4）殼聚糖溶液滴加完畢后，靜止片刻，待微球完全沉入燒杯底部時，反復水洗多次至PH值中性，瀝干水分。加入1戊二醛溶液100ML，靜置2H，使戊二醛偶聯(lián)于殼聚糖載體上。,2固定化酶的制備（1）將靜置2H后的殼聚糖微球載體中的戊二醛溶液倒掉，再用蒸餾水洗滌5次，以除去多余的戊二醛。（2）將實驗一純化得到的酵母蔗糖酶酶液1ML用蒸餾水稀釋至100ML,與偶聯(lián)戊二醛的殼聚糖載體混合，靜置偶聯(lián)過夜。,3固定化酶的評價分別測游離酶、固定化酶以及殘留酶液的酶活力。,三結果分析,酶活回收率,,,固定化酶活力,游離酶總活力,100,酶的相對活力,,,固定化酶活力,游離酶活力殘留酶液活力,100,實驗五蔗糖酶的化學修飾,一、實驗原理,N溴代琥珀酰亞胺（NBS）能特異地修飾蛋白質分子中色氨酸殘基的吲哚基團。若色氨酸殘基是酶活性中心的必需基團，那么經(jīng)NBS修飾后，酶活性喪失的程度與修飾劑的濃度有化學計量關系。,在底物存在的情況下，修飾劑NBS不影響酶的活力。,P,,,,,,,,,,NH,,,,,,,,,,,,,,N,,BR,,,,,O,O,,P,,,,,,,,,NH,,,,,,,,,,,N,,,O,,,,,,OH,HBR,吲哚基團N溴代琥珀酰亞胺羥吲哚衍生物,氧化,PH45,二、實驗步驟,取8只試管，編號，按下表操作,三、結果分析,以NBS濃度為橫坐標，相對活力為縱坐標繪制折線圖，并分析不同濃度的NBS對酵母蔗糖酶活力的影響，得出結論。,

簡介：安徽望江凱迪生物質發(fā)電廠2X12MW機組建安工程土建監(jiān)理細則安徽電力工程監(jiān)理有限責任公司安徽望江凱迪生物質發(fā)電廠工程項目監(jiān)理部1編制依據(jù)編制依據(jù)1普通混凝土配合比設計規(guī)程JGJ5520002地基與基礎工程施工質量驗收規(guī)范（GB502022002）3屋面工程質量驗收規(guī)范GB5020720024混凝土結構工程施工質量驗收規(guī)范GB5020420025火力發(fā)電廠工程測量技術規(guī)程DLT500120046建筑地面工程施工質量驗收規(guī)范GB5020820027水工混凝土施工規(guī)范DLT514420018鋼筋焊接接頭試驗方法標準JGJT2720019電力建設施工質量驗收及評定規(guī)程第一部分土建工程篇（20050601實施）10建筑工程施工現(xiàn)場供電安全規(guī)范GB501949311建筑防腐蝕工程及驗收規(guī)范（GB502122002）12電力建設安全工作規(guī)程第1部分火力發(fā)電廠（20021201實施）13電力建設安全健康與環(huán)境管理工作規(guī)定（20020121實施）14安徽望江凱迪生物質發(fā)電廠212MW機組建筑安裝工程施工合同15安徽望江凱迪生物質發(fā)電廠212MW脫硫工程建設監(jiān)理合同16安徽省電力工程監(jiān)理有限責任公司（ISO90012000）質量體系文件；安徽望江凱迪生物質發(fā)電廠2X12MW機組建安工程土建監(jiān)理細則安徽電力工程監(jiān)理有限責任公司安徽望江凱迪生物質發(fā)電廠工程項目監(jiān)理部3工序之間的關系，審查圖紙有無差錯和表達不清楚的地方，對工程關鍵部位和施工難點做到心中有數(shù)，并做好施工圖會審工作；（2）嚴格按照施工規(guī)范、驗收標準、設計圖紙進行施工，并經(jīng)常深入現(xiàn)場檢查施工質量和質量保證技術措施的落實；（3）對施工單位交驗的有關施工質量報表，應進行核查或認定。對于隱蔽工程未經(jīng)監(jiān)理核查簽字不能繼續(xù)施工；（4）督促承包商完善質量保證體系；（5）組織設計交底和圖紙會審；（6）督促承包商完善工序控制，把影響工序質量的因素都納入受控狀態(tài)；（7）嚴格工序間的交接檢查，重要工序（包括隱蔽作業(yè)）需按有關質量驗收標準經(jīng)監(jiān)理人員檢查驗收，否則不得進行下道工序；213工程質量事故的處理責成事故責任方及時寫出事故報告并提出處理方案，經(jīng)審批后，監(jiān)督其實施。對于重大施工質量事故，應在事故發(fā)生后24H內發(fā)出監(jiān)理通知單，通知承包商，并向業(yè)主和有關主管部門報告，以便及時組織有關單位共同研究處理；3、質量控制的方法與措施、質量控制的方法與措施31定位及高程控制要點1審核施工單位報送的施工測量成果。2檢查施工單位專職測量人員的崗位證書及測量設備檢定證書。3復合控制樁的校核成果，控制樁的保護措施以及平面控制網(wǎng)，高程控制網(wǎng)和臨時水準點的測量成果。4場區(qū)方格網(wǎng)應按下表進行控制等級邊長（CM）測角中誤差（″）邊長相對中誤差Ⅰ級1003005≤130000Ⅱ級1003008≤1200005建筑物的控制網(wǎng)按下表進行控制等級邊長相對中誤差測角中誤差Ⅰ級1300007″√N

簡介：建設項目環(huán)境影響報告表建設項目環(huán)境影響報告表項目名稱建設單位建設單位蓋章蓋章江蘇貝索生物工程有限公司江蘇貝索生物工程有限公司編制日期編制日期2018年9月4日江蘇興盛環(huán)境科學研究院有限公司編制江蘇興盛環(huán)境科學研究院有限公司編制全自動血型配血分析儀、血型專用離心機、全自動血型配血分析儀、血型專用離心機、血型專用孵育器移地搬遷項目血型專用孵育器移地搬遷項目2續(xù)表12數(shù)量（臺）類別名稱型號改建前改建后增減量備注立式加工中心VMP32A011國產(chǎn)，新增數(shù)控鉆孔攻絲中心TCS2Z022國產(chǎn)，新增鉆銑床ZX7032A011國產(chǎn)，新增冷卻干燥機SDX30F011國產(chǎn)，新增空氣壓縮機SDX30011國產(chǎn)，新增砂輪機MQ3225011國產(chǎn)，新增鋸床GB4028011國產(chǎn)，新增電子天平FA1004011國產(chǎn)，新增臺式透光率測試儀SDR851011國產(chǎn)，新增生產(chǎn)車間合計51813水及能源消耗量名稱消耗量名稱消耗量水（噸年）305燃油（噸年）電（千瓦時年）10燃氣（標立方米年）燃煤（噸年）其他（噸年）廢水排水量及排放去向本項目無生產(chǎn)廢水產(chǎn)生，生活污水產(chǎn)生量為240TA，接入江陰市清泉水處理有限公司集中處理，尾水達標后最終排入東橫河。放射性同位素和伴有電磁輻射的設施的使用情況無

簡介：中美天道（北京）生物技術有限公司中美天道（北京）生物技術有限公司辦公研發(fā)樓工程辦公研發(fā)樓工程旁站監(jiān)理細則編制編制審批審批中航勘察設計研究院中航勘察設計研究院工程項目監(jiān)理部工程項目監(jiān)理部2010年09月01日中航勘察設計研究院辦公研發(fā)樓工程旁站監(jiān)理細則3一、工程概況一、工程概況1、中美天道（北京）生物技術有限公司辦公研發(fā)樓工程。2、本工程位于北京亦莊經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)東區(qū)11號，東側為經(jīng)海四路，北側為科創(chuàng)五路，總建筑面積；42721㎡，地下二層，地上十二層，局部十三層。3、本基坑開挖深度約10200M，周長約340M，基坑安全等級為1級。圍護結構采用鋼筋混凝土錨噴支護。4、圍護結構平面布置應滿足地下室邊墻外界要求，深度應滿足地下室施工要求，同時施工操作方便可行，經(jīng)濟合理。二、二、編制依據(jù)編制依據(jù)本旁站監(jiān)理方案的編寫主要依據(jù)我國的法律、法規(guī)和行政規(guī)章、現(xiàn)行建筑工程規(guī)范、工程建設強制性技術標準、本工程合同、勘察設計文件等，主要有1、中華人民共和國建筑法2、建筑工程質量管理條例3、建設工程旁站監(jiān)理管理規(guī)定4、建設工程監(jiān)理人員崗位職責管理規(guī)定5、建設工程監(jiān)理規(guī)范GB5031920006、建筑工程施工質量驗收統(tǒng)一標準GB5030020017、本項目監(jiān)理規(guī)劃8、本項目經(jīng)審核批準的施工組織設計、施工方案9、本工程地質勘察資料，含業(yè)主已通過有資質的審圖機構審查并做出“通過審查記錄”的施工圖設計文件（圖紙、設計說明、設計指定的標準圖集、設計交底會議紀要、設計變更文件、建設單位提出的并由原設計確認的工程變更文件等）。

簡介：城市設計城市設計考試大綱考試大綱（2018年）年）一、一、大綱綜述大綱綜述城市設計為城鄉(xiāng)規(guī)劃學學術型碩士研究生初試科目和風景園林專業(yè)學位風景園林方向考生選考科目。二、二、考試內容考試內容第一部分城市設計內容城市公共中心、歷史地段、居住區(qū)、濱水開放空間等地段的城市設計，面積約為1020公頃。包括總平面圖（圖紙比例11000）、規(guī)劃分析圖（比例不限，包括功能結構圖、綠地景觀規(guī)劃圖、道路系統(tǒng)規(guī)劃圖等），以及表達設計意圖的整體鳥瞰圖，簡要的設計說明。所有設計內容繪制于不少于2張A2圖紙上，可以是白色繪圖紙、硫酸紙、拷貝紙（無任何標記），圖紙由考生自備，繪圖表現(xiàn)形式不限。第二部分重點地段景觀設計內容在第一部分設計成果基礎上，選取不小于2公頃的重要公共地段（應包含公共建筑、公園、廣場或公共綠地）進行景觀深化設計。設計成果應包括總平面圖（圖紙比例1200至1500）、以及表達設計意圖的透視圖，簡要的設計說明，繪制于不少于一張A2圖紙上?？梢允前咨L圖紙、硫酸紙、拷貝紙（無任何標記），圖紙由考生自備，繪圖表現(xiàn)形式不限。三、三、考試要求考試要求考生須根據(jù)考試科目要求準備相應圖紙及考試用品，并嚴格按照試題要求進行作答。四、四、試題結構試題結構試題分數(shù)150分，分為一、二兩個部分，其中第一部分90分，第二部分60分。五、五、考試方式及時間考試方式及時間考試方式為閉卷、筆試，以快速設計繪畫方式體現(xiàn)，時間為6小時，滿分為150分。六、六、主要參考書主要參考書無

簡介：第十章微生物與基因工程,基因工程技術,基因工程（GENETICENGINEERING把分離到的或合成的基因經(jīng)過改造，插入載體中，導入宿主細胞內，使其擴增和表達，從而得到大量基因產(chǎn)物，或令生物表現(xiàn)出新的形狀。,基因工程大事記,1973COHEN和BOYER第一次將重組體DNA轉化大腸桿菌，實現(xiàn)了DNA的分子克隆1978GENENTECH公司人胰島素世界上第一種基因工程蛋白藥物1982第一個基因工程藥物重組人胰島素在英、美獲準使用1985第一批轉基因家畜（兔、豬和羊），中國轉基因魚,1993基因工程西紅柿在美國上市2019英國羅斯林研究所克隆羊多莉20199中國獲準加入人類基因組計劃,負責測定人類基因組全部序列的12000626科學家公布人類基因組工作草圖2019211公布人類基因組基本信息,第一節(jié)基因工程概述,三項重要技術為基因工程奠定了基礎19671970年RYUAN和HOSMITH等發(fā)現(xiàn)的限制性核酸內切酶為基因工程提供了有力的工具；1972年BERG等將SV40病毒DNA與噬菌體P22DNA在體外重組成功；1973年COHEN和BOYER第一次將重組體DNA轉化大腸桿菌，實現(xiàn)了DNA的分子克隆1977年BOYER等首先將人工合成的生長激素釋放抑制因子14肽的基因重組入質粒，成功地在大腸桿菌中合成得到這14肽；19751977年SANGER、MAXAM和GILBERT先后發(fā)明了三種DNA序列的快速測定法；90年代全自動核酸序列測定儀的問世；,一、基因工程基本過程,1、目的基因的提取分離或合成外源基因。2、體外重組外源基因與載體體外連接，構建重組DNA分子；3、轉化重組DNA分子導入細胞。4、擴增該克隆DNA。5、篩選與鑒定；6、基因表達控制適當條件，外源DNA表達。7獲得表達產(chǎn)物或轉基因動物、轉基因植物。,一切基因工程操作都離不開微生物1、基因工程所用克隆載體主要是用病毒、噬菌體和質粒改造而成的。2、基因工程所用千余種工具酶是從微生物中得到的。3、微生物細胞是基因克隆的宿主。4、大規(guī)模表達基因產(chǎn)物，構建工程菌，利用工廠發(fā)酵來實現(xiàn)。5、提供基因資源（抗高溫、高鹽、高堿、低溫等特性）。6、模式生物提供基礎理論。,二、微生物與基因工程關系,第二節(jié)基因的分離合成和誘變,利用重組DNA技術，可將某一原核生物或真核生物染色體基因組的全部遺傳信息，貯存在由重組體群體（如重組噬菌體群體）構成的基因文庫GENOMICLIBRARY或CDNA文庫CDNALIBRARY,1基因文庫的構建,所謂基因文庫是指生物染色體基因組各DNA片段的克隆總體。文庫中的每一個克隆只含基因組中某一特定的DNA片段。一個理想的基因文庫應包括該生物染色體基因組全部遺傳信息（即全部DNA序列）。,2、基因文庫的構建步驟（1）從組織或細胞提取基因組DNA；（2）用限制性酶部分水解或機械剪切成適當長度的DNA片段，經(jīng)分級分離選出一定大小合適克隆的DNA片段；（3）選擇容載量較大的克隆載體，通常采用Λ噬菌體或柯斯質粒載體，在適當位點將載體切開；（4）將基因組DNA片段與載體進行體外連接；（5）重組體DNA直接轉化細菌或用體外包裝的重組Λ噬菌體顆粒感染敏感細菌細胞。最后得到攜帶重組DNA的細菌群體或噬菌體群體即構成基因文庫。,2CDNA文庫構建,所謂CDNA文庫是指生物體全部MRNA的CDNA克隆總體。CDNA文庫中的每一個克隆只含一種MRNA信息。由于真核生物基因組十分龐大，因此要求構建基因文庫的庫容量要足夠大，才能篩選到某一目的基因。但基于這樣一個事實，即細胞中的MRNA分子數(shù)要比基因組的基因數(shù)小得多（通常大約僅有15左右基因被表達），因而若由MRNA逆轉錄為CDNA，那么所構建的CDNA文庫的庫容量相應比基因文庫小。,構建CDNA文庫的主要步驟①從生物體或細胞中提取MRNA。②利用逆轉錄酶以寡聚DT或隨機寡聚核苷酸為引物合成CDNA的第一條鏈。③利用DNA聚合酶I，以CDNA第一條鏈作為模板，用適當引物合成CDNA第二條鏈常用RNA酶H在雜交分子的MRNA鏈上造成切口和缺口，產(chǎn)生一系列RNA引物或是除去雜交分子的MRNA后，加入隨機引物，即可合成第二條鏈。④CDNA與載體的體外連接。⑤噬菌體的體外包裝及感染或質粒的轉化。由于CDNA不含基因的啟動子和內含子，因而序列比基因短，其克隆載體可選用質?；虿《据d體。,基因的化學合成,DNA的合成自DNA合成儀問世后，化學合成已可完全自動化，在半個小時內可合成3035個堿基的寡核苷酸。目前化學合成寡核苷酸片段的長度約為150200個核苷酸左右。,PCR擴增技術的原理和應用,聚合酶鏈式反應（POLYMERASECHAINREACTION,PCR），是一種在體外快速擴增特定DNA序列的新技術。BBIOO/VIDEO/2019/351HTM,如果DNA片段兩端的序列是已知的，則先要合成一對寡聚核苷酸引物，它們各自與所需擴增的靶DNA片段的末端互補。PCR由3個基本反應組成。①變性加熱，模板DNA經(jīng)熱變性，成為兩條單鏈；②退火使溫度下降，寡核苷酸引物即與模板DNA中所要擴增序列兩端的堿基配對；③延伸在適宜條件下引物3‘端向前延伸，合成與模板堿基序列完全互補的DNA鏈。DNA片段以2的指數(shù)增長，重復2530次循環(huán)，擴增的DNA片段拷貝數(shù)可增至106107倍。,PCR擴增技術原理,PCR技術的實際用途,①可用于DNA的擴增和克隆，制備單鏈或雙鏈DNA探針；也可用于定位誘變和DNA測序。②在臨床醫(yī)學上可用于檢測病原體，診斷遺傳病，以及對癌基因的分析確定。③用于法醫(yī),以鑒別個體和判定親緣關系。,基因誘變,寡核苷酸介導的突變盒式誘變PCR介導的突變,第三節(jié)微生物與克隆載體,載體克隆載體、表達載體、穿梭載體克隆載體外源DNA片段進行克隆，需要一個合適的載體，將其運送到細胞中并進行復制與擴增。這種以擴增外源DNA為目的載體，稱為克隆載體。,克隆載體應具備的性質,1、可獨立自主復制，具備復制原點；2、具有若干限制酶單一切割位點，且位于載體復制的非必需區(qū)，以便插入外源基因后不影響復制。3、有可供選擇的遺傳標記（抗性基因、顯色反應），以便于對陽性克隆的鑒別和篩選。4、具有一定安全性，在胞內不發(fā)生重組與轉移，在胞外不發(fā)生不能自由擴散。,目前克隆載體種類,質粒載體Λ噬菌體載體柯斯質粒載體M13噬菌體載體真核細胞的克隆載體人工染色體。,一、質粒載體,1、特點（1）具有獨立復制起點；（2）具有較小的相對分子質量。1－200KB，外源DNA≤15KB；（3）具有較高拷貝數(shù)，多為松馳控制型。人為增加拷貝數(shù)可用終濃度10－20ΜG/ML，氯霉素停止細胞蛋白合成，宿主DNA合成終止，質粒復制正常進行，可達數(shù)千個拷貝；（4）具有便于選擇的標記；（5）易于導入細胞，質?？赏ㄟ^轉化和電穿孔等方法導入細胞；（6）具有限制酶單一識別位點。,PBR322的結構特征,環(huán)狀雙鏈DNA分子，由4361BP組成，松馳型COLEⅠ復制起點，外源DNA大小為5KB左右四環(huán)素抗性基因（TETR）、氨芐青霉素抗性基因（AMPR）24單一酶切位點（TETR中7個，AMPR中3個）。,二、Λ噬菌體克隆載體,Λ噬菌體克隆載體的構建,野生型ΛDNA包裝的上限為505KB，本身長度為485KB，插入片段至多為20KB，如果將其縮短便能夠提高裝載量。插入型載體在插入位點有一酶切口，但這必須是唯一的；取代型載體在取代位點有兩個酶切口，多了也不行，而天然的ΛDNA上有許多重復的酶切口，如ECORI5個，HINDIII7個，這些多余的酶切口必須被刪除,I插入型載體,經(jīng)改造后的長度為37KB，為包裝的下限，插入片段最大為135KB（50537KB）由于該類載體重組與否均可包裝，因而為區(qū)分組子與非重組子必須攜帶標記基因。,II取代型載體,經(jīng)改造后的長度約為40KB，含兩個酶切口，兩者間的距離為14KB，然后用外源DNA片段取代之。包裝下限為37KB，這類載體不需要標記基因，因為空載的載體DNA只有26KB，不可能被包裝，因而無法進入受體細胞中去。,Λ噬菌體載體的優(yōu)點,可在體外包裝成噬菌體，高效感染大腸桿菌裝載外源DNA的量大（≤23KB）重組ΛDNA的篩選提取方便Λ噬菌體載體常用于構建基因文庫。,三、M13噬菌體載體,1、M13噬菌體基本特點（1）M13噬菌體顆粒是絲狀的，只感染雄性大腸桿菌。感染宿主后不裂解宿主細胞，而是從感染的細胞中分泌出噬菌體顆粒，宿主細胞仍能繼續(xù)生長和分裂；（2）M13噬菌體的基因組為單鏈DNA，由6407的堿基組成；（3）在宿主細胞內，感染性的單鏈噬菌體DNA（正鏈）在宿主酶的作用下轉變成環(huán)狀雙鏈DNA，用于DNA的復制，因此這種雙鏈DNA稱為復制型DNA（REPLICATIVEFORMDNA），即RFDNA；,利用真核生物作為克隆載體宿主具有兩個重要意義。第一，它促進了對真核生物復雜基因組及其基因調控的研究；第二，它有利于真核基因產(chǎn)物的翻譯后加工。釀酒酵母是一種理想的真核生物克隆載體宿主。,四、真核生物的克隆載體,1酵母質粒載體酵母質粒載體都是利用其2ΜM質粒和其酵母染色體組分與細菌質粒PBR322構建而成的。可分別在細菌、酵母中復制，又稱穿梭質粒。主要有三種附加體質粒、復制質粒、整合質粒,,（1）附加體質粒（EPISOMALPLASMID）,①結構PBR322的復制起點、AMPR（氨芐青霉素抗性基因）；2ΜM的復制起點；酵母選擇標記的URA3基因（尿嘧啶核苷酸合成酶基因3）。②細胞中拷貝數(shù)酵母中高拷貝數(shù)。,（2）復制質粒,含有來自細菌質粒PBR322的復制起點；氨芐青霉素抗性基因（AMPR）和四環(huán)素抗性基因（TETR）。來自酵母染色體的自主復制序列（ARS）；作為酵母選擇標記的URA3基因和TRP1基因（色氨酸合成酶基因1）。這種質粒是穿梭質粒，能在大腸桿菌或酵母細胞中復制，重組質粒導入酵母細胞中可獲得中等拷貝數(shù)的質粒。,（3）整合質粒,含有來自PBR322的復制起點；氨芐青霉素抗性基因（AMPR）、四環(huán)素抗性基因（TETR）。來自酵母的URA3基因；它既可以作為酵母細胞的選擇標記，也可與酵母染色體DNA進行同源重組。這種質?？稍诖竽c桿菌中復制，但不能在酵母細胞中進行自主復制。一旦導入酵母細胞，可整合到酵母染色體上，成為染色體DNA的一個片段。,2真核生物病毒載體,（1）哺乳動物病毒載體目前利用許多哺乳動物病毒如SV40，腺病毒、牛痘病毒、逆轉錄病毒等改造后的衍生物作為基因載體。（2）昆蟲病毒載體主要為高克隆容量（100KB）；其次具有高表達效率（25％）；安全，僅感染無脊椎動物；（3）植物病毒載體,五、人工染色體,酵母人工染色體（YAC）能容納最大外源DNA片段。1、組成著絲粒（CENTROMERE，CEN）、端粒（TELOMERE，TEL）、酵母自主復制序列（ARS）、選擇性標記（如URA3）。2、功能大片段克?。?00萬BP），多用于真核生物基因庫的載體。3、相關細菌人工染色體（BAC）。,常用工具酶種類內切酶把DNA長鏈切割為短的片段連接酶將2段DNA片段拼接起來聚合酶催化合成形成核酸鏈末端轉移酶片段末端加接多聚核苷酸核酸酶水解酶，非專一性反向轉錄酶逆轉錄酶,第四節(jié)微生物與基因工程工具酶,一、限制性內切酶,1、限制性內切酶的定義是指已被證明是限制修飾系統(tǒng)中的一個組成部分，具有識別雙鏈DNA分子中的某種特定核酸序列并由此切割DNA雙鏈結構的酶統(tǒng)稱為限制性內切酶。,限制性內切酶的發(fā)現(xiàn),LURIA和HUMAN發(fā)現(xiàn)細菌能將外來的DNA片段在某些專一位點上切斷，從而保證其不被外來噬菌體所感染，而其自身的DNA由于被一種特殊的酶所修飾（甲基化）而得以保護，這種現(xiàn)象叫做限制－修飾。SMITH和WILCOX從流感嗜血桿菌中分離到一種酶，能夠特異性的切割DNA，這個酶被命名為HINDI,這是第一個分離到的限制性內切核酸酶。,3、限制性核酸內切酶的命名,按酶來源菌的屬、種名而定，取屬名的第一個字母與種名的頭兩個字母組成的三個斜體字母作略語表示；如有株名，再加上一個字母，其后再按發(fā)現(xiàn)的先后寫上羅馬數(shù)字。例如從流感嗜血桿菌D株（HAEMOPHILUSINFLUENZAED）中先后分離到3種限制酶，則分別命名為HINDⅠ、HINDⅡ和HINDⅢ。,4、限制性內切酶的類型,限制性內切酶可分為三大類型類型I和類型III由于識別位點并非嚴格專一，很少被應用。類型II的特點識別位點嚴格專一；識別序列的堿基數(shù)一般為4、6、8個BP；識別位點經(jīng)常是一種回文序列的DNA；是DNA重組技術最為常用的工具酶。,寡核苷酸順序具有二沖旋轉對稱軸，又稱為回文順序（PALINDROMICSEQUENCE）GAATTCCTTAAG也有一些對稱順序被一個或幾個非特定的核苷酸間隔開。N四種均可PY嘧啶PU嘌呤如GTPYPUACHINDI,6、限制性內切酶的切割方式,就切割位點相對于對稱軸的位置而言,切割方式有三種在對稱軸5側切割產(chǎn)生5粘端在對稱軸3側切割產(chǎn)生3粘端在對稱軸處切割產(chǎn)生平端,二、DNA連接酶,配對的堿基產(chǎn)生的氫鍵還不足以把兩個DNA分子拴在一起，還需要通過DNA連接酶在3’羥基和5’磷酸基團之間形成新的磷酸二酯鍵。大多數(shù)DNA連接酶都是從T4噬菌體中分離出來的，它可以催化在兩條DNA鏈的末端形成磷酸二酯鍵，包括粘性末端堿基配對的兩條DNA鏈和末端都是平末端的兩條DNA鏈,其它常用工具酶,3TAGDNA聚合酶是一種耐熱的依賴于DNA的DNA聚合酶，具有5’→3’聚合酶活性，該酶最適反應溫度為7580℃，主要用途是進行PCR反應。,4逆轉錄酶（依賴于RNA的DNA聚合酶）主要作用是將MRNA反轉錄成CDNA,（二）堿性磷酸酶,其作用是去除DNA、RNA的5’磷酸根（5’P），以防自身環(huán)化；另外在用32P標記5’末端前，可先用其去除DNA或RNA上的5’P,（三）核酸酶,S1核酸酶主要用于去除DNA片段粘末端而產(chǎn)生平端；打開CDNA中發(fā)夾結構，使其成平端。核糖核酸酶（RNASEA在質粒提取時降解RNA；從DNARNA雜交體中去除未雜交的RNA區(qū)。,第五節(jié)外源基因導入宿主細胞,二、克隆載體對宿主的要求,一、宿主的基本要求與性質1、能夠高效吸收外源DNA；2、根據(jù)載體的類型和標記選擇合適宿主，例M13噬菌體載體，選擇含有F因子雄性大腸桿菌；Λ噬菌體載體，選擇ECOLIK12。3、不具有限制修飾系統(tǒng)，故不會使導入宿主細胞內未經(jīng)修飾的外源DNA發(fā)生降解；4、一般為重組缺陷型（RECA）菌株，使克隆載體DNA與宿主染色體DNA之間不發(fā)生同源重組；5、安全需嚴格限制載體的宿主范圍，以達到盡量避免重組體從實驗室逃逸出去。,1、外源DNA導入導入原核細胞（1）轉化和轉染外源DNA以重組質粒載體形式存在，則可通過轉化導入原核細胞；外源DNA構建成重組噬菌體DNA或重組噬菌質粒，則可通過轉染方式進入宿主細胞。感受態(tài)細胞用氯化鈣處理宿主細胞，使細胞變得易于吸引外源DNA。（2）ΛDNA的侵染（體外包裝轉染技術）體外包裝（將重組DNA分子與Λ噬菌體的頭部、尾部以及有關包裝蛋白混合，組裝成具感染力的Λ噬菌體粒子）感染宿主。較轉染效率要高出104－105倍。,三、外源基因導入宿主細胞,,2、外源DNA導入真核細胞（1）外源DNA導入酵母細胞（轉化）,酵母細胞,原生質體,蝸牛酶,CACL2和聚乙二醇,復合體（含DNA的原生質體）,,,長出有壁細胞,再生培養(yǎng)基中,,（2）外源DNA導入哺乳動物細胞其中最簡便的是微量注射法和電穿孔法。（3）外DNA導入植物細胞除了微量注射法及電穿孔法可將外源DNA導入植物細胞外。還有兩種方法，一種是基因槍法或稱微彈槍法；另一種是將含有重組TI質粒的根癌土壤桿菌與植物原生質體共培養(yǎng)（即共培養(yǎng)法）或與植物葉片培養(yǎng)（即葉片培養(yǎng)法）。,1載體選擇標記的鑒定,1抗生素平板法2插入失活法3Β半乳糖苷酶顯色反應法,四、目的克隆的篩選與鑒定,抗生素平板法,,缺點假陽性高,插入失活法,因外源DNA的插入而導致基因失活的現(xiàn)象，稱為插入失活（INSERTIONALINACTIVATION）,Β半乳糖苷酶顯色反應法,蘭白斑篩選某些載體，如M13，PUC系列，PGEM質粒系列等，都帶有LACZ’基因的一段序列，編碼Β–半乳糖苷酶的Α肽；而宿主細胞為LACZ△M15的突變株時，Α肽可與△M15進行Α互補，產(chǎn)生具有活性的Β–半乳糖苷酶。若將轉化細胞涂布在含有異丙基硫代ΒD半乳糖苷IPTG和呈色物質5溴4氯3吲哚ΒD半乳糖苷X–GAL培養(yǎng)基的平板上時，可形成藍色菌落。,當外源DNA插入到這一區(qū)段，則會破壞Α互補作用。這時若將轉化細胞涂布在含有IPTG和X–GAL培養(yǎng)基的平板上，則形成無色菌落。,2目的基因序列的鑒定,菌落（或噬菌斑）原位雜交（INSITUHYBRIDIZATION）內切酶圖譜鑒定PCR鑒定,菌落（或噬菌斑）原位雜交,將轉化細胞培養(yǎng)在瓊脂平板上，當形成菌落或噬菌斑后，再將硝酸纖維濾膜貼在平板上，使菌落或噬菌斑轉印到硝酸纖維濾膜上。翻轉此濾膜并置于另一不含菌的平板上培養(yǎng)，培養(yǎng)后的濾膜上可長出菌落或噬菌斑。取出濾膜，用裂解液處理使菌體裂解，釋放出DNA。再用堿處理，使DNA變性，經(jīng)烘烤將變性DNA固定于濾膜上。然后用放射性同位素標記的核酸探針進行分子雜交，并經(jīng)放射自顯影，黑點代表雜交上的菌落，即可篩選到陽性克隆。,內切酶圖譜鑒定,將初步篩選的陽性克隆小量培養(yǎng)后，提取重組質粒或重組噬菌體DNA，用12種內切酶酶切，然后進行凝膠電泳，檢測插入DNA片段大小。,雙酶切鑒定重組質粒,,,DNA序列測定,最后為了確證目的基因序列的正確性，必須對重組體的DNA進行序列測定,,表達產(chǎn)物氨基酸序列測定,一般分析N末端（15個殘基序列）和C末端（一般5個）氨基酸鑒別蛋白質的性質和同質性；,第六節(jié)外源基因在細菌中的表達,基因工程的主要目的是使外源基因能在細菌、酵母或動、植物細胞中得到高效表達，以便獲得大量有益的基因表達產(chǎn)物或改變微生物或動、植物的遺傳性狀。所謂表達載體（EXPRESSIONVECTOR）是指宿主細胞基因表達所需調節(jié)控制序列，能使克隆的基因在宿主細胞內轉錄和翻譯的載體。,1啟動子（PROMOTER）,啟動子是指RNA聚合酶結合于DNA并起始合成RNA的一段DNA控制序列。原核基因啟動子位于轉錄起點（TRANSCRIPTIONINITIATION）上游（左側），它由兩段彼此分開且又高度保守的核心序列組成。,一外源基因轉錄,原核表達系統(tǒng)中常用啟動子,①LAC啟動子，是乳糖操縱子的啟動子，受LACI編碼的阻遏蛋白調節(jié)控制；②TRP啟動子，是色氨酸操縱子啟動子，受TRPR編碼的阻遏蛋白調控；③TAC啟動子，由LAC啟動子的10區(qū)和TRP啟動子35區(qū)融合而成，匯合了LAC和TRP兩者優(yōu)點，是一個很強的啟動子，同樣受LACI阻遏蛋白調控。④PL、R啟動子，是Λ噬菌體左、右向啟動子，其溫度敏感的阻遏蛋白受溫度調控；⑤T7噬菌體啟動子，比大腸桿菌啟動子強得多且十分專一，只被T7RNA聚合酶所識別。,2轉錄的調節(jié)和控制,通常表達載體不應使外源基因始終處于轉錄和翻譯之中。這是由于某些有價值的外源蛋白可能對宿主細胞是有毒的，外源蛋白的過量表達必將影響細胞生長；,宿主細胞的生長和外源基因的表達應該分成兩個階段進行。第一階段使含有外源基因的宿主細胞迅速生長直至獲得足夠量的細胞。第二階段是啟動開關，使所有細胞外源基因同時高效表達，產(chǎn)生大量有價值的表達產(chǎn)物。外源基因表達常采用化學物質誘導與溫度誘導兩種不同方法。,化學物質誘導,當用LAC啟動子構建表達載體時，LAC啟動子受CAP蛋白和CAMP的正調控。受阻遏蛋白的負調控；當宿主細胞生長時，LACI基因產(chǎn)生的阻遏蛋白與LAC操縱基因結合，阻礙外源基因的轉錄和表達，此時細胞大量生長和繁殖。加入誘導物IPTG后，由于誘導物與阻遏蛋白結合，使其不能與操縱基因結合。于是，外源基因被誘導而高效轉錄和表達。,溫度誘導,當用ΛPL、R啟動子構建表達載體時，PL、R啟動子受Λ噬菌體CI基因的負調控，CI基因產(chǎn)生的阻遏蛋白結合在操縱基因上，阻止轉錄的進行。目前利用CI的溫度敏感突變基因（CI857TS）調節(jié)這種阻遏。當在2830℃培養(yǎng)時，該突變體產(chǎn)生有活性阻遏蛋白，阻遏PL、R轉錄，細菌大量生長。在獲得足夠量菌體后，使溫度上升至42℃，造成阻遏蛋白失活，PL、R解除阻遏，啟動外源基因的高效轉錄和表達，從而合成大量有價值的外源蛋白。,轉錄終止子,轉錄終止子指一段位于基因或操縱子的３末端，具有終止轉錄功能的特定DNA序列。高效表達載體應該含有終止子，因為合成的MRNA過長，不僅消耗細胞內的底物和能量，且易使MRNA形成妨礙翻譯的二級結構。,三外源基因表達產(chǎn)物,為了在原核細胞中表達非融合蛋白，可將帶有起始密碼子ATG的真核基因插入到合適的原核啟動子和SD序列下游。經(jīng)轉錄和翻譯，就可在原核細胞中，表達出非融合蛋白。,1非融合蛋白的表達,2融合蛋白的表達,所謂融合蛋白是指蛋白質的N端由宿主基因（通常只是N端的部分序列）編碼，C端由外源基因編碼的蛋白質，換言之，融合蛋白是由一條短的原核多肽和真核蛋白結合在一起的雜合蛋白。,3外源蛋白的分泌表達,分泌型表達載體除具有一般表達載體的基本結構外，還需要具有編碼信號肽的序列。通常信號肽與外源蛋白的N端連接，由于信號肽含有帶正電荷的氨基酸和疏水氨酸，故能攜帶表達蛋白越膜分泌到周質或胞外，然后質膜上的信號肽酶將信號肽切除。,4包涵體（INCLUSIONBODY）,當外源蛋白在大腸桿菌高水平表達時，常常在細胞質內聚集而形成包涵體。利用大腸桿菌生產(chǎn)的非融合蛋白多數(shù)情況下以包涵體形式存在。形成包涵體有利于外源蛋白的高水平表達和防止蛋白酶對其的降解，也可避免外源蛋白對宿主細胞的毒害。此外也有利于表達產(chǎn)物的分離。但包涵體形式的表達蛋白不具生物學活性，需要體外復性。,第七節(jié)基因工程的應用,基因工程藥物轉基因植物轉基因動物基因治療在微生物研究中應用,基因工程藥品胰島素,胰島素是治療糖尿病的特效藥。一般臨床上使用的胰島素主要從豬、牛等家畜的胰腺中提取，每100KG胰腺只能提取4～5G胰島素。用該方法生產(chǎn)的胰島素產(chǎn)量低，價格昂貴，遠不能滿足社會需要。1979年，科學家將動物體內的胰島素基因與大腸桿菌DNA分子重組，并在大腸桿菌內實現(xiàn)了表達。1982年，美國一家基因公司用基因工程方法生產(chǎn)的胰島素投入市場，售價降低了30～50。,干擾素是病毒侵入細胞后產(chǎn)生的一種糖蛋白。干擾素幾乎能抵抗所有病毒引起的感染，是一種抗病毒的特效藥。此外干擾素對治療某些癌癥和白血病也有一定療效。傳統(tǒng)的干擾素生產(chǎn)方法是從人血液中的白細胞內提取，每300L血液只能提取出1MG干擾素。1980～1982年，科學家用基因工程方法在大腸桿菌及酵母菌細胞內獲得了干擾素，是傳統(tǒng)的生產(chǎn)量的12萬倍。1987年上述干擾素大量投放市場。,基因工程藥品干擾素,基因工程藥品生長激素,治療侏儒癥的唯一方法，是向人體注射生長激素。而生長激素的獲得很困難。以前，要獲得生長激素，需解剖尸體，從大腦的底部摘取垂體，并從中提取生長激素。現(xiàn)可利用基因工程方法，將人的生長激素基因導入大腸桿菌中，使其生產(chǎn)生長激素。人們從450L大腸桿菌培養(yǎng)液中提取的生長激素，相當于6萬具尸體的全部產(chǎn)量。,基因工程藥物的生產(chǎn)過程,1、目的基因的提取分離或合成外源基因。2、體外重組外源基因與載體體外連接，構建重組DNA分子；3、轉化重組DNA分子導入細胞。4、篩選與鑒定；5、基因表達控制適當條件，外源DNA表達。6、表達產(chǎn)物的純化,轉基因動物,轉基因動物指把人或哺乳動物的某種基因導入到哺乳動物如鼠、兔、羊和豬的受精卵里，目的基因若與受精卵染色體DNA整合，細胞分裂時，該基因隨染色體的倍增而倍增，使每個細胞中都帶有目的基因，使性狀得以表達，并穩(wěn)定地遺傳給后代，從而獲得基因產(chǎn)品。這樣一種新的個體，稱為。,轉基因植物,1983年世界首例轉基因植物培育成功，標志著人類用轉基因技術改良農(nóng)作物的開始。1986年轉基因農(nóng)作物獲得批準進入田間試驗1994年美國CALGENE公司培育的延熟保鮮的轉基因番茄被批準商品化生產(chǎn)，2000年全世界轉基因農(nóng)作物的種

簡介：DF生物醫(yī)學工程進展生物醫(yī)學工程進展試題庫試題庫1試述組織光透明技術在生物醫(yī)學成像的作用及應用前景試述組織光透明技術在生物醫(yī)學成像的作用及應用前景作用生物組織屬于渾濁介質，具有高散射和低吸收的光學特性，這種高散射特性限制光在組織的穿透深度和成像的對比度，使得很多光學成像技術只能用于淺表組織，制約了光學手段檢測診斷及治療技術的發(fā)展和應用。生物組織光透明技術的作用就是通過向生物組織中引入高滲透、高折射、生物相容的化學試劑，來改變組織的光學特性，以此來暫時降低光在組織中的散射、提高光在組織中的穿透深度，從而提高光學成像的成像深度，推動成像技術的發(fā)展和新方法的產(chǎn)生。前景1、應用骨組織使得骨組織變得光透明，進而對骨組織下的組織成像，避免手術開骨窗照成的傷害，如應用于顱骨，用得當?shù)某上穹椒ǐ@得皮層神經(jīng)亞細胞結構與微血管信息；2、解決皮膚角質層的天然阻擋作用，促進透皮給藥系統(tǒng)的研究和應用；3、皮膚光透明劑的發(fā)展推動光學相干斷層成像技術的發(fā)展；4、光透明劑使得光輻射能在生物組織達到一定深度之后，可以極大地推動光學顯微成像、光學手段檢測診斷及治療技術的發(fā)展和應用。推進無損光學成像技術在臨床上的發(fā)展。2請結合圖示，描述如何通過單分子定位的方法，實現(xiàn)超分辨光學顯微成像。請結合圖示，描述如何通過單分子定位的方法，實現(xiàn)超分辨光學顯微成像。要通過單分子定位實現(xiàn)超分辨光學顯微成像，首先需要利用光激活光切換的熒光探針標記感興趣的研究結構。成像過程中，利用激光對高標記密度的分子進行隨機稀疏點亮，進而進行單分子熒光成像和漂白；不斷重復這種分子被漂白、新的稀疏單分子不斷被點亮、熒光成像的過程，將原本空間上密集的熒光分子在時間上進行充分的分離。隨后，利用單分子定位算法對采集到的單分子熒光圖像進行定位，可以準確得到分子發(fā)光中心位置；最后，利用這些分子位置信息，結合圖像重建算法，獲得最終的超分辨圖像。超分辨圖像質量的關鍵在于二點一是找到有效的方法控制發(fā)光分子的密度，使同一時間內只有稀疏的熒光分子能夠發(fā)光；二是高精度地確定每個熒光分子的位置。以分辨兩個相距20NM的點光源為例。如下圖7當兩個點光源相距20NM時，由于衍射極限（一個理想點物經(jīng)光學系統(tǒng)成像，由于衍射的限制，不可能得到理想像點，而是得到一個艾里斑，這樣每個物點的像就是一個彌散斑，兩個彌散斑靠近后就不好區(qū)分，這樣就限制了系統(tǒng)的分辨率，這個斑越大，分辨率越低）的限制，使得每一個點光源經(jīng)過顯微系統(tǒng)所成的像為一個光斑。為了簡化起見，假定光斑為一個半徑300NM的圓斑（實際情況下，光斑不是均勻分布的，而是滿足方程1）。則在熒光顯微鏡下，兩個點光源所成的像為圖7（A）所示。在這個時候，兩個點光源R1，R2由于半徑都在300NM，是無法區(qū)分的，不同患者定制專屬治療等。44光學分子成像的特點是什么可用于活體小動物光學成像的技術主要有哪幾光學分子成像的特點是什么可用于活體小動物光學成像的技術主要有哪幾種主流的分子成像技術有哪些結合自己的研究方向，描述分子成像在本領種主流的分子成像技術有哪些結合自己的研究方向，描述分子成像在本領域的應用及其發(fā)展前景。域的應用及其發(fā)展前景。光學成像具有分辨率高、靈敏度高、價格低等優(yōu)點特別是近紅外線NEARINFRAREDNIR熒光成像分辨率12MM可以穿透厚8CM的組織熒光成像信號強可直接發(fā)出明亮的信號。此外光學對比劑發(fā)展迅速特別是隨著納米技術的深入基于納米顆粒、納米殼和量子點研發(fā)出各種生物特異的分子探針。這些都使得光學分子影像學在生物學、醫(yī)學和藥學領域中有廣泛的應用?；铙w小動物體內光學成像主要采用生物發(fā)光與熒光兩種技術。生物發(fā)光是用熒光素酶LUCIFERASE基因標記細胞或DNA，而熒光技術則采用熒光報告基團GFP、RFP、CYT及DYES等進行標記。利用靈敏的光學檢測儀器，可以直接檢測活體生物體內的細胞活動和基因行為。分子影像技術主要有磁共振成像MAGICRESONANCEIMAGINGMRI、核醫(yī)學成像和光學成像三種成像方法。近年來光學分子影像學被用來研究在體情況下胚胎發(fā)育過程中的細胞和分子變化通過揭示這些變化可以直觀地看到胚胎在經(jīng)歷細胞遷移和細胞分化過程中的細胞分子層面的變化。一些自發(fā)熒光蛋白已經(jīng)被用作報告基因來跟蹤發(fā)育過程中的表達類型。一個熒光蛋白家族可以被激發(fā)發(fā)射出各種不同波長的光從而可以實現(xiàn)多標記。另外熒光染料和量子點等也被用來在這些研究中提供對比。轉基因檢測可利用分子成像技術開發(fā)合適的新探針對轉基因動物體內的轉基因表達或內源性基因的活性和功能進行檢測可以對啟動子或增強子的組織特異性及可誘導性進行評價55請論述納米光學探針在活體動物成像中的應用請論述納米光學探針在活體動物成像中的應用納米光學探針中的如隨著小動物成像技術的發(fā)展，成像探針種類越來越多，功能越來越強大。其中的量子點熒光標記是納米技術和體內熒光成像技術結合的一種新技術，將直徑只有15納米的熒光粒子附著到DNA的特殊部分，隨后分析熒光信號的強度以及其它特性。這些粒子稱為量子點，具有獨特的光電性質，使其比生物醫(yī)學研究中常用的傳統(tǒng)熒光標簽更易檢測到。NIST的研究小組證明量子點釋放的信號強度比另外兩種傳統(tǒng)熒光標簽強2到11倍，暴露于光下時穩(wěn)定性也更好。除了能夠對活細胞進行長時間動態(tài)熒光觀測與成像，對細胞間、細胞內及其細胞器間的各種相互作用的原位實時動態(tài)示蹤外，還可以標記在其他需要研究的物質上，在長時間生命活動監(jiān)測及活體示蹤上有獨到的應用優(yōu)勢。與傳統(tǒng)的熒光標記方法比較，該方法在穩(wěn)定性、靈敏度、應用范圍等方面都有重要突破。66請舉例論述熒光蛋白標記技術在神經(jīng)科學中應用的原理。請舉例論述熒光蛋白標記技術在神經(jīng)科學中應用的原理。熒光蛋白的出現(xiàn)使得進行非侵入性的活體細胞成像成為了可能。使用這種熒光蛋白標志物，我們可以研究目的基因的表達情況，蛋白質運輸情況以及各種細胞內動態(tài)的生物化學信號通路。使用經(jīng)過遺傳修飾的小分子有機熒光標志物構建的混合系統(tǒng)，我們還可以對蛋白質

簡介：2017年生物防火林帶撫育維護工程公開招標文件項目編號FEGDCT17513采購人佛山市云勇生態(tài)林養(yǎng)護中心采購人佛山市云勇生態(tài)林養(yǎng)護中心采購代理機構采購代理機構廣東遠東招標代理有限公司廣東遠東招標代理有限公司發(fā)布日期二發(fā)布日期二0一七年一七年月FEGDCT175132017年生物防火林帶撫育維護工程2第一部分第一部分投標邀請函投標邀請函本項目前期工作已完成，經(jīng)政府采購管理部門同意，具備項目招標條件?，F(xiàn)廣東遠東招標代理有限公司受委托，就下列項目內容采用公開招標公開招標的方式進行采購，歡迎符合資格的投標人參加投標，有關事項及流程安排如下項目名稱2017年生物防火林帶撫育維護工程項目編號FEGDCT175132項目內容本項目是2017年生物防火林帶撫育維護工程，具體內容和要求詳見本招標文件。3項目性質政府采購4資金來源財政資金，資金已落實5投標人資格要求1投標人須具有獨立承擔民事責任能力的在中華人民共和國境內注冊的法人，并具有從事本項目的經(jīng)營范圍和能力；2符合中華人民共和國政府采購法第二十二條的規(guī)定；3投標人具有造林施工資質丙級丙級或以上資質；4投標人或投標聯(lián)合體成員不得被列入失信被執(zhí)行人、重大稅收違法案件當事人名單及政府采購嚴重違法失信行為記錄名單。投標人需提供通過“信用中國”網(wǎng)站（WWWCREDITCHINA）、中國政府采購網(wǎng)（WWWCCGP）等渠道查詢的信用信息查詢記錄網(wǎng)絡截圖件并加蓋投標人公章5本項目不允許聯(lián)合體投標。6資格審查方式本項目采用資格后審資格后審方式進行審查。7招標文件公示2017年7月12日至2017年7月19日下午530截止，投標人可到指定媒體自行瀏覽。

簡介：1環(huán)境工程微生物學環(huán)境工程微生物學課程綜合復習資料課程綜合復習資料一、填空題一、填空題1、我國王大耜提出的六界分類系統(tǒng)為、、、、、。2、病毒的分類依據(jù)有多種按照核酸分類，病毒可分為、。3、細菌的原生質體包括，和三大部分。4、根據(jù)古菌的生活習性和生理特性，古菌可分為、、三大類型。5、在伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊中，將古菌分為五大類群、、、、。6、放線菌的革蘭氏染色反應除為外，其余均為。7、在廢水生物處理中起重要作用的三種原生動物包括，和。作為指示生物，指示處理效果差的是和。8、真菌中的、和在有機廢水和有機固體廢物的生物處理中都起著積極作用。9、從化學組成來看，酶可分為和兩類。10、、、、四種元素是所有生物體的有機元素。11、微生物最好的碳源是，尤其是、，它們最易被微生物吸收和利用。12、環(huán)境工程微生物學中根據(jù)形態(tài)特點，細菌可分為四種形態(tài)即、、、。13、按培養(yǎng)基組成物的性質不同，可把培養(yǎng)基分為、、。14、好氧活性污泥的組成中，微生物成分主要是。15、菌種復壯方法有、、三種。16、污水生物處理方法很多，根據(jù)微生物與氧的關系分為和兩類。17、原生動物可劃分為四個綱，即、、和。18、在污廢水生物處理中，原生動物和微型后生動物的作用體現(xiàn)在、和。19、現(xiàn)在普遍接受的五界分類系統(tǒng)為、、、、。3二、名詞解釋二、名詞解釋1、病毒2、原核微生物3、氣生菌絲4、莢膜5、包囊6、光能自養(yǎng)微生物7、毒性噬菌體8、真核微生物9、細菌原生質體10、黏液層11、溫和噬菌體12、微生物13、細菌細胞質14、菌膠團15、細菌鞭毛16、化能異養(yǎng)微生物17、噬菌斑18、菌落19、光能異養(yǎng)微生物20、二名法21、細菌細胞質膜22、衣鞘23、芽孢24、化能自養(yǎng)微生物三、簡答題三、簡答題1、在PH為6、PH為7、PH為75的溶液中細菌各帶有什么電荷在PH為15溶液中細菌代有什么電荷為什么2、什么是細胞壁細胞壁有何生理功能3、原生動物中各綱在污水生物處理中如何起指示作用

簡介：環(huán)境工程微生物學試卷一、填空每小題1分共10分1藍藻的營養(yǎng)類型為光能自養(yǎng)型。2大腸桿菌長為20ΜM寬為05ΜM其大小表示為05UM02UM。3水處理中活性污泥中的細菌采用對數(shù)生長時期的細胞。4革蘭氏陽性菌細胞壁的主要成份為肽聚糖磷壁酸。5侵染寄主細胞后暫不引起細胞裂解的噬菌體稱溫和噬菌體。6微生物細胞的主要組成元素是CHONPS。7大腸桿菌個數(shù)可作為水的衛(wèi)生細菌學檢驗指標。8用物理或化學方法殺死物品上大部分微生物的過程稱消毒。9加大接種量可控制少量污染菌的繁殖是利用微生物間的拮抗關系。10在放線菌發(fā)育過程中吸收水分和營養(yǎng)的器官為營養(yǎng)菌絲。二、單項選擇在每小題的四個備選答案中選出一個正確的答案并將其碼寫在題后的○內每小題2分共40分。1組成病毒粒子核髓的化學物質是○C①糖類②蛋白質③核酸④脂肪2常用于飲水消毒的消毒劑是○D①石灰②CUSO41③KMNO4④漂白粉3以高糖培養(yǎng)酵母菌其培養(yǎng)基類型為○A①加富培養(yǎng)基②選擇培養(yǎng)基③鑒別培養(yǎng)基④普通培養(yǎng)基4酵母菌常用于釀酒工業(yè)中其主要產(chǎn)物為○B(yǎng)①乳酸②乙醇③丁酸④乙酸5屬于細菌細胞基本結構的為○B(yǎng)①莢膜②細胞壁③芽胞④鞭毛6酵母菌常用于釀酒工業(yè)中其主要產(chǎn)物為○B(yǎng)①乙酸②乙醇③乳酸④丙醇7土壤中三大類群微生物以數(shù)量多少排序為○C①細菌＞放線菌＞真菌②細菌＞真菌＞放線菌③放線菌＞真菌＞細菌④真菌＞細菌＞放線菌8噬菌體屬于病毒類別中的○A①微生物病毒②昆蟲病毒③植物病毒④動物病毒9常用消毒酒精的濃度的○B(yǎng)①30②70③95④100制備培養(yǎng)基的最常用的凝固劑為○C①硅膠②明膠③瓊脂④纖維素11沼氣發(fā)酵的主要產(chǎn)物為○B(yǎng)①COCO2②CHCH4③NHNH3④H2S1212酵母菌屬于酵母菌屬于○微生物微生物CC①好氧型好氧型②厭氧型厭氧型③兼性厭氧型兼性厭氧型④微厭氧型微厭氧型1313果汁、牛奶常用的滅菌方法為果汁、牛奶常用的滅菌方法為○A○A3一、一、名詞解釋（每組若有兩個或以上的名詞，可任選其一作答即可。名詞解釋（每組若有兩個或以上的名詞，可任選其一作答即可。3分1030分）分）1、雙名法2、轉化、轉導、雜交3、消毒、滅菌、防腐4、主動運輸、促進擴散5、共生、寄生6、噬菌斑、PFU7、芽胞、莢膜8、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基9、毒性噬菌體、溫和噬菌體10、生態(tài)系統(tǒng)、生物圈、生態(tài)平衡二、二、填空題（填空題（05分2010分）分）1、微生物生長所需的五大要素、、、、。2、污化系統(tǒng)分為四帶、、、。3、飲用水細菌總數(shù)不超過＿＿個，大腸桿菌數(shù)不超過＿＿個。4、根據(jù)微生物對碳源和能源需要的不同，微生物分為、、、。5、評價水體富營養(yǎng)化的方法有、、、、。三、三、判斷題（判斷題（2分51010分，若判斷為誤，請說明理由或予以改正）分，若判斷為誤，請說明理由或予以改正）1、硝酸菌能將氨氮氧化成亞硝酸鹽。（）2、凡由產(chǎn)芽孢細菌形成的菌落，其表面往往光滑而粘稠。（）3、放線菌是一類呈菌絲狀生長、主要以孢子繁殖的真核微生物。（）4、溫度是影響微生物生長的重要因素，在最適生長溫度條件下，微生物的代時最短，產(chǎn)生的有用代謝產(chǎn)物也最多。（）5、底物水平磷酸化是EMP途徑中產(chǎn)生ATP的唯一途徑。（）四、簡答題四、簡答題6分530分1、革蘭氏染色的原理、步驟及注意事項。2、脫氮運行管理中要掌握哪幾個關鍵才能獲得高的脫氮效果3、好氧堆肥法有幾種工藝簡述各個工藝過程。4、敘述污（廢）水處理中微生物絮凝劑的作用原理。5、何謂人工濕地敘述它處理污（廢）水的原理。五、問答題五、問答題1010分2220分1、細菌生長曲線是什么，分哪幾個階段，有何特征，在廢水處理中的應用如何2、原生動物中各綱在水體自凈和污水生物處理中如何起指示作用附加題有一個工廠的廢氣含甲苯，另一個工廠的廢氣含附加題有一個工廠的廢氣含甲苯，另一個工廠的廢氣含CO2和NH3，你如何處理這兩個廠的廢氣試，你如何處理這兩個廠的廢氣試設計一個工藝流程。設計一個工藝流程。（注此題是根據(jù)本次考試總體情況確定加分題目，最高分值（注此題是根據(jù)本次考試總體情況確定加分題目，最高分值10環(huán)境工程微生物學環(huán)境工程微生物學期末考試試卷（期末考試試卷（A卷）卷）（20022003年度上學期）年度上學期）一、選擇題（單選或多選，一、選擇題（單選或多選，20240）1、對微生物的概念，以下最正確、最完整的敘述是、對微生物的概念，以下最正確、最完整的敘述是A。A、微生物是一類個體微小、結構簡單，必須借助顯微鏡才能觀察清楚的生物。B、微生物是一類結構簡單，具有單細胞結構，必須借助顯微鏡才能觀察清楚其結構