活性炭對(duì)比格犬胃腸道內(nèi)百草枯的吸附作用研究.pdf

1、目的：
　　百草枯（Paraquat，PQ）中毒已經(jīng)成為我國(guó)最常見(jiàn)的農(nóng)藥中毒之一，口服PQ中毒死亡率高達(dá)70％。國(guó)內(nèi)外對(duì)PQ中毒尚無(wú)特效解毒藥，目前臨床上多采用綜合救治措施，其中體內(nèi)毒物清除措施是重要的治療方法，主要包括洗胃、導(dǎo)泄、利尿、血液灌流等措施。由于經(jīng)口攝入的毒物迅速進(jìn)入腸道內(nèi)，故僅通過(guò)洗胃的方法清除消化道內(nèi)毒物有一定的局限性?；钚蕴孔鳛橐环N用途極廣的吸附劑，推薦用于急性經(jīng)口中毒的臨床救治，但常規(guī)使用活性炭灌胃進(jìn)行胃腸道內(nèi)

2、吸附的療法尚未被普遍接受，特別是對(duì)PQ的清除，更是缺乏有力的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。為探尋能夠在早期快速持續(xù)清除胃腸道內(nèi)毒物的有效方法，擬開(kāi)展使用活性炭灌胃吸附治療的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，意在探討活性炭對(duì)胃腸道內(nèi)PQ的吸附效果，為口服PQ中毒患者的臨床救治提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。
　　方法：
　　（1）建立比格犬血漿PQ濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線采用血漿PQ表面增強(qiáng)拉曼光譜檢測(cè)方法，儀器：i-Raman型便攜式拉曼光譜儀；光譜儀條件：激光波長(zhǎng)785 nm，分

3、辨率4.5 cm-1，激光功率為60 mW，金納米粒子的粒徑為50 nm。本方法檢測(cè)單個(gè)樣品信號(hào)采集時(shí)間為10s，樣品前處理時(shí)間在1min以內(nèi)。用PQ儲(chǔ)備液分別配制1 ug/L、5 ug/L、10 ug/L、50 ug/L、100 ug/L、200 ug/L濃度的PQ工作溶液，用PQ表面增強(qiáng)拉曼檢測(cè)法測(cè)得各已知濃度PQ的拉曼光譜峰，分別計(jì)算出高峰值與低峰值的差值（即PQ拉曼強(qiáng)度，Raman Intensity），根據(jù)各濃度與對(duì)應(yīng)的拉曼強(qiáng)

4、度繪制出PQ標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線以血漿PQ濃度為橫坐標(biāo)，以PQ拉曼強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，PQ濃度在1 ug/L-200 ug/L范圍內(nèi)線性良好，定量下限為1 ug/L，定量上限為200 ug/L。運(yùn)用加權(quán)最小二乘法做回歸分析，得到的直線回歸方程作為標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。
　?。?）建立比格犬肝門(mén)靜脈采血通路為了直接觀察活性炭胃腸道吸附PQ后的效果，采取檢測(cè)肝門(mén)靜脈和外周靜脈血液毒物濃度對(duì)照分析方法。比格犬術(shù)前禁食8h，禁水2h，給予丙泊酚1.0ml

5、/kg靜脈推注進(jìn)行麻醉誘導(dǎo)后連接動(dòng)物用呼吸麻醉機(jī)，給予1.5%-3.0%異氟烷和氧氣混合吸入麻醉下，行比格犬肝門(mén)靜脈置管并體外留置手術(shù)，建立比格犬肝門(mén)靜脈采血通路。手術(shù)組所有比格犬麻醉效果良好，麻醉誘導(dǎo)和復(fù)蘇均較快，術(shù)中生命體征平穩(wěn)，手術(shù)結(jié)束后停止給藥約10min即可站立。平均手術(shù)時(shí)間約1h，平均出血量約15ml。術(shù)后恢復(fù)正常飲水，4h后恢復(fù)正常進(jìn)食，術(shù)后5-7d手術(shù)切口愈合。將導(dǎo)管經(jīng)皮下引至頸背部穿出并固定，有效防止比格犬將導(dǎo)管咬斷并

6、可保持導(dǎo)管外端清潔。術(shù)后每天用生理鹽水沖管一次，然后再用125 u/ml肝素鈉溶液封管可保證導(dǎo)管長(zhǎng)期維持通暢。手術(shù)后3d比格犬生命體征完全恢復(fù)到手術(shù)前的水平，即可進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。
　　（3）為了較好地觀察毒物清除效果，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)采用比格犬PQ消化道染毒模型。根據(jù)臨床PQ中毒患者中毒程度分型及存活率，考慮臨床救治重點(diǎn)主要是服毒量在20-40mg/kg的中到重度中毒患者，根據(jù)人與比格犬之間體表面積比值來(lái)計(jì)算比格犬的給藥劑量，并通過(guò)預(yù)實(shí)

7、驗(yàn)證實(shí)此給藥劑量使比格犬中毒后的表現(xiàn)和血漿PQ濃度與臨床中度中毒患者相似，最后確定比格犬經(jīng)口灌胃染毒PQ劑量為30mg/kg，建立經(jīng)胃管灌入PQ染毒比格犬模型。根據(jù)AACT(美國(guó)臨床毒理學(xué)學(xué)會(huì))和EAPCCT(歐洲毒物中心和臨床毒物學(xué)專家協(xié)會(huì))推薦的成人活性炭給藥量為25-100g(即約為0.5-2.0g/kg)，參照活性炭最好于經(jīng)口中毒1h內(nèi)的給藥指南，結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和通常中毒患者被送往醫(yī)院救治的時(shí)間，本研究確定比格犬染毒后30min

8、給予活性炭1.0g/kg，用100ml生理鹽水混勻后灌胃。
　?。?）動(dòng)物分組及處理將12只成功建立肝門(mén)靜脈采血通路的比格犬按隨機(jī)數(shù)字表法分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組6只。兩組比格犬均采用20%PQ溶液30mg/kg灌胃。實(shí)驗(yàn)組于PQ染毒后30min給予活性炭混懸液灌胃（Ⅰ型活性炭粉1.0g/kg用生理鹽水100mL混勻），對(duì)照組灌胃等量生理鹽水。兩組分別于染毒后10min、30min及1、2、4、8、12、24、48h采肝門(mén)靜脈血和

9、外周靜脈血，實(shí)驗(yàn)采集的全血樣品裝入含有肝素鈉抗凝劑的采血管中，離心（8000r/min，10min），分離血漿進(jìn)行PQ濃度檢測(cè)。觀察血漿PQ水平變化，采用DAS2.1.1藥代動(dòng)力學(xué)分析軟件分析兩組毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的變化。分別于染毒前10min，染毒后4h和1-7d動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)心率（HR）、呼吸頻率（RR）、脈搏血氧飽和度（SpO2）等生命體征的變化。
　　結(jié)果：
　　（1）活性炭灌胃對(duì)比格犬肝門(mén)靜脈和外周靜脈血漿PQ水平的影響：對(duì)

10、實(shí)驗(yàn)所得PQ濃度數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和毒代動(dòng)力學(xué)分析，結(jié)果顯示：PQ灌胃染毒后，對(duì)照組肝門(mén)靜脈血和外周靜脈血血漿PQ水平迅速升高，4 h達(dá)高峰后迅速降低，8 h后緩慢下降；但實(shí)驗(yàn)組達(dá)峰速率明顯減慢，且PQ峰值較對(duì)照組明顯降低，約為對(duì)照組的50%［ug/L：肝門(mén)靜脈血為123.50±11.67比255.18±12.29，外周靜脈血為122.35±11.72比250.86±11.15，均P＜0.01］，8 h后下降速度明顯快于對(duì)照組，48 h

11、血漿PQ水平仍明顯低于對(duì)照組［ug/L：肝門(mén)靜脈血為0.53±0.18比15.98±5.58，外周靜脈血為0.31±0.01比15.03±4.82，均P＜0.05］。毒代動(dòng)力學(xué)分析顯示，實(shí)驗(yàn)組肝門(mén)靜脈和外周靜脈血漿PQ藥時(shí)曲線下面積（AUC）和峰濃度（Cmax）均顯著低于對(duì)照組［AUC（mg·L-1·h-1）：肝門(mén)靜脈血為1.6±0.2比3.3±0.4，外周靜脈血為1.5±0.2比3.2±0.3；Cmax（ug/L）：肝門(mén)靜脈血為125

12、.07±9.49比255.18±12.29，外周靜脈血為123.38±9.52比250.86±11.15，均P＜0.05］，PQ血漿半衰期（t1/2）明顯短于對(duì)照組［h：肝門(mén)靜脈血為3.8±1.2比15.4±3.7，外周靜脈血為3.5±1.0比15.5±2.7，均P＜0.05］，PQ達(dá)峰時(shí)間（Tmax）明顯慢于對(duì)照組［h：肝門(mén)靜脈血為5.3±1.9比4.0±0.0，外周靜脈血為4.7±1.5比4.0±0.0，均P＜0.05］，PQ平均駐

13、留時(shí)間（MRT）明顯短于對(duì)照組［h：肝門(mén)靜脈血為8.0±1.5比13.4±1.2，外周靜脈血為7.6±1.3比13.3±1.2，均P＜0.05］。
　　（2）活性炭灌胃對(duì)中毒比格犬生命體征的影響：于染毒前10min及染毒后4h和1-7d動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)心率（HR）、呼吸頻率（RR）、脈搏血氧飽和度（SpO2）等生命體征的變化。對(duì)兩組比格犬的生命體征數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)測(cè)量資料的方差分析，結(jié)果顯示：PQ染毒后兩組比格犬HR和RR均呈逐漸加快趨勢(shì)，4

14、d左右達(dá)峰值后逐漸減慢；SpO2呈逐漸降低趨勢(shì)，4d左右達(dá)谷值后逐漸恢復(fù)，但實(shí)驗(yàn)組各項(xiàng)生命體征變化幅度較小，各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于對(duì)照組［5d HR（次/min）：130.50±4.57比143.83±2.67，5d RR（次/min）：30.50±0.50比33.83±0.69，5d SpO2：0.912±0.007比0.880±0.008，均P＜0.01］。
　　結(jié)論：
　　1、早期消化道內(nèi)使用活性炭可減緩血漿PQ水平升高速率，