血液灌流對(duì)百草枯在比格犬體內(nèi)清除作用的初步研究.pdf

1、目的：百草枯（PQ）是一類國內(nèi)常見的毒性很強(qiáng)的有機(jī)雜環(huán)類除草劑，其有效成分為1,1’-二甲基-4,4’-二聯(lián)吡啶，臨床上因誤服和自服導(dǎo)致急性百草枯中毒患者日益增加，中毒患者的臨床致死率高達(dá)85％-95%，且目前無特效解毒藥。血液凈化是臨床上針對(duì)急性百草枯中毒最為常用的治療手段，在諸多凈化方式中,血液灌流（HP）是應(yīng)用最為普遍的一種。由于PQ在人體內(nèi)代謝較快，在人體內(nèi)其分布主要位于肺、肝臟等組織器官中，血液中的分布極少，且PQ在體內(nèi)經(jīng)HP

2、治療后存在明顯的“再分布”現(xiàn)象，因此在針對(duì)急性PQ中毒患者的臨床治療中，HP的運(yùn)用時(shí)間及運(yùn)用次數(shù)等具體運(yùn)用方法存在諸多爭(zhēng)議，其確切療效在相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道中也不一致。因此，本研究通過以比格犬為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，進(jìn)行 PQ染毒后對(duì)其予以不同方案的 HP治療，觀察記錄并比較其血液中的毒物濃度，以探索對(duì)于急性PQ中毒患者在中毒初期行單次及二次HP治療的確切毒物清除效果及意義，為臨床救治提供一定的參考。
　　方法：成年雄性健康比格犬18只，平均體重（9

3、.31±1.07）kg。將18只比格犬隨機(jī)分為3組：A組（單次HP治療）、B組（兩次HP治療）及C組（對(duì)照組），每組6只。為避免經(jīng)胃腸道染毒造成的吸收差異影響，本實(shí)驗(yàn)選擇靜脈染毒。將百草枯標(biāo)準(zhǔn)品按照10mg/ml溶于生理鹽水中，配成相應(yīng)溶液。經(jīng)一系列預(yù)實(shí)驗(yàn)后確定了此濃度的染毒劑量可在保證達(dá)到重度中毒標(biāo)準(zhǔn)的同時(shí)實(shí)驗(yàn)犬又不會(huì)因中毒程度過重而致臨床癥狀過重或死亡。所有比格犬均按照每kg體重2mg的劑量予以百草枯標(biāo)準(zhǔn)品注射，以15%的胃腸道吸收

4、率及20%的常用農(nóng)藥濃度劑型計(jì)算，該劑量相當(dāng)于口服常用農(nóng)藥中毒劑量達(dá)到46mg/ml，達(dá)到重度中毒標(biāo)準(zhǔn)。使用一次性使用靜脈輸液針經(jīng)實(shí)驗(yàn)犬前肢外側(cè)靜脈注射PQ染毒。C組不予任何特殊處理，另兩組行股靜脈穿刺建立血管通路。為更加貼近臨床患者診治時(shí)間實(shí)際，A組在染毒后4h予以持續(xù)2h的HP治療；B組在染毒后4h及10h分別予以持續(xù)2h的HP治療，HP過程中予以肝素納沖管抗凝，體外循環(huán)速度均為40ml/min，HP結(jié)束后予以魚精蛋白對(duì)抗肝素，不予

5、任何其他臨床處理。采集、檢測(cè)各組比格犬在染毒后0.5h、1h、2h、4h、6h、10h、12h、24h及48h血液中的毒物濃度，其中A組和B組4h和6h是首次HP前后采集的血液；B組10h、12h血液樣本分別是第二次HP前后采集的血液。參照美國NKF-K/DOQ方法采集標(biāo)本，行HP前采取上機(jī)前外周靜脈血，HP下機(jī)后再采集標(biāo)本，避免因生理鹽水和肝素等對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生的影響，當(dāng)通過留置導(dǎo)管采集血液時(shí)，先抽取血液5ml，再采集標(biāo)本。采集的血液經(jīng)

6、3000r/min離心10min，取上清液置于-20℃冰箱中保存待測(cè)。采用百草枯表面增強(qiáng)拉曼光譜檢測(cè)方法進(jìn)行血漿毒物濃度的檢測(cè)。所用基底為粒徑50 nm的金納米粒子（AuNPs），激光功率為60mW，單個(gè)樣品信號(hào)采集時(shí)間10 s。配置標(biāo)準(zhǔn)曲線所需濃度的相應(yīng)百草枯純品樣本，計(jì)算繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)、計(jì)算并記錄各實(shí)驗(yàn)樣本的PQ濃度。統(tǒng)計(jì)分析采用SAS9.2軟件，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以?x±s表示，統(tǒng)計(jì)分析方法采用混合效應(yīng)模型,以P值<0.05為

7、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　（1）三組實(shí)驗(yàn)用犬在性別、體重上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，所有實(shí)驗(yàn)用犬均未死亡，48h內(nèi)亦未出現(xiàn)明顯的呼吸困難等臨床癥狀。
　?。?）各時(shí)間點(diǎn)毒物濃度測(cè)量值比較結(jié)果：運(yùn)用混合效應(yīng)模型的方法對(duì)染毒后各時(shí)間點(diǎn)各組測(cè)得毒物濃度做組間差異比較。行HP治療前各時(shí)間點(diǎn)，各組毒物濃度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，染毒后6h，A組及B組結(jié)束首次HP治療，毒物濃度明顯低于C組, A組和B組毒物濃度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；染毒后10h，各組濃

8、度恢復(fù)至相似水平；染毒后12h， B組結(jié)束第二次HP治療，毒物濃度明顯低于A組及C組，A組和C組毒物濃度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；染毒后24h，各組毒物濃度恢復(fù)至相似水平。
　?。?）各時(shí)間段毒物濃度下降程度比較結(jié)果：將染毒后4-6、10-12、2-6、2-12、2-24h測(cè)得毒物濃度做差值，觀察各組在不同時(shí)間段的毒物濃度下降情況，并對(duì)各組間做兩兩差異性比較。A組和B組在首次HP前后毒物濃度平均下降了53.07%和50.35%，遠(yuǎn)大于同時(shí)間段

9、 C組的13.40%，A、B兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；B組在第二次 HP治療前后，毒物濃度下降了67.39%，遠(yuǎn)大于同時(shí)間段A組和C組的3.38%和7.47%，A、C兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；染毒后2h至染毒后24h，各組的下降程度均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　?。?）各組毒代動(dòng)力學(xué)比較結(jié)果：各組數(shù)據(jù)經(jīng)藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析軟件winnonlin5.2.1版分析，得出各組比格犬百草枯毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。各組在峰濃度（Cmax）、表觀血漿半衰期（t1/2）、平均

10、駐留時(shí)間（MRT）及藥時(shí)曲線下面積（AUC）經(jīng)方差分析，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：經(jīng)靜脈染毒后，各組實(shí)驗(yàn)犬體內(nèi)毒物濃度基本在相同時(shí)間段達(dá)峰，且峰值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。經(jīng)HP后，實(shí)驗(yàn)犬血液中毒物濃度均有明顯下降，然后在較短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)濃度的反彈上升，并恢復(fù)至與對(duì)照組相似水平。通過三組比格犬在AUC、t1/2、MRT的比較可知，中毒初期的單次或二次HP并不能有效改變PQ在體內(nèi)的代謝。在行HP治療的時(shí)間上，更早時(shí)間的HP治療能更有效地降低藥時(shí)

11、曲線下面積，從而在減少血液中毒物方面達(dá)到更好的效果，而服毒較長(zhǎng)時(shí)間后的HP治療效果則極為有限；早期持續(xù)重復(fù)的HP治療或可更加及時(shí)地清除血液中的百草枯，使血液中毒物濃度維持在較低水平。從本研究中PQ在比格犬體內(nèi)的代謝趨勢(shì)上分析，中毒后12h內(nèi)的單次及二次HP治療在灌流后短時(shí)間內(nèi)可有效降低血液中的PQ濃度，而后迅速恢復(fù)至與未灌流組相似水平；說明血液中毒物劑量占進(jìn)入體內(nèi)毒物的比較較小，提示中毒初期單次或二次HP治療不能明顯改變體內(nèi)PQ的毒物代