Exendin-4對(duì)抗巨噬細(xì)胞炎癥作用改善體外胰島素抵抗.pdf

1、目的：
　　隨著社會(huì)的進(jìn)步和人類生活水平的提高，肥胖人群的比例越來越大，肥胖引起的相關(guān)疾病越來越普遍，引起社會(huì)相關(guān)的重視。經(jīng)研究表明，肥胖是發(fā)生T2DM和胰島素抵抗（IR）的重要危險(xiǎn)因素之一?；仡櫺哉{(diào)查發(fā)現(xiàn)，在長期肥胖的人群中，患T2DM比率明顯增加，可以高達(dá)普通人群的5倍及以上。從另一個(gè)方面看，在T2DM病人中，80％都是肥胖患者。而且發(fā)生肥胖的時(shí)間越長，患T2DM的機(jī)會(huì)就越大。肥胖者容易患有 T2DM，根本原因在于肥胖者體內(nèi)存

2、在一種特殊的病理狀態(tài)，叫做“胰島素抵抗”。胰島素，一種內(nèi)分泌激素，是人體內(nèi)最主要的降血糖物質(zhì)，人體在進(jìn)食后吸收大量的糖入血，通過血液循環(huán)運(yùn)往全身各處，血液中的葡萄糖需要依靠胰島素才能進(jìn)入細(xì)胞，從而被人體利用和儲(chǔ)存，從而使血液中的葡萄糖維持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的范圍內(nèi)。遺憾的是，在肥胖者的體內(nèi)，這個(gè)搬運(yùn)葡萄糖的過程出現(xiàn)了很多問題，從而導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)胰島素產(chǎn)生了“抵抗”，敏感性大幅度降低，血液中的葡萄糖很難進(jìn)入細(xì)胞。早期肥胖者的胰島素分泌還算正常，但

3、是由于IR的存在，胰島素的作用效率大大下降了，為了克服這種抵抗，胰腺就會(huì)大量的分泌胰島素，從而使肥胖者血液中的胰島素濃度大大增加，發(fā)生所謂的“高胰島素血癥”。肥胖患者早期還可以通過血液中的高胰島素來控制血糖的水平，但隨后因?yàn)檫^負(fù)荷的工作，胰腺合成胰島素的功能會(huì)逐漸衰竭，胰島素的生產(chǎn)漸漸不能維持血糖的正常范圍，于是出現(xiàn)了 T2DM。所以肥胖是很容易造成胰島素抵抗和糖尿病的。在過去十年里，越來越多的研究認(rèn)為肥胖和2型糖尿病都是慢性促炎癥性疾

4、病，認(rèn)為肥胖、2型糖尿病和慢性炎癥這三者之間關(guān)系密切，而巨噬細(xì)胞在整個(gè)病理發(fā)生發(fā)展過程中起到了至關(guān)重要的作用。巨噬細(xì)胞浸潤脂肪組織是脂肪組織炎癥發(fā)生的起始，而經(jīng)研究證實(shí)，T2DM常用藥物 GLP-1具有抗炎作用。通過熒光定位和靶向?qū)嶒?yàn)，人們發(fā)現(xiàn)在巨噬細(xì)胞上存在GLP-1相關(guān)受體，介導(dǎo)GLP-1發(fā)揮作用。
　　方法：
　　⑴通過轉(zhuǎn)染GLP-1R的siRNA，抑制小鼠巨噬細(xì)胞RAW264和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面的GLP-1R表達(dá)，

5、同時(shí)轉(zhuǎn)染錯(cuò)義序列組siRNA做陰性對(duì)照組，并通過qPCR和WB檢驗(yàn)轉(zhuǎn)染是否成功；⑵Transwell試驗(yàn)，是通過應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。在本次研究中，主要用Transwell試驗(yàn)測定巨噬細(xì)胞在LPS，exendin-4或兩者作用下的遷移；⑶用ELISA定性定量檢測巨噬細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中處理過夜，或含LPS無血清培養(yǎng)基有或無 exendin-4處理后，分泌TNF-

6、α, IL-6和 IL-1β的改變，用WB檢測處理后巨噬細(xì)胞中NF-κB相關(guān)蛋白的變化；⑷應(yīng)用3H的放射性檢測3T3-L1s脂肪細(xì)胞經(jīng)過無(對(duì)照組)或 CM, CM-LPS, or CM-LPS-Ex4處理后，胰島素刺激的葡萄糖攝取量。
　　結(jié)果：
　　①GLP-1R的siRNA能夠抑制巨噬細(xì)胞表面GLP-1R表達(dá)，從而使得GLP-1不能對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生作用；②Exendin-4通過GLP-1R發(fā)揮作用，通過影響巨噬細(xì)胞NF-

7、κB活化，抑制細(xì)胞炎癥反應(yīng)，減少LPS導(dǎo)致的巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的分泌；③Exendin-4可以抑制巨噬細(xì)胞的遷移；④Exendin-4通過抑制巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)增加胰島素依賴的葡萄糖攝取量；
　　結(jié)論：
　　GLP-1受體激動(dòng)劑(exendin-4)不僅可以減少巨噬細(xì)胞的遷移，減少炎性浸潤，還可以通過影響NF-κB通路的失活抑制巨噬細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子，如TNF-β、IL-6和IL-1β，從而改善巨噬細(xì)胞炎癥誘導(dǎo)的胰島素抵抗