Exendin-4對抵抗素誘導的胰島βTc6細胞損害及PDX-1表達的干預作用.pdf

1、目的：1、研究抵抗素干預前后，胰島β細胞PDX-1 mRNA表達以及相應的胰島素分泌功能、細胞形態(tài)和細胞增殖能力以及細胞凋亡情況的變化。
　　 2、應用Exendin-4干預抵抗素介導的胰島β細胞損害，觀察Exendin-4干預后上述研究指標的變化，探討Exendin-4對在相應的抵抗素干預狀態(tài)下胰島β細胞的保護作用，分析可能的分子生物學機制。
　　 方法：
　　 1、體外培養(yǎng)βTc6細胞，不同濃度抵抗素(20

2、ng/ml、40 ng/ml、60 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml)分別干預6、12、24小時，觀察細胞形態(tài)變化，CCK-8法檢測βTc6細胞的增殖能力， RT-PCR檢測PDX-1 mRNA表達的變化，放射免疫法檢測葡萄糖刺激的胰島素分泌，DNA Ladder法初步觀察細胞凋亡情況。
　　 2、應用不同濃度Exendin-4(5 nmol/L、10 nmol/L、50 nmol/L)預孵育β Tc6細胞不同

3、時限(6小時、12小時、24小時)，再予200 ng/ml濃度抵抗素干預24小時，觀察細胞形態(tài)，CCK-8法檢測βTc6細胞的增殖能力，RT-PCR檢測PDX-1mRNA表達的變化，放射免疫法檢測胰島素濃度，再予DNA Ladder法初步觀察細胞凋亡情況。
　　 結果：
　　 1、經(jīng)過60～200 ng/ml抵抗素干預6～24小時之后，細胞增殖活力降低，βTc6細胞形態(tài)學上呈現(xiàn)凋亡趨勢，葡萄糖刺激的胰島素分泌功能下降，而

4、20～40 ng/ml干預組的干預均未見此類現(xiàn)象。
　　 2、經(jīng)60～100 ng/ml抵抗素干預6小時，βTc6細胞PDX-1 mRNA的表達無明顯變化，但200 ng/ml抵抗素干預后PDX-1mRNA的表達已有下降。隨著干預時間進一步延長，100～200 ng/ml抵抗素干預組PDX-1 mRNA的表達逐漸減少。60ng/ml抵抗素干預24小時βTc6細胞PDX-1 mRNA的表達亦低于空白對照組。而20 ng/ml和40

5、 ng/ml抵抗素干預組βTc6細胞PDX-1 mRNA的表達無明顯變化。
　　 3、20～200 ng/ml抵抗素干預6小時后，β Tc6細胞的DNA ladder無顯示凋亡跡象。但隨著時間延長至12小時，200 ng/ml抵抗素干預組即出現(xiàn)凋亡，而干預時間進一步延長至24小時，100 ng/ml抵抗素干預組和200 ng/ml干預組同時出現(xiàn)了凋亡跡象。
　　 4、Exendin-4干預對抵抗素作用下βTc6細胞胰島素

6、分泌能力和增殖能力的影響：
　　 (1)5 nmol/L Exendin-46～12小時的預干預之后未見抵抗素作用下的βTc6細胞的胰島素分泌能力和增殖能力的改善。當Exendin-4的干預時間延長至24小時，β Tc6細胞的胰島素分泌能力和增殖能力均有所提高。
　　 (2)當Exendin-4的孵育濃度一定時(10～50 nmol/L)，Exendin-4在6小時、12小時、24小時均明顯改善β Tc6細胞的胰島素分泌

7、能力和增殖能力。
　　 (3)Exendin-4孵育濃度從10 nmol/L進一步提高至50 nmol/L，尚未檢測到β Tc6細胞的胰島素分泌能力和增殖能力的進一步改善。
　　 5、Exendin-4干預對抵抗素作用下βTc6細胞PDX-1mRNA表達的影響：
　　 (1)5 nmol/L～50 nmol/L Exendin-4預干預6小時尚不能上調抵抗素誘導的β Tc6細胞PDX-1 mRNA表達的下降。

8、r>　　 (2)將Exendin-4干預時間延長至12小時，在5 nmol/L和10 nmol/L Exendin-4作用下，βTc6細胞PDX-1 mRNA的表達逐漸升高，將Exendin-4濃度進一步升高至50 nmol/L則未見PDX-1 mRNA表達的進一步上調。
　　 (3)當Exendin-4預干預時間為24小時，在5 nmol/L～50 nmol/L Exendin-4作用下，抵抗素作用下的β Tc6細胞PDX-

9、1 mRNA的表達明顯升高，并且各濃度Exendin-4組間無顯著差異。
　　 6、Exendin-4干預對抵抗素作用下β Tc6細胞凋亡的保護作用：
　　 (1)5 nmol/L～50 nmol/L Exendin-4預干預6小時未見抗抵抗素誘導的β Tc6細胞凋亡明顯改善。
　　 (2)將Exendin-4干預時間延長至12小時，在5 nmol/L Exendin-4干預仍不能減少抵抗素誘導的βTc6細胞凋亡

10、，但10～50 nmol/L Exendin-4干預己可對抗抵抗素誘導的βTc6細胞凋亡。
　　 (3)當Exendin-4干預時間調整為24小時，在5 nmol/L～50 nmol/L Exendin-4作用下，抵抗素作用下的βTc6細胞凋亡改善明顯。
　　 結論：
　　 1、短時間低濃度的抵抗素作用對β細胞轉錄因子PDX-1 mRNA的表達無影響，亦對β細胞的增殖活性和胰島素分泌能力以及凋亡無顯著影響。