pdx-1對成肌細(xì)胞株c2c12分化為胰島素分泌細(xì)胞的作用

1、第 2 6 卷 第 4期 2 0 0 5 年 7月中山大學(xué)學(xué)報(bào)( 醫(yī)學(xué)科學(xué)版)J O U R N A LO FS U NY A T - S E NU N I V E R S I T Y ( M E D I C A LS C I E N C E S )V o 1 ． 2 6N o ． 4J u 1 ．2 0 o 5P D X ． 1 對成肌細(xì)胞株 C 2 C 1 2 分化為胰島素分泌細(xì)胞的作用 楊 川 ， 程 樺 ， 王 川 ， 嚴(yán) 勵

2、 ， 黎 鋒 ， 魏 菁 (中山大學(xué) 附屬第二 醫(yī)院 內(nèi)分 泌科 ， 廣東 廣州 5 1 0 1 2 0)摘 要 ： 【 目的】 探討 P D X 一 1 對成肌細(xì)胞株 C 2 C 1 2分化為胰島素分泌細(xì)胞的作用。 【 方法】 將 C 2 C 1 2 細(xì)胞分 別經(jīng)過不同濃度的類胰高血糖素( G L P ． 1 ) 誘導(dǎo) 1 2 0h 后 ， 瞬間轉(zhuǎn)染胰腺十二指腸 同源框( P D X ． 1 ) 基因， 用 R T ．P C R檢測

3、P D X ． 1 的表達(dá)， 流式細(xì)胞儀、 放射免疫法檢測細(xì)胞內(nèi)和培養(yǎng)基中是否存在胰島素。【 結(jié)果 】 G L P ． 1 可 以直接誘導(dǎo) C 2 C 1 2 細(xì)胞表達(dá) P D X 一 1 ： P D X 一 1 瞬時轉(zhuǎn)染 C 2 C 1 2 細(xì)胞后，胰 島素分泌細(xì)胞 陽性率 比值 ( 1 ． 1 9 +0 ． 1 0 ) 、 培養(yǎng)基中的胰島素含量 ( 2 ． 4 5 _ + 1 ． 4 8 ) x l 0／ m L均明顯升高 ( 尸0

4、 ． 0 5 ) ． 【 C o n c l u s i o n 】 G L P 一 1c o u l di n d u c et h eC 2 C 1 2e x p r e s s e dP D X - 1a ndP D X ． 1c o u l dm a k et h eC 2 C1 2c e l ss e c r e t ei n s u l i n ． S ot h eP DX- 1e x p r e s s i n gwa s

5、o n eo ft her e a s o n st ha tGL P 一 1i n d u c e sd i fe r en t i a t i o no fC 2 C1 2c e l si n t oi n s u l i n — s e c r e t i n gc e l s ．K e yw o r d s ： m y o b l a s t ； i n s u l i n - s e c r e t i n gc e l s

6、； g l u c a g o n — l i k ep ep t i d e 一 1 ( GL P - 1 ) ； p a n c r ea t i c — d u o d e n u mh o me o b o x - 1 ；P DX． 1[ JS U NY a t - s e nU n i v ( M e dS c i ) ， 2 0 0 5 ， 2 6 ( 4 ) ： 4 0 9 - 4 l 2 】轉(zhuǎn) 錄 因子胰 腺十二 指腸

7、同源框 1 ( p a n c r e a t i c —d u o d e n u mh o m e o b o x 一 1 ， P D X 一 1 ) 是胰腺發(fā)育 、 分化及 體內(nèi)葡萄糖代謝穩(wěn)定 的關(guān)鍵 因子之-D ] 。 鼠及人 的 P D X 一 1 ( 一 ／ 一 ) 純合子一般都 由于胰腺發(fā)育障礙而早 亡 ， 在 P D X 一 1 缺乏的雜合子中， 多在成年時由于胰 島素基 因表達(dá)異常而出現(xiàn)葡萄糖耐量異常[ 2 1 。 現(xiàn)

8、在 一 般認(rèn)為 P D X 一 1 的變異是成人發(fā)病型青幼年糖 尿 病 4 ( m a t u r i t yo n s e td i a b e t e sm e l l i t u si ny o u n g4 ．M O D Y 4 ) ~ 2 J 糖尿病 主要 的發(fā)病原 因[ 3 1 ， 因此 ， P D X 一 1對于胚胎干細(xì)胞 或成體 干細(xì)胞分 化為胰 島素 分泌 收稿 日期 ： 2 0 0 4 ． 0 2 ． 1 1基金項(xiàng)目

9、： 教育部博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目( 2 0 0 2 0 5 5 8 0 7 7 ) ； 中國博士后基金資助項(xiàng) 目作者簡介： 楊 J 1 1 ( 1 9 6 8 一 ) ， 男 ． 廣東惠陽人， 博士． 副教授． E - m a i l ： b e a v 3 1 5 1 @ s o h u ． C O m維普資訊 http://www.cqvip.com 第 4鼬 衍 I，P D X1 時 刪 【 細(xì)j 胞殊 C 2 C I

10、2 訃化 _ 向 胰島素 舟泄細(xì)胞 的作用 中的胰島索含．再按濃縮倍敬汁算 H 1 培養(yǎng) 液巾的胰島素濃度．藥盒的批 問變異率 及批 內(nèi)變異率 均 小 rl ( ) ％I1 統(tǒng)計(jì) 方法 流細(xì) 胞儀 受放射 免蹬測 定果 川平均 愾!懷準(zhǔn)篪 挺，對實(shí)驗(yàn)的阿 個十預(yù) 素( cI 誘導(dǎo) 技 P 1 ) X 一 1 轉(zhuǎn) 染 J ．采川 2聞棠析 同i 三 } 汁 t 的方芹 分析 統(tǒng) 汁軟件 勾 s Il f 】 _ 0．2結(jié) 果 2lp C

11、D N A 3 ． I f + J 裝載 P D X ． 1 后 P C R分析 I ， J2 5 0 ～ 5 ( ) 0h [ I 之 問的 條帶 、 勺P D X — I儉刪 段 ：7 5 0 ～ 10 0 0I } l - 之l i i 』 f l 0 祭帶為 、 一 【表 達(dá) 片段 廊 用 問 的 r ) I 物 ． 同 時 州 jI ， C 1 ) Na , 3 ． I ( + J絨 l - 1 ) x 一 1 后 的

12、68; { 結(jié) 果 蛻 叫l(wèi)1 ) x — IL成 J _ J J 地 裝載 《 r ) C D N A 3l I + I 』 一置 圉 圖 2C 2 C 1 2 細(xì)胞 G L P - l 誘導(dǎo)后 P D X - l 的表達(dá) F i g ． 2RT· P CR a n a l y s i so fP DX- If orC2 C1 2t r e a t e dwi t h (LP- Io n l yIi f i PI ?d i

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16、] ∞ (l 2耋 【 l J 胞經(jīng)過 『 州 濃 度[ 1 9 ( ： L P 一 1誘 導(dǎo)后 ． 1 l J 以 芪 達(dá) 少量 的 P I ) X — l13C 2 C 1 2細(xì)胞瞬 間轉(zhuǎn)染 P D X - l 及 G L P ． 1 誘導(dǎo) 后 P D X ． 1 的 表達(dá) l 剖 3I IJJ ． J ．H jl 】 C D N A 3 ． 【 l + ) 可以：P I ) X 一 】導(dǎo)人C 2 ( ： 12 細(xì)胞 f 1 ．：

17、 獲得 表達(dá) 2 ． 4 流式細(xì)胞儀測定胰島素分泌細(xì)胞 陽性率比值 結(jié) 果表】 ． ^ ’ 差分析結(jié)果 為： m(l l l一 l 產(chǎn)生n 勻方差值 為7 ． 1 6 3 ， P = 00 0 9 ：r hP D X 一 【 產(chǎn) L 的差f 『 E 『為2 t ) 3 2 ． P = O ． i X ) 1 ， 1 f I j _ 二 囂』 l 二 交作用 l。 = l4 4 ． ， ， =( 12 7 5 l _ f _． 1 ．{

18、I )A 3 ． I ? 轉(zhuǎn) 染P D X — l 可以提 高從【 ：2胞 分化 為胰島素舒泌細(xì)胞的 - r率 25 放射免疫測定培養(yǎng)基 中胰 島素含量的結(jié)果 結(jié)糶 表 2 ．廳籌分析 為： 山 I ． L l · 一 I圈 3C 2 CI 2細(xì) 胞 瞬 間 轉(zhuǎn) 染 P D X ． J殛 G IP ． J誘 導(dǎo) 后P D X ． 1 的表達(dá) F i g ． 3RT- P CRa n a l y s i sP DX- lf o

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