胰島素對骨骼肌細(xì)胞SREBP-1c的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：探討胰島素對大鼠骨骼肌細(xì)胞固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白1c（SREBP-1c）的表達(dá)調(diào)控的影響。
　　方法：30只140-160gSD雄性大鼠予以高脂伺料喂養(yǎng)12周成胰島素抵抗(IR)模型后隨機分為3組:對照組(NC)、高脂組(HF)及高脂+二甲雙胍組(HF+MET)。干預(yù)第4，8，10周行IPGTT試驗，第10周處死后留取骨骼肌組織行相關(guān)蛋白和基因檢測。將誘導(dǎo)分化完成的大鼠骨骼肌L6肌管細(xì)胞分為對照組(NC)及高脂組(PA)，加入

2、100nM的胰島素處理1h，2h，3h，4h，5h，6h，9h，12h;加入1nM，10nM，100nM的胰島素處理12h。將誘導(dǎo)分化完成的L6細(xì)胞分為對照組(NC)、胰島素組(Ins)、胰島素+磷酸?；?激酶(PI3K)抑制劑Wortmannin組(Ins+Wort)、胰島素+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制劑Compound C組(Ins+CC)、高脂對照組(PA)、高脂+胰島素組(PA+Ins)、高脂+胰島素+Wortmann

3、in組(PA+Ins+Wort)、高脂+胰島素+Compound C組(PA+Ins+CC)。實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和Western blot檢測SREBP-1c、胰島素受體底物1(IRS-1)、蛋白激酶B(AKT)、AMPK、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因及蛋白表達(dá)。多組資料比較采用方差分析，兩兩比較采用最小差異顯著差異法。
　　結(jié)果：⑴與NC組相比，HF組IRS-1基因和蛋白水平下降(P＜0.05)，SR

4、EBP-1c基因和蛋白水平升高(P＜0.05)，酪氨酸磷酸化IRS-1（p-IRS-1）蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)。與HF組相比，HF+MET組IRS-1基因和蛋白水平上升(P＜0.05)，SREBP-1c基因和蛋白水平下降(P＜0.05)，酪氨酸磷酸化IRS-1（p-IRS-1）蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)。⑵與NC組相比，胰島素處理組SREBP-1c基因和蛋白表達(dá)呈時間依賴性升高(P＜0.05)，絲氨酸磷酸化AKT(p-AKT)蛋

5、白表達(dá)升高(P＜0.05)。與PA組相比，胰島素處理組SREBP-1c基因表達(dá)先上升后下降(P＜0.05)，蛋白表達(dá)呈時間依賴性下降(P＜0.05); p-AKT蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)。⑶與NC組相比，胰島素100nM處理組p-AKT、SREBP-1c蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)，胰島素1nM，10nM，100nM處理組蘇氨酸磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)。與PA組相比，胰島素10nM，100

6、nM處理組p-AKT蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)，胰島素1nM，10nM，100nM處理組p-AMPK蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)、SREBP-1c蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)。⑷與NC組相比，Ins組SREBP-1c、p-AKT、p-AMPK、p-mTOR蛋白表達(dá)升高(P＜0.05);與Ins組相比，Ins+Wort組SREBP-1c蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)。與PA組相比，PA+Ins組SREBP-1c、p-mTOR蛋白表達(dá)下降，

7、p-AKT、p-AMPK蛋白表達(dá)升高(P＜0.05);與PA+Ins組相比，PA+Ins+CC組SREBP-1c蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)。
　　結(jié)論：高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠骨骼肌細(xì)胞中，二甲雙胍可能通過上調(diào)IRS-1，下調(diào)SREBP-1c改善其胰島素抵抗。骨骼肌細(xì)胞生理狀態(tài)下，胰島素對SREBP-1c的上調(diào)作用可能主要通過AKT-mTOR通路;高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下，胰島素治療對SREBP-1c的下調(diào)作用可能主要通過AMP