葡萄糖胺誘導(dǎo)的骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型PTEN的表達(dá).pdf

1、背景及目的：
　　 5'-單磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)和磷酸肌醇3-激酶(PI3K)的信號(hào)通路在胰島素抵抗及細(xì)胞凋亡中都起到十分重要的作用。它們影響葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)的表達(dá)和轉(zhuǎn)位以及細(xì)胞的凋亡。而10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因(PTEN)是PI3K/Akt通路的重要調(diào)節(jié)器。同時(shí)，PTEN可能也是AMPK的一個(gè)下游調(diào)節(jié)器。在本研究中，我們利用葡萄糖胺誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞建立胰島素抵抗模型，通過(guò)對(duì)葡萄糖胺

2、誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型及對(duì)其應(yīng)用PTEN的抑制劑BPV及AMPK激動(dòng)劑二甲雙胍處理，研究PTEN在胰島素抵抗中的作用及對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法：
　　 我們通過(guò)進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)，應(yīng)用葡萄糖胺對(duì)大鼠骨骼肌細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，制造胰島素抵抗模型。在成功建立葡萄糖胺誘導(dǎo)的骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型后，對(duì)葡萄糖胺誘導(dǎo)的骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型分別應(yīng)用PTEN的抑制劑BPV及AMPK激動(dòng)劑二甲雙胍進(jìn)行處理。實(shí)驗(yàn)分為4組:正常對(duì)照組

3、，葡萄糖胺組，二甲雙胍組及BPV組。利用氧化酶法檢測(cè)各組胰島素刺激前后葡萄糖變化及得到葡萄糖攝取率，通過(guò)Western Blotting檢測(cè)PTEN，P-PTEN和Akt蛋白的表達(dá)，利用免疫熒光方法檢測(cè)GLUT4轉(zhuǎn)位變化，以及通過(guò)AV-PI雙染測(cè)定細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 葡萄糖胺誘導(dǎo)的大鼠骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型與對(duì)照組相比，胰島素作用后葡萄糖攝取率明顯降低，同時(shí)GLUT4的表達(dá)和轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜上的數(shù)量減少，A

4、kt表達(dá)減少，而PTEN和p-PTEN的表達(dá)以及細(xì)胞的凋亡率增加。BPV及二甲雙胍處理后與未處理的葡萄糖胺誘導(dǎo)的骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型相比，胰島素作用后葡萄糖攝取率均明顯增加，同時(shí)GLUT4的表達(dá)和轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜上的數(shù)量也都增加，Akt表達(dá)均增加，而PTEN和p-PTEN的表達(dá)和細(xì)胞凋亡率降低。此外，BPV及二甲雙胍處理后與對(duì)照組相比GLUT4的表達(dá)增加，p-PTEN表達(dá)降低。BPV組的Akt蛋白的表達(dá)增加，細(xì)胞凋亡率降低，但是二甲雙胍

5、組的Akt蛋白的表達(dá)減小，細(xì)胞凋亡率增加。而B(niǎo)PV及二甲雙胍處理后與對(duì)照組相比葡萄糖攝取率、GLUT4的轉(zhuǎn)位和PTEN表達(dá)無(wú)明顯改變。
　　 結(jié)論：
　　 葡萄糖胺可誘導(dǎo)大鼠骨骼肌細(xì)胞，建立胰島素抵抗模型。葡萄糖胺誘導(dǎo)的胰島素抵抗骨骼肌細(xì)胞GLUT4的表達(dá)、轉(zhuǎn)位障礙和細(xì)胞凋亡率增加可能與PTEN表達(dá)增加有關(guān)。BPV和二甲雙胍可改善葡萄糖胺誘導(dǎo)的胰島素抵抗骨骼肌細(xì)胞的葡萄糖攝取障礙、GLUT4的表達(dá)和轉(zhuǎn)位障礙以及細(xì)胞凋亡，