JNK在骨骼肌源脂聯(lián)素影響骨骼肌胰島素抵抗模型GLUT4表達(dá)中的作用研究.pdf

1、背景：脂聯(lián)素(adiponectin APN)是作為脂肪因子首先在脂肪組織被發(fā)現(xiàn),具有抗動脈粥樣硬化、抗炎、以及改善胰島素敏感性的作用。新近的研究已證實脂聯(lián)素不僅由脂肪細(xì)胞分泌,在骨骼肌組織以及體外培養(yǎng)的大鼠L6細(xì)胞中也檢測到APN的表達(dá)和分泌,并以自分泌的方式發(fā)揮著增加骨骼肌自身脂肪酸氧化和葡萄糖攝取的作用。然而骨骼肌源脂聯(lián)素分泌調(diào)控機(jī)制及其在骨骼肌胰島素抵抗(insulin resistance,IR)發(fā)生發(fā)展中的具體作用機(jī)制還不清

2、楚。C-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)作為絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族重要的一員,它的激活不僅與炎癥信號通路和氧化應(yīng)激密切相關(guān),而且目前已公認(rèn)JNK可使胰島素受體底物1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)第307位的絲氨酸殘基磷酸化導(dǎo)致IR。腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activate

3、d protein,AMPK)是脂聯(lián)素信號通路中的關(guān)鍵信號分子,介導(dǎo)了脂聯(lián)素對 IR的改善,MAPK/JNK又是AMPK信號通路的下游靶點之一,然而針對JNK信號通路在骨骼肌源脂聯(lián)素改善自身胰島素抵抗中作用的相關(guān)研究較少。
　　目的：通過建立棕櫚酸(palmic acid,PA)誘導(dǎo)的大鼠L6細(xì)胞IR模型,研究JNK在骨骼肌源脂聯(lián)素影響骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(GLUT4)表達(dá)中的作用
　　方法：首先體外培養(yǎng)大鼠 L6細(xì)胞并誘

4、導(dǎo)分化為成熟的骨骼肌細(xì)胞,然后觀察在不同時間和濃度的PA作用下大鼠L6細(xì)胞培養(yǎng)上清液中剩余葡萄糖濃度,評價不同濃度PA對大鼠L6細(xì)胞葡萄糖攝取的影響,建立大鼠L6細(xì)胞IR模型。IR模型建立后,分別予以JNK抑制劑SP600125及吡格列酮(PIO)干預(yù),并將細(xì)胞分成四組:NC組(對照組)、IR組、IR+PIO組和IR+SP600125組。用Western blot方法分別檢測四組細(xì)胞中APN、磷酸化JNK(p-JNK)以及GLUT4蛋白

5、表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.0.4 mmol/L的PA孵育24、36 h與0.6、0.8 mmol/L的PA孵育8、12、24、36 h后細(xì)胞上清液剩余葡萄糖濃度明顯高于NC組(P<0.05),即葡萄糖攝取受到明顯的抑制,在此濃度和作用時間的PA誘導(dǎo)下IR模型得以建立。MTT結(jié)果顯示0.8、1.0 mmol/L的PA作用24、36 h時對細(xì)胞的活性有影響。2.Western blot結(jié)果顯示:與NC組比較,IR組APN及GLUT4的

6、表達(dá)量降低,p-JNK表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與IR組比較,IR+PIO組APN及GLUT4的表達(dá)增加,p-JNK表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與IR組比較,IR+SP600125組APN表達(dá)增加,p-JNK表達(dá)明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而IR+SP600125組的GLUT4表達(dá)量雖較IR組增加,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：1.通過一定濃度和時間的PA刺激可以