脂聯(lián)素調(diào)控肉雞骨骼肌脂肪代謝的機(jī)制研究.pdf

1、本論文主要是進(jìn)行的脂聯(lián)素對(duì)家禽中骨骼肌脂肪代謝的調(diào)控機(jī)制的研究。本試驗(yàn)從“脂肪酸氧化影響脂肪沉積”的方向入手，研究脂聯(lián)素調(diào)控肉雞骨骼肌脂肪沉積中的作用。本試驗(yàn)建立肉雞骨骼肌脂肪異位沉積的活體模型（不同生長(zhǎng)階段、不同脂肪沉積能力的個(gè)體、DEX處理）采用Real-time PCR和Western blotting等方法，研究脂聯(lián)素的蛋白水平和脂肪氧化情況，來證明脂聯(lián)素是否調(diào)控肉雞骨骼肌脂肪氧化或沉積。本課題從核酸、蛋白、細(xì)胞和組織水平揭示脂

2、肪代謝的調(diào)控機(jī)理，完善對(duì)脂聯(lián)素影響機(jī)體能量分配的認(rèn)識(shí)，為指導(dǎo)家禽生產(chǎn)和改善肉品質(zhì)提供理論依據(jù)。
　　試驗(yàn)一:肉仔雞脂聯(lián)素的時(shí)空表達(dá)規(guī)律選取體重相近的1日齡Arbor Acres雄性肉仔雞112只，自由采食飲水，分別在7日齡、14日齡、21日齡、28日齡、35日齡、42日齡、49日齡時(shí)，隨機(jī)選取8只雞，翅靜脈采血，分離血漿并置于4℃保存。斷頸放血處死，分離肝臟、腹脂（腹部加肌胃及腸系膜周圍脂肪）、胸肌、腿肌并稱重。取腹脂、胸大肌和臀

3、股二頭肌。結(jié)果顯示，隨著日齡的增加，胸肌、腿肌和腹部脂肪的比重呈增加趨勢(shì)，而血液中的脂聯(lián)素含量和肝臟比重呈下降趨勢(shì)。胸肌和腿肌以及腹部脂肪中的脂聯(lián)素和受體mRNA表達(dá)量呈下降趨勢(shì)。這說明，隨著周齡的增加，肉仔雞的脂肪沉積能力在加強(qiáng)，同時(shí)脂聯(lián)素在脂肪組織的分泌功能、在骨骼肌組織中的作用降低。說明脂聯(lián)素有可能參與了對(duì)肉仔雞骨骼肌脂肪沉積的調(diào)控。
　　試驗(yàn)二:脂聯(lián)素與肉仔雞脂肪沉積能力的關(guān)系選取42日齡Arbor Acres雄性肉仔雞4

4、5只，編號(hào)，翅靜脈采血，分離血漿并測(cè)定血漿中TG的含量和VLDL的含量。根據(jù)TG和VLDL的含量分為根據(jù)TG和VLDL的含量進(jìn)行分組，即高TG和高VLDL組(Fat)和對(duì)照組，自由采食和飲水。49日齡時(shí)，隨機(jī)選取8只雞，翅靜脈采血，分離血漿并置于4℃保存。斷頸放血處死，分離腹脂并稱重、取腹脂、胸大肌和臀股二頭肌。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高脂肪組肉雞的胸肌脂聯(lián)素及其受體1的mRNA表達(dá)水平低于對(duì)照雞組，而高脂肪組的腹脂比重顯著高于對(duì)照組，并且血液中脂聯(lián)

5、素的含量高脂肪組低于對(duì)照組。結(jié)果提示脂聯(lián)素在骨骼肌中的脂肪氧化能力下降，從而導(dǎo)致肉雞身體脂肪含量的增加，具體表現(xiàn)在腹部和胸肌。
　　試驗(yàn)三:脂聯(lián)素與不同品系家禽脂肪沉積能力的關(guān)系我們選擇7周齡的蛋雞和肉雞各10只采集樣品，結(jié)果顯示，肉雞的腹脂比重顯著比蛋雞的大，而腹脂中脂聯(lián)素受體的mRNA水平顯著降低，同時(shí)血液中脂聯(lián)素含量也顯著低于蛋雞。以上結(jié)果提示脂聯(lián)素在骨骼肌中的脂肪氧化能力下降，從而導(dǎo)致肉雞身體脂肪含量的增加，具體表現(xiàn)在腹部

6、和胸肌。
　　試驗(yàn)四:地塞米松與不同能量狀態(tài)下肉仔雞脂肪代謝的關(guān)系選取60只體重相近的28日齡Arbor Acres雄性肉仔雞，隨機(jī)分成2個(gè)日糧處理，每個(gè)處理30個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只雞:高能日糧;低能日糧。35d時(shí)每個(gè)日糧處理分別下設(shè)2個(gè)處理，處理7天，每個(gè)重復(fù)1只雞:DEX:注射地塞米松磷酸鈉，劑量為2.0mg/kg體重;Control:注射同劑量的生理鹽水。自由采食和飲水。42日齡時(shí)采集樣品。翅靜脈采血，分離血漿并置于4℃保存

7、。斷頸放血處死，分離肝臟、腹脂、胸肌、腿肌并稱重。取腹脂、胸大肌和臀股二頭肌。同時(shí)，選取22日齡的肉雞，分成兩組，分別飼喂高能日糧和低能日糧，42日齡時(shí)采樣。結(jié)果顯示，7天的高低能日糧對(duì)肉雞腹脂、胸腿肌重脂聯(lián)素及其受體的表達(dá)沒有顯著影響，而長(zhǎng)期的高低能日糧對(duì)肉雞腹脂、胸腿肌重脂聯(lián)素及其受體的表達(dá)有顯著影響，這說明脂聯(lián)素可能參與了體內(nèi)能量的調(diào)節(jié)。DEX處理后，顯著增加了腹脂和肝臟的比重，顯著降低了腹脂脂聯(lián)素mRNA水平，顯著降低了血液脂聯(lián)

8、素含量，這些結(jié)果提示DEX處理后肉仔雞脂聯(lián)素的分泌功能降低。DEX導(dǎo)致肉仔雞胸肌脂聯(lián)素和受體2的mRNA水平提高。這個(gè)結(jié)果可能是對(duì)血液循環(huán)中低脂聯(lián)素的一個(gè)負(fù)反饋反應(yīng)。肉仔雞骨骼肌的脂肪沉積能力由于DEX的處理而顯著增強(qiáng)，說明DEX顯著降低了骨骼肌的脂肪酸氧化能力，進(jìn)而導(dǎo)致脂肪異位沉積的增加。DEX導(dǎo)致肉仔雞胸肌和腿肌的AMPK磷酸化水平均顯著降低，這進(jìn)一步說明了骨骼肌的脂肪酸氧化能力顯著下降，并且提示脂聯(lián)素對(duì)骨骼肌脂肪代謝的調(diào)控可能是通

9、過AMPK-CPT1途徑。
　　試驗(yàn)五:脂聯(lián)素調(diào)控雞成肌細(xì)胞脂肪代謝的機(jī)制研究分別用DEX和脂聯(lián)素處理成肌細(xì)胞，結(jié)果顯示用DEX處理后，細(xì)胞內(nèi)脂肪的含量是增加的，并且脂聯(lián)素的表達(dá)量是下降的，AMPK在mRNA水平無顯著性差異，CPT1的活性有減少的趨勢(shì)。當(dāng)用脂聯(lián)素處理細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯的含量是降低的，AMPK的磷酸化水平是增加的，同時(shí)添加脂聯(lián)素也會(huì)使成肌細(xì)胞CPT1的活性增加。這說明脂聯(lián)素調(diào)節(jié)成肌細(xì)胞內(nèi)脂肪代謝的原因可能是: