坎地沙坦減輕自發(fā)性高血壓大鼠和小鼠成肌細(xì)胞(C2C12)胰島素抵抗的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　1、觀察坎地沙坦改善自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)胰島素抵抗的作用,并研究其機(jī)制。
　　2、研究坎地沙坦預(yù)防血管緊張素II(AngII)損害小鼠成肌細(xì)胞(C2C12)胰島素分子信號(hào)通路的作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　1、將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為對(duì)照組、模型組、坎地沙坦高劑量組(0.8mg/kg/day)和坎地沙坦低劑量組(0.4mg/kg/day),使用果糖喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8周以建立同時(shí)具有高血壓及胰島素抵抗特征的動(dòng)

2、物模型。第8周時(shí)處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,采集血液測(cè)定AngII、空腹血糖(FBG)、血清空腹胰島素(FINs),計(jì)算出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。采集骨骼肌并檢測(cè)活性氧產(chǎn)物(ROS)的含量、蛋白激酶(Akt)的mRNA表達(dá)及其蛋白表達(dá);免疫細(xì)胞化學(xué)染色后觀察血管緊張素II受體1(AT1R)和血管緊張素受體2(AT2R)在骨骼肌的表達(dá)。2、將培養(yǎng)的C2C12細(xì)胞分為正常對(duì)照組、模型組、坎地沙坦低劑量組(0.1μM)、坎地沙坦中劑量組

3、(1μM)和坎地沙坦高劑量組(10μM),除正常對(duì)照組外,均給與AngII(0.1μM)干預(yù)。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的表達(dá)和2-NBDG攝取率;檢測(cè)磷脂酰肌醇激酶(PI3Kp85)、胰島素受體底物1(IRS-1)、Akt、轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(GLUT-4)等因子的mRNA及其蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)第8周時(shí),與對(duì)照組相比,模型組大鼠的血壓、FINs、HOMA-IR和骨骼肌中的AT

4、1R、ROS的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組(P<0.01);骨骼肌中AT2R、AktmRNA和p-Akt蛋白表達(dá)則顯著減少(P<0.01)。與模型組相比,給予坎地沙坦干預(yù)的兩組大鼠的血壓、FINs、HOMA-IR和骨骼肌中的ROS表達(dá)均顯著下降(P<0.01,P<0.05),骨骼肌AT1R、AT2R、AktmRNA和p-Akt蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.01,P<0.05)。
　　2、與對(duì)照組相比,模型組C2C12細(xì)胞內(nèi)的ROS表達(dá)顯著增加

5、(P<0.01),細(xì)胞攝取2-NBDG顯著降低(P<0.01),Nrf2、Akt、IRS-1和GLUT-4mRNA的表達(dá)顯著降低(P<0.05,P<0.01),Nrf2、p-Akt、p-IRS-1和GLUT-4蛋白表達(dá)量也顯著降低(P<0.05,P<0.01)。而給予坎地沙坦干預(yù)后,坎地沙坦高劑量組的ROS表達(dá)較模型組顯著下降(P<0.05),細(xì)胞攝取2-NBDG較模型組顯著增加(P<0.05)。與模型組相比,坎地沙坦中劑量組和高劑量組

6、細(xì)胞內(nèi)Nrf2、PI3Kp85、IRS-1和Akt的mRNA表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05,P<0.01),同時(shí),Nrf2、PI3Kp85、p-IRS-1、p-Akt的蛋白表達(dá)量也顯著增加(P<0.05,P<0.01);GLUT-4的mRNA和蛋白表達(dá)雖有上調(diào)的趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、坎地沙坦(0.8mg/kg/day和0.4mg/kg/day)可以顯著降低SHR的血壓和空腹血清胰島素,減少骨

7、骼肌組織中ROS的生成,上調(diào)SHR骨骼肌細(xì)胞中AktmRNA及p-Akt蛋白的表達(dá),改善胰島素抵抗。其機(jī)制與坎地沙坦特異性結(jié)合AT1R,從而抑制AngII的作用有關(guān)。
　　2、在C2C12細(xì)胞內(nèi),AngII可以通過下調(diào)胰島素分子信號(hào)傳導(dǎo)通路中的重要反應(yīng)元件ISR-1、PI3K、Akt、GLUT-4的表達(dá),影響胰島素的正常生理效應(yīng),造成胰島素抵抗。同時(shí),AngII可能通過下調(diào)Nrf2在C2C12內(nèi)的表達(dá)增加氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的影響,使R