Proliferin對小鼠C2C12細胞和衛(wèi)星細胞的增殖調(diào)控作用機制研究.pdf

1、骨骼肌生長發(fā)育與再生修復(fù)機制一直是動物遺傳育種和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點之一，解析其分子機理，對研究肌肉的生長發(fā)育規(guī)律具有非常重要的意義。Proliferin(PLF)屬于催乳素/生長激素超家族，能夠調(diào)控血管生成，促進內(nèi)皮細胞和毛囊角質(zhì)細胞的遷移，對腫瘤細胞的增殖具有正調(diào)控作用，然而其對肌源細胞的作用尚未見報道。
　　本研究以小鼠成肌細胞C2C12和小鼠衛(wèi)星細胞為對象，研究PLF的表達模式及其調(diào)控規(guī)律，以期能夠初步闡述PLF對成肌細胞增

2、殖和分化調(diào)控的機理，為深入研究骨骼肌生長發(fā)育規(guī)律奠定基礎(chǔ)。論文的主要結(jié)果如下:
　　(1)鑒定了PLF在C2C12細胞中的時空表達規(guī)律，并確證了家族中的一個基因Prl2c2起主導(dǎo)作用。通過RT-PCR和Q-PCR實驗檢測，結(jié)果表明PLF在C2C12細胞增殖期的表達量極顯著高于分化期(p＜0.01);酶切分型和單克隆測序的結(jié)果表明，PLF家族中的一個基因Prl2c2起主導(dǎo)作用。
　　(2)在成肌細胞C2C12中鑒定了PLF促進

3、增殖抑制分化的生物學(xué)特征。si-PLF轉(zhuǎn)染細胞，流式分析細胞周期，發(fā)現(xiàn)細胞在G0/G1期的比例極顯著增加(p＜0.01)，S期極顯著下降(p＜0.01);xCELLigence監(jiān)測系統(tǒng)分析表明，轉(zhuǎn)染si-PLF后，細胞的生長速度下降;si-PLF轉(zhuǎn)染細胞，EdU染色后流式分析表明，EdU陽性率極顯著降低(p＜0.01)。細胞轉(zhuǎn)染si-PLF后誘導(dǎo)分化，Q-PCR檢測表明肌肉分化標記基因MyoG的表達量顯著上調(diào)(p＜0.05)。
　

4、　(3)在C2C12細胞中，PLF通過調(diào)控MAPK和Wnt信號通路中相關(guān)基因的表達量，從而發(fā)揮促增殖的作用。
　　(4)通過siRNA和Q-PCR迸一步確證了與PLF相互作用的基因網(wǎng)絡(luò)。通過Q-PCR實驗檢測，C2C12細胞轉(zhuǎn)染si-PLF后，Xirp1，Rrm2b，Ywhaz和Pole4 mRNA的表達量極顯著下降(p＜0.01)，Ttn mRNA的表達量顯著下降(p＜0.05)。
　　(5)鑒定了PLF對小鼠衛(wèi)星細胞的時