吡格列酮對(duì)CXCL10介導(dǎo)的βTc6細(xì)胞凋亡及TLR4-NF-κB表達(dá)的干預(yù)作用.pdf

1、目 的：
　　 1研究CXC趨化因子10(CXC chemokine ligand-10,CXCL10)干預(yù)前后，小鼠胰島素瘤細(xì)胞系βTc6細(xì)胞TLR4/NF-κB的表達(dá)情況及相應(yīng)的細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞增殖能力以及細(xì)胞凋亡情況的變化。
　　 2 應(yīng)用吡格列酮干預(yù)CXCL10對(duì)胰島β細(xì)胞的作用，觀察吡格列酮干預(yù)后上述研究指標(biāo)的改變，探討吡格列酮對(duì)CXCL10作用下的胰島β細(xì)胞的影響。
　　 方 法：
　　 1體外

2、培養(yǎng)βTc6細(xì)胞，不同濃度CXCL10（0.1ng/ml、1.0ng/ml、10.0ng/ml）分別孵育細(xì)胞不同時(shí)限（30分鐘～48小時(shí)）后，應(yīng)用RT-PCR和Western Blot檢測(cè)TLR4和NF-κB表達(dá)活化情況，CCK-8法檢測(cè)βTc6細(xì)胞的增殖能力，流式細(xì)胞儀和DNA LADDER檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。
　　 2不同濃度吡格列酮（0.1umol/L、1.0umol/L、10.0umol/L）預(yù)孵育βTc6細(xì)胞24小時(shí)后，

3、再予10.0ng/ml CXCL10共同孵育細(xì)胞不同時(shí)限（30分鐘～48小時(shí)）后，應(yīng)用RT-PCR和Western Blot檢測(cè)TLR4和NF-κB表達(dá)活化情況，CCK-8法檢測(cè)βTc6細(xì)胞的增殖能力,流式細(xì)胞儀和DNA LADDER檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié) 果：
　　 1經(jīng)過CXCL100.1ng/ml～1.0ng/ml干預(yù)12～48小時(shí)之后，βTc6細(xì)胞形態(tài)未見明顯變化，但10.0ng/ml CXCL10干預(yù)組在

4、干預(yù)24～48小時(shí)之后，βTc6細(xì)胞生長(zhǎng)變稀疏，出現(xiàn)脫壁漂浮的細(xì)胞，并且細(xì)胞增殖活力降低。
　　 2 經(jīng)0.1～1.0ng/ml CXCL10干預(yù)12小時(shí)后，βTc6細(xì)胞TLR4 mRNA及蛋白的表達(dá)無明顯變化，但10.0ng/ml CXCL10干預(yù)組TLR4 mRNA及蛋白的表達(dá)已有上升。隨著干預(yù)時(shí)間延長(zhǎng)至24小時(shí)，1.0ng/ml CXCL10干預(yù)組βTc6細(xì)胞TLR4 mRNA及蛋白的表達(dá)亦高于空白對(duì)照組。干預(yù)時(shí)間進(jìn)一步延

5、長(zhǎng)至48小時(shí)，1.0～10.0ng/ml CXCL10干預(yù)組TLR4 mRNA及蛋白的表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)。CXCL10對(duì)TLR4表達(dá)的上調(diào)具有濃度及時(shí)間依賴性。
　　 3 經(jīng)1.0～10.0ng/ml CXCL10干預(yù)30分鐘后，βTc6細(xì)胞NF-κB的活化水平明顯上調(diào)。隨著時(shí)間延長(zhǎng)至24小時(shí)，0.1～10.0ng/ml CXCL10干預(yù)組細(xì)胞NF-κB的活化水平逐漸下調(diào)。而10.0ng/ml CXCL10干預(yù)組，βTc6細(xì)胞的NF

6、-κB活化持續(xù)到24小時(shí)。干預(yù)時(shí)間進(jìn)一步延長(zhǎng)至48小時(shí)，0.1～10.0ng/ml CXCL10干預(yù)組βTc6細(xì)胞NF-κB的活化水平接近于空白對(duì)照組。CXCL10對(duì)NF-κB活化具有濃度及時(shí)間依賴性。
　　 4 經(jīng)0.1～10.0ng/ml CXCL10干預(yù)12～24小時(shí)后，流式細(xì)胞術(shù)及DNA LADDER顯示10.0ng/ml CXCL10干預(yù)βTc6細(xì)胞24小時(shí)后出現(xiàn)細(xì)胞凋亡。隨著時(shí)間延長(zhǎng)至48小時(shí),1.0ng/ml CX

7、CL10干預(yù)組亦出現(xiàn)細(xì)胞凋亡。
　　 5 吡格列酮干預(yù)對(duì)CXCL10作用下βTc6細(xì)胞TLR4/NF-κB信號(hào)通路及相應(yīng)細(xì)胞凋亡情況的影響：
　　 （1）1.0umol/L～10.0umol/L吡格列酮預(yù)孵育βTc6細(xì)胞24小時(shí)后可抵抗CXCL10誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡并上調(diào)了細(xì)胞的增殖活力。而0.1umol/L吡格列酮干預(yù)組無明顯變化。
　　 （2）1.0umol/L～10.0umol/L吡格列酮預(yù)孵育βTc6細(xì)胞24

8、小時(shí)后，吡格列酮下調(diào)了CXCL10誘導(dǎo)的細(xì)胞TLR4/NF-κB活化。而0.1umol/L吡格列酮干預(yù)組尚不能改變CXCL10誘導(dǎo)的細(xì)胞TLR4/NF-κB信號(hào)的傳導(dǎo)。
　　 結(jié) 論：
　　 1短時(shí)間一定濃度的CXCL10作用可促進(jìn)βTc6細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活化，但對(duì)細(xì)胞內(nèi)TLR4 mRNA及蛋白的表達(dá)無影響，亦對(duì)細(xì)胞的增殖活性以及凋亡無顯著影響。
　　 2 長(zhǎng)時(shí)間高濃度的CXCL10作用將導(dǎo)致TLR4 mRNA