吡格列酮對CXCL10介導的βTc6細胞凋亡及TLR4-NF-κB表達的干預作用.pdf

1、目 的：
　　 1研究CXC趨化因子10(CXC chemokine ligand-10,CXCL10)干預前后，小鼠胰島素瘤細胞系βTc6細胞TLR4/NF-κB的表達情況及相應的細胞形態(tài)、細胞增殖能力以及細胞凋亡情況的變化。
　　 2 應用吡格列酮干預CXCL10對胰島β細胞的作用，觀察吡格列酮干預后上述研究指標的改變，探討吡格列酮對CXCL10作用下的胰島β細胞的影響。
　　 方 法：
　　 1體外

2、培養(yǎng)βTc6細胞，不同濃度CXCL10（0.1ng/ml、1.0ng/ml、10.0ng/ml）分別孵育細胞不同時限（30分鐘～48小時）后，應用RT-PCR和Western Blot檢測TLR4和NF-κB表達活化情況，CCK-8法檢測βTc6細胞的增殖能力，流式細胞儀和DNA LADDER檢測細胞凋亡情況。
　　 2不同濃度吡格列酮（0.1umol/L、1.0umol/L、10.0umol/L）預孵育βTc6細胞24小時后，

3、再予10.0ng/ml CXCL10共同孵育細胞不同時限（30分鐘～48小時）后，應用RT-PCR和Western Blot檢測TLR4和NF-κB表達活化情況，CCK-8法檢測βTc6細胞的增殖能力,流式細胞儀和DNA LADDER檢測細胞凋亡情況。
　　 結(jié) 果：
　　 1經(jīng)過CXCL100.1ng/ml～1.0ng/ml干預12～48小時之后，βTc6細胞形態(tài)未見明顯變化，但10.0ng/ml CXCL10干預組在

4、干預24～48小時之后，βTc6細胞生長變稀疏，出現(xiàn)脫壁漂浮的細胞，并且細胞增殖活力降低。
　　 2 經(jīng)0.1～1.0ng/ml CXCL10干預12小時后，βTc6細胞TLR4 mRNA及蛋白的表達無明顯變化，但10.0ng/ml CXCL10干預組TLR4 mRNA及蛋白的表達已有上升。隨著干預時間延長至24小時，1.0ng/ml CXCL10干預組βTc6細胞TLR4 mRNA及蛋白的表達亦高于空白對照組。干預時間進一步延

5、長至48小時，1.0～10.0ng/ml CXCL10干預組TLR4 mRNA及蛋白的表達進一步上調(diào)。CXCL10對TLR4表達的上調(diào)具有濃度及時間依賴性。
　　 3 經(jīng)1.0～10.0ng/ml CXCL10干預30分鐘后，βTc6細胞NF-κB的活化水平明顯上調(diào)。隨著時間延長至24小時，0.1～10.0ng/ml CXCL10干預組細胞NF-κB的活化水平逐漸下調(diào)。而10.0ng/ml CXCL10干預組，βTc6細胞的NF

6、-κB活化持續(xù)到24小時。干預時間進一步延長至48小時，0.1～10.0ng/ml CXCL10干預組βTc6細胞NF-κB的活化水平接近于空白對照組。CXCL10對NF-κB活化具有濃度及時間依賴性。
　　 4 經(jīng)0.1～10.0ng/ml CXCL10干預12～24小時后，流式細胞術(shù)及DNA LADDER顯示10.0ng/ml CXCL10干預βTc6細胞24小時后出現(xiàn)細胞凋亡。隨著時間延長至48小時,1.0ng/ml CX

7、CL10干預組亦出現(xiàn)細胞凋亡。
　　 5 吡格列酮干預對CXCL10作用下βTc6細胞TLR4/NF-κB信號通路及相應細胞凋亡情況的影響：
　　 （1）1.0umol/L～10.0umol/L吡格列酮預孵育βTc6細胞24小時后可抵抗CXCL10誘導的細胞凋亡并上調(diào)了細胞的增殖活力。而0.1umol/L吡格列酮干預組無明顯變化。
　　 （2）1.0umol/L～10.0umol/L吡格列酮預孵育βTc6細胞24

8、小時后，吡格列酮下調(diào)了CXCL10誘導的細胞TLR4/NF-κB活化。而0.1umol/L吡格列酮干預組尚不能改變CXCL10誘導的細胞TLR4/NF-κB信號的傳導。
　　 結(jié) 論：
　　 1短時間一定濃度的CXCL10作用可促進βTc6細胞內(nèi)NF-κB的活化，但對細胞內(nèi)TLR4 mRNA及蛋白的表達無影響，亦對細胞的增殖活性以及凋亡無顯著影響。
　　 2 長時間高濃度的CXCL10作用將導致TLR4 mRNA