替米沙坦、吡格列酮對(duì)OLETF大鼠IL-18、TLR4表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本研究通過(guò)高脂飼料喂養(yǎng)自發(fā)性高血糖(otsuka long-evans tokushima fatty，OLETF)大鼠建立胰島素抵抗(insulin resistance，IR)模型，并進(jìn)一步用替米沙坦、吡格列酮進(jìn)行藥物干預(yù)，旨在:1、探究白細(xì)胞介素-18(interleukin-18，IL-18)在IR大鼠血清中表達(dá)量的變化;2、觀測(cè)Toll樣受體4（Toll like receptor4，TLR4）在IR大鼠血清和心肌組織中

2、表達(dá)量的改變;3、探討血管緊張素Ⅱ1型受體拮抗劑(AT1R)替米沙坦對(duì)IL-18水平的影響及其改善IR的可能機(jī)制;4、探討吡格列酮對(duì)TLR4水平的影響及其降低心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)的可能機(jī)制。
　　方法:36只雄性O(shè)LETF大鼠（4周齡，SPF級(jí)），同系同齡LETO(long-evanstokushima fatty)大鼠12只，體重約140-190g，用標(biāo)準(zhǔn)飼料在清潔環(huán)境中喂養(yǎng)4周。在8周齡時(shí)，給所有OLETF大鼠喂以高脂飼料，于28周

3、齡時(shí)禁食12小時(shí)，檢測(cè)所有大鼠的空腹血糖(FBG)、血清胰島素(FINS)的水平，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)[HOMA-IR=(FBG×FINS)/22.5]和胰島素敏感指數(shù)[ISI=Ln1/(FBG×FINS)]，判斷是否成功建立IR模型。將36只成功建模的IR大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，模型組(M)12只繼續(xù)喂以高脂飼料，替米沙坦(T)組12只喂以替米沙坦(5mg/kg·d)加高脂飼料，吡格列酮(P)組12只喂以吡格列酮(2mg/kg·

4、d)加高脂飼料，LETO大鼠12只作為對(duì)照(NC)組，一直給予標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。藥物干預(yù)20周后再次禁食12小時(shí)，采用葡萄糖酶法測(cè)定FBG，放射免疫法測(cè)定FINS，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)。采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定IL-18、TLR4，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，然后迅速處死大鼠，取出大鼠心肌、胰腺、腎臟等組織放于凍存管中，并于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆茫肳e

5、stern Blotting測(cè)定TLR4蛋白在所有大鼠心肌組織中的表達(dá)量變化。所有結(jié)果均采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。
　　結(jié)果:1、各組間的FBG, FINS，HOMA-IR和ISI的對(duì)比:與NC組相比，M組的FBG, FINS，HOMA-IR的水平顯著增高，ISI的水平也顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;T組、P組與M組比較，F(xiàn)BG, FINS，HOMA-IR的水平顯著降低，ISI水平顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

6、05或P＜0.01)。
　　2、各組間血脂代謝指標(biāo)的比較:M組TC，TG, LDL-C水平明顯高于NC組，HDL-C水平明顯低于NC組;T組與M組相比，TC，TG, LDL-C的水平顯著降低，而HDL-C的水平卻無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)，與M組相比，P組的TC，TG, LDL-C的水平明顯降低，而HDL-C的水平也明顯升高，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。
　　3、各組間大

7、鼠血清IL-18，TLR4水平的比較:M組IL-18T, LR4水平明顯高于NC組，與M組相比，T組的血清IL-18，TLR4的水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與M組相比，P組的血清中IL-18，TLR4的水平亦明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4、各組心肌組織中TLR4蛋白水平的表達(dá):M組心肌組織中TLR4蛋白水平明顯高于NC組，T組與M組相比，心肌組織中TLR4蛋白水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

8、（P＜0.05或P＜0.01），P組與M組相比，心肌組織中TLR4蛋白水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5、IL-18、TLR4與HOMA-IR的相關(guān)性分析:Pearson相關(guān)性分析提示IL-18，TLR4與HOMA-IR呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　6、HOMA-IR與各變量間多元logistic回歸分析:以HOMA-IR為因變量，以FBG, FINS，TG, TC，HDL-C，LDL-C，IL-18

9、，TLR4為自變量，在α=0.05水平上進(jìn)行多元logistic回歸分析，結(jié)果顯示IL-18，TLR4是HOMA-IR的影響因素。
　　結(jié)論:1、高脂喂養(yǎng)后存在胰島素抵抗的OLETF大鼠血清中FBG, FINS，HOMA-IR，TC，TG, LDL-C，IL-18，TLR4水平明顯升高，ISI，HDL-C水平明顯降低。
　　2、替米沙坦干預(yù)后，IR大鼠血清FBG, FINS，HOMA-IR，TC，TG, LDL-C，IL-1

10、8，TLR4水平明顯降低，ISI水平明顯升高，表明替米沙坦可以通過(guò)改善IR大鼠的糖脂代謝，降低炎癥因子IL-18的水平改善其胰島素抵抗。
　　3、吡格列酮干預(yù)后，IR大鼠血清FBG, FINS，HOMA-IR，TC，TG, LDL-C，IL-18，TLR4水平明顯降低，ISI，HDL-C水平明顯升高，表明吡格列酮既能顯著改善IR大鼠的胰島素抵抗。
　　4、應(yīng)用Western Blotting法測(cè)定OLETF大鼠心肌組織中TL