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文檔簡介
1、目的:
1.觀察西格列汀干預對高脂高糖聯(lián)合STZ誘導糖尿病大鼠的骨密度和骨轉換指標的影響;
2.觀察西格列汀對糖尿病大鼠的骨保護作用與TLR4/NF-κB表達的關系。
方法:
1.糖尿病模型:選用60只雄性SD大鼠,分為對照組(NC組,n=15)和造模組(n=45), NC組予標準大鼠飼料,造模組予高糖高糖飼料(HSFDs)8周。造模組8周后禁食12h,空腹腹腔注射1%STZ30mg/kg,NC組
2、予等量生理鹽水。72小時后尾靜脈采血,羅氏血糖儀檢測空腹血糖≥16.7mmol/L者確定為2型糖尿病大鼠;
2.藥物干預:將造模成功的31只大鼠隨機分為2型糖尿病組(T2DM組,n=16)和2型糖尿病西格列汀干預組(SitA組,100mg/kg·d,n=15)。造模成功2周后開始行西格列汀(Sitagliptin, SitA)干預。西格列汀溶于生理鹽水,于每天09:00灌胃。NC組及T2DM組予等計量生理鹽水,干預時間為20周
3、,正常組給予標準飼料,余兩組繼續(xù)HSFDs喂養(yǎng);
3.相關指標觀察:20周末檢測各組空腹血糖、體重;0、20周末空腹狀態(tài)下行腹腔注射葡萄糖耐量實驗(IPGTT),并計算曲線下面積(AUC);取腹主動脈血清并保存,放射免疫法檢測各組大鼠血清胰島素;
4.骨密度及骨轉換指標檢測:DEXA法測定各組下肢、上肢、軀干、脊柱及全身骨密度(BMD);酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清OCN和TRAP5b活性;AMP緩沖液法檢測ALP水平;<
4、br> 5.相關基因及蛋白的檢測:應用RT-PCR及Western Blot測定大鼠股骨BMP-2、TLR4及NF-κB的mRNA及蛋白表達情況。
結果:
1. STZ誘導的糖尿病大鼠呈現明顯的高血糖狀態(tài),平均空腹血糖達(18.83±2.05);與NC組相比,造模組IPGTT曲線下面積AUC明顯增高(P<0.05);
2. SitA干預20周后,與NC組相比,T2DM組空腹血糖、AUC明顯升高(P<0.0
5、5),血清胰島素、體重減少(P<0.05);SitA組空腹血糖、AUC升高(P>0.05),血清胰島素降低(P>0.05),體重無明顯差異(P>0.05);與 T2DM組相比,SitA組空腹血糖、AUC明顯降低(P<0.05),血清胰島素、體重明顯升高(P<0.05);
3.與NC組比較,T2DM組下肢、上肢、軀干、脊柱及全身骨密度均降低,其中以下肢、上肢、全身骨密度下降更明顯(P<0.05),SitA組下肢、上肢、脊柱及全身
6、骨密度降低(P>0.05),軀干骨密度升高(P>0.05);與T2DM組比較,SitA組各部位骨密度均增加,以下肢、上肢及全身骨密度升高更明顯(P<0.05);
4.與NC組比較,T2DM組ALP表達降低(P<0.05),OCN表達降低(P>0.05),TRAP5b表達升高(P<0.05),SitA組ALP表達降低(P<0.05),OCN表達升高(P<0.05),TRAP5b表達升高(P>0.05);與T2DM組比較,SitA
7、組ALP表達升高(P<0.05),OCN表達升高(P<0.05),TRAP5b表達降低(P<0.05);
5.與NC組相比,T2DM組大鼠股骨TLR4、NF-κB mRNA及蛋白表達均顯著增高(P<0.05),BMP-2表達降低(P<0.05),SitA組TLR4、NF-κB mRNA及蛋白表達均增高(P>0.05),BMP-2表達降低(P>0.05);與T2DM組相比,SitA組TLR4、NF-κB表達降低(P<0.05),
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