Exendin-4對(duì)IL-1β誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討GLP-1受體激動(dòng)劑Exendin-4對(duì)細(xì)胞因子IL-1β誘導(dǎo)的小鼠胰島β細(xì)胞株MIN6細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)小鼠胰島β細(xì)胞株MIN6細(xì)胞，用不同濃度（5-40ng/ml）IL-1β作用24小時(shí)，通過(guò)噻唑蘭還原（MTT）法觀察不同濃度IL-1β作用后各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的增殖率；用Hoechst-PI熒光染色法觀測(cè)各組細(xì)胞凋亡形態(tài)， Annexin-Ⅴ-PI染色流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定各組細(xì)胞凋亡率，用G

2、riess法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)一氧化氮（NO）水平，Western Blot方法測(cè)定誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白及核因子-κB片段p65（NF-κB p65）蛋白表達(dá)水平。之后，應(yīng)用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（NAC）、NF-κB抑制劑四氫化吡咯二硫代氨基甲酸酯（PDTC）及iNOS抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）預(yù)處理并檢測(cè)以上各項(xiàng)指標(biāo)；隨后用Exendin-4（100nmol/L）預(yù)處理細(xì)胞，觀察Exendin-4對(duì)IL

3、-1β誘導(dǎo)的MIN6細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用，并深入探討Exendin-4對(duì)IL-1β誘導(dǎo)MIN6細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用是否通過(guò)抑制NF-κB-iNOS-NO信號(hào)通路而實(shí)現(xiàn)。
　　結(jié)果：MTT顯示IL-1β（5-40ng/ml）作用24小時(shí)后，MIN6細(xì)胞的增殖率明顯下降，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系；Hoechst-PI染色熒光顯微鏡及Annexin-Ⅴ-PI雙染流式細(xì)胞檢測(cè)證實(shí)隨著IL-1β濃度的增高，MIN6細(xì)胞的凋亡率亦增加；Grisee法

4、檢測(cè)結(jié)果顯示不同濃度的IL-1β處理24小時(shí)后，隨著IL-1β濃度的增加，細(xì)胞NO水平明顯增高；Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示不同濃度的IL-1β處理24小時(shí)后，隨著IL-1β濃度的增加，胞漿iNOS蛋白及胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)增多，而胞漿NF-κB p65蛋白表達(dá)變化不明顯；iNOS抑制劑L-NAME（500umol/L）、NF-κB抑制劑PDTC（100umol/L）或抗氧化劑NAC（10mmol/L）預(yù)處理均可明顯抑

5、制IL-1β誘導(dǎo)的β細(xì)胞凋亡及NO水平的增高。Exendin-4預(yù)先處理24小時(shí)后可以抑制IL-1β誘導(dǎo)的β細(xì)胞凋亡及NO水平的增高，下調(diào)胞核NF-κB p65及胞漿iNOS蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)論：（1）IL-1β可誘導(dǎo)MIN6細(xì)胞凋亡并增加細(xì)胞內(nèi)NO水平；（2）IL-1β能激活NF-κB，上調(diào)iNOS的表達(dá)；（3）GLP-1受體激動(dòng)劑Exendin-4可以顯著抑制IL-1β誘導(dǎo)MIN6細(xì)胞的凋亡，提示Exendin-4對(duì)IL