Exendin-4對(duì)代謝綜合征的療效及對(duì)胰島β細(xì)胞凋亡和線粒體的影響.pdf

1、第一部分腸促胰島素分泌素(Exendin-4)對(duì)代謝綜合征的療效
　　目的:肥胖、胰島素抵抗、胰島β細(xì)胞功能受損、高血糖、高血壓、血脂紊亂、低血清脂聯(lián)素水平等多重心血管危險(xiǎn)因素聚集是代謝綜合征(MetS)的基本特征。前期研究表明，胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）類似物腸促胰島素分泌素（Exendin-4）具有改善胰島β細(xì)胞功能，緩解肥胖、高血糖、高血脂、高血壓等多種MetS代謝紊亂的作用。本研究以此為背景，進(jìn)一步探討與評(píng)價(jià)Exen

2、din-4對(duì)MetS及T2DM的綜合治療作用。
　　研究方法:本研究為隨機(jī)、雙盲、安慰劑平行對(duì)照、多中心的臨床研究。隨機(jī)納入口服磺酰脲類和/或二甲雙胍，血糖控制不佳的2型糖尿病患者259人，按照隨機(jī)化原則，分為:1）5ug治療組;2）10ug治療組;3）5ug安慰劑組;4）10ug安慰劑組。為進(jìn)一步探討Exendin-4對(duì)Mets多種代謝紊亂的綜合治療作用，在數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析后，依據(jù)WHO(1999)代謝綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合中華醫(yī)學(xué)會(huì)

3、推薦中國(guó)人群肥胖標(biāo)準(zhǔn)BMI≥25kg/m2，進(jìn)一步將治療組患者劃分為合并Met組（MetS&T2DM組）和單純T2DM組。分別在基礎(chǔ)降糖藥物使用基礎(chǔ)上，加用腸促胰島素分泌素（Exendin-4）或安慰劑12周，評(píng)價(jià)干預(yù)12周后胰島β細(xì)胞功能、血糖、血脂、體重指數(shù)(BMI)、脂聯(lián)素以及超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）等臨床指標(biāo)的改變，探討其對(duì)MetS的綜合治療作用。
　　結(jié)果:經(jīng)過(guò)12周治療，與治療前相比，1）糖化血紅蛋白(HbA1c

4、)在5ug治療組和10ug治療組分別下降1.78％、1.69％(p＜0.01)。但5ug和10ug治療組組間相比差異未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);2)空腹胰島素(Fin)在Exendin-45ug治療組，Exendin-410ug治療組分別上升16.88％和7.00％，但治療前后及組間比較，未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);3)胰島β細(xì)胞功能指數(shù)HOMA-IS在5ug治療組較治療前改善(p＜0.05); FBCI在2個(gè)Exendin

5、-4治療組均較治療前改善(p＜0.05)，但10ug組與5ug治療組相比，未顯示出劑量效應(yīng)(p＜0.05)。4)其他臨床及生化指標(biāo)分析顯示，治療組患者經(jīng)過(guò)12周干預(yù)，BMI下降1.29-2.05kg/m2。Exendin-410ug治療組舒張壓較治療前下降9.18±0.41mmHg，與相應(yīng)的安慰劑組比較有顯著性差異(p＜0.05);總膽固醇(TCH)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-CH)水平較治療前明顯改善(p＜0.05)，其中TCH在1

6、0ug治療組和5ug治療組分別降低17.4％和16.57％，HDL-CH分別上升22.5％和15.4％，改善程度與Exendin-4呈劑量依賴性。同時(shí)脂聯(lián)素絕對(duì)值在兩組分別上升46.93％和58.45％，hs-CRP分別下降62.3％和64.9％，均較治療前明顯改善且呈劑量依賴性(p＜0.05);5)對(duì)MetS&T2DM組患者的進(jìn)一步分析顯示，經(jīng)過(guò)12周治療，MetS&T2DM組患者BMI平均下降1.8％，hs-CRP下降45.7％(p

7、＜0.01)，與T2DM患者相比有顯著性差異;HbA1c絕對(duì)值下降2.7％，與治療前相比有顯著性差異p＜0.01;MetS&T2DM患者胰島β細(xì)胞功能相對(duì)較好(p＜0.05)，其中HOMA-IS(p=0.002); FBCI(p＜0.001); Fins(p=0.001)。脂聯(lián)素升高24.48％(p＜0.01)，與T2DM組相比未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論:經(jīng)過(guò)12周治療，Exendin-4對(duì)改善磺酰脲類和/或雙胍

8、類藥物控制血糖不佳的MetS及T2DM患者的作用主要表現(xiàn)在:1）改善胰島β細(xì)胞功能;2）可以進(jìn)一步改善患者的血糖、血脂及肥胖狀態(tài);3）可以提高血清脂聯(lián)素水平以及降低血清超敏c反應(yīng)蛋白水平，說(shuō)明Exendin-4對(duì)代謝綜合征各組分具有綜合調(diào)控作用和潛在的減少大血管及微血管并發(fā)癥的相關(guān)危險(xiǎn)因素的作用。對(duì)于合并MetS的2型糖尿病患者的肥胖及低度炎癥的改善作用尤為突出，對(duì)MetS具有綜合治療作用。
　　第二部分 Exendin-4對(duì)胰島

9、β細(xì)胞凋亡和線粒體的影響
　　目的:超氧化物(ROS)的產(chǎn)生及其對(duì)線粒體內(nèi)膜的損害是導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生凋亡的重要原因，是糖毒性、脂毒性等多種損害發(fā)生的最后共同通路，也是T2DM以及MetS發(fā)生、發(fā)展的重要病理生理改變。利用小鼠胰島β細(xì)胞瘤Min6細(xì)胞株觀察胰島β細(xì)胞凋亡與線粒體功能障礙的關(guān)系，初步探討Exendin-4對(duì)2型糖尿病胰島β細(xì)胞功能的保護(hù)作用與胰島β細(xì)胞線粒體功能及磷脂酶A2(iPLA-2)之間的關(guān)系，為2型糖尿病的治療提供

10、更多理論基礎(chǔ)。
　　研究方法:高糖培養(yǎng)Min6細(xì)胞株，以叔丁基過(guò)氧化氫(t-BHP)和過(guò)氧化氫(H2O2)為凋亡誘導(dǎo)劑，以不同濃度及時(shí)間干預(yù)Min6細(xì)胞，建立胰島β細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的細(xì)胞凋亡模型。在此基礎(chǔ)上，于誘導(dǎo)凋亡前，加用100uM Exendin-4共培養(yǎng)48小時(shí)，重復(fù)檢測(cè)胰島β細(xì)胞凋亡率的改變(Annexin-Ⅴ-FITC-PI染色流式細(xì)胞技術(shù)和DNALadder)，同時(shí)，利用ELISA方法檢測(cè)凋亡因子Caspase3、C

11、aspase8的活性;酶標(biāo)儀檢測(cè)線粒體膜電位丟失及ROS產(chǎn)生水平;Western-blot檢測(cè)線粒體蛋白細(xì)胞色素c及Smac/DLAMO在胞漿及線粒體表達(dá)的改變。同時(shí)，進(jìn)一步利用Western-blot技術(shù)檢測(cè)線粒體及胞漿iPlA2、cPLA2表達(dá)水平，以及RT-PCR等技術(shù)檢測(cè)iPLA2 RNA在干預(yù)前后的表達(dá)改變;檢測(cè)線粒體脂肪酸氧化程度與凋亡發(fā)生之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:隨著干預(yù)時(shí)間和t-BHP以及H2O2濃度的增加，Min6

12、細(xì)胞發(fā)生不同比例的凋亡，線粒體膜電位丟失(p＜0.05)、ROS產(chǎn)生增加(p＜0.05)、細(xì)胞色素c、Smac/DLAMO從線粒體內(nèi)膜釋放，凋亡因子Caspase3，8活性上升(p＜0.05)。同時(shí)Westen-blot結(jié)果顯示，線粒體iPLA2表達(dá)降低。經(jīng)Exendin-4干預(yù)， Min6細(xì)胞的凋亡率下降(p＜0.05)，線粒體膜電位丟失減少，ROS產(chǎn)生增加(p＜0.05)，線粒體細(xì)胞色素c以及Smac/DLAMO釋放減少;iPLA2