降糖藥物二甲雙胍和Exendin-4對(duì)骨代謝的影響.pdf

1、目的：探討降糖藥物二甲雙胍、exendin-4對(duì)原代骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化的影響及其可能作用機(jī)制。
　　 方法：采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離純化大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞鋪板后約90％匯合時(shí)加入成骨誘導(dǎo)液，實(shí)驗(yàn)組同時(shí)加入降糖藥物（二甲雙胍或exendin-4），分別于不同培養(yǎng)時(shí)間收集細(xì)胞采用Real-time PCR方法檢測(cè)成骨標(biāo)志基因的表達(dá)，ALP活性采用蛋白定量方法進(jìn)行驗(yàn)證，并進(jìn)行ALP染色。礦化結(jié)節(jié)采用茜素紅染色。成脂誘導(dǎo)

2、待細(xì)胞完全匯合后加入成脂誘導(dǎo)液，實(shí)驗(yàn)組同時(shí)加入降糖藥物（二甲雙胍或exendin-4），于14天收集細(xì)胞采用Real-time PCR方法檢測(cè)成脂標(biāo)志基因的表達(dá)，脂滴進(jìn)行油紅O染色。Western blot方法檢測(cè)Wnt通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)及其磷酸化水平的變化。取原代大鼠成骨細(xì)胞，細(xì)胞約90％匯合后加入成骨誘導(dǎo)液，實(shí)驗(yàn)組同時(shí)加入二甲雙胍，ALP活性采用蛋白定量方法，茜素紅染礦化結(jié)節(jié)，并分別于不同培養(yǎng)時(shí)間收集細(xì)胞檢測(cè)成骨標(biāo)志基因的表達(dá)。<

3、br>　　 結(jié)果：在骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中晚期，二甲雙胍顯著提高成骨細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)礦化結(jié)節(jié)的形成，并抑制成脂分化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，以及脂肪細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成。同時(shí)，在原代成骨細(xì)胞，二甲雙胍具有促進(jìn)前成骨細(xì)胞向成熟成骨細(xì)胞分化及礦化的作用。隨著二甲雙胍作用時(shí)間的延長，β-catenin在胞漿內(nèi)穩(wěn)定聚集。Exendin-4顯著提高BMSCs成骨分化早期ALP活性，Runx2以及Col-Ι的表達(dá)，抑制成脂分化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，并抑制脂