二甲雙胍對前列腺癌的抑制效應.pdf

1、目的:通過研究IL-6對前列腺癌細胞增殖、遷移和生存力的影響，探索IL-6在前列腺癌進展中的作用機制;同時研究二甲雙胍對IL-6過表達的前列腺癌細胞株增殖、遷移和細胞周期的影響，探索二甲雙胍抑制前列腺癌發(fā)生發(fā)展的相關分子機制。
　　方法:(1)運用慢病毒載體轉染技術，構建IL-6過表達的前列腺癌LNCaP細胞株，利用激光共聚焦顯微鏡觀察細胞綠色熒光的表達以明確慢病毒轉染情況，在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化;運用ELISA檢測IL-

2、6表達水平;運用MTT技術比較IL-6過表達LNCaP細胞（LNCaP-IL-6）與空病毒載體轉染的LNCaP細胞(LNCaP-ctr)在比卡魯胺處理不同時間段的生存率;運用western blot技術比較IL-6過表達的LNCaP細胞和正常LNCaP細胞Twist和E-cadherin蛋白表達;運用RT-PCR技術比較上述蛋白的基因轉錄水平。(2)加入不同濃度的二甲雙胍刺激，運用MTT實驗檢測不同濃度的二甲雙胍對正常LNCaP和IL-

3、6過表達的LNCaP細胞生存率的影響，并選取最佳工作濃度;流式細胞技術檢測細胞周期;將LNCaP-IL-6細胞分為二甲雙胍處理組與非處理組，運用劃痕實驗觀察細胞遷移，Western blot技術檢測Twist和E-cadherin蛋白表達水平，RT-PCR技術檢測上述蛋白基因轉錄水平。
　　結果:(1) LNCaP-IL-6和LNCaP-ctr細胞在激光共聚焦顯微鏡下均呈現出明顯的綠色熒光;在倒置顯微鏡下觀察顯示LNCaP-IL-

4、6細胞形態(tài)呈紡錘形和星狀轉變，細胞排列散亂，連接減少，而LNCaP-ctr細胞排列緊密，呈鵝卵石狀，與正常LNCaP形態(tài)無明顯差別;LNCaP-IL-6細胞培養(yǎng)液中IL-6表達水平達到5802±128.09 pg/mL，而LNCaP-ctr細胞和正常LNCaP分泌量分別為1.14±0.19 pg/mL和1.98±0.84pg/mL; MTT檢測結果顯示出LNCaP-IL-6細胞的增殖速度及生存力明顯優(yōu)于LNCaP-ctr細胞，P＜0.0

5、5; LNCaP-IL-6細胞中Twist mRNA和蛋白表達水平均高于LNCaP-ctr，而E-cadherin mRNA和蛋白表達水平均低于LNCaP-ctr細胞。(2)二甲雙胍對LNCaP-IL-6細胞的抑制作用小于對LNCaP-ctr細胞的抑制作用，兩者生存率相比P＜0.05，差異具有統計學意義;根據MTT結果，選取2mM的二甲雙胍為最適作用濃度;流式細胞術檢測結果顯示二甲雙胍阻滯LNCaP-ctr和LNCaP-IL-6細胞周期

6、的S期;加入2mM二甲雙胍處理的LNCaP-IL-6細胞的遷移明顯受到抑制。二甲雙胍處理組的LNCaP-IL-6細胞Twist表達水平明顯低于非處理組，而E-cadherin表達水平較非處理組則明顯升高;加入2mM二甲雙胍處理后，比較兩組細胞中Twist和E-cadherin mRNA的含量，二甲雙胍處理組Twist mRNA相對含量較非處理組顯著下降，而E-cadherin mRNA水平較非處理組明顯升高。
　　結論:(1) I