二甲雙胍抑制前列腺癌細胞的遷移和侵襲并增加對紫杉醇敏感性的研究.pdf

1、背景:
　　前列腺癌(Prostate cancer, PCa)在歐美許多國家是男性最常見的惡性腫瘤之一，占男性癌癥死因的第二位。前列腺癌的發(fā)病率在全球分布不平衡，我們國家的發(fā)病率雖然低于西方國家，但是近年來，隨著人口老齡化和生活條件的改善，發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢。從微觀上講，和大多數(shù)腫瘤一樣，前列腺癌發(fā)病的病因非常復雜，是一個涉及多基因的過程。其中，染色體畸變起主導作用，原癌基因的激活與抑癌基因的失活也起到重要作用。從宏觀上講，前列

2、腺癌的發(fā)病受到年齡、種族和家庭遺傳的影響，同時也與激素、營養(yǎng)有關(guān)。在前列腺癌的治療方面，由于前列腺癌的生長發(fā)展都具有雄性激素依賴性，所以在早期都采用雄激素阻斷療法（androgen deprivation therapy, ADT），且治療效果不錯，但是經(jīng)過一段時間的雄激素剝奪療法后，幾乎所有的前列腺癌都轉(zhuǎn)化成雄性激素非依賴的前列腺癌(androgen-independent prostate cancer, AIPC)，導致治療困難，

3、以及治療效果欠佳，患者預后不良。根治性前列腺切除術(shù)與局部照射對前列腺癌早期患者是兩種有效的治療方法，如果輔助以內(nèi)分泌治療則有益于提高療效和存活率。
　　二甲雙胍是一種Ⅱ型糖尿病患者口服的一線類降糖藥物。二甲雙胍降低血糖的機制可總結(jié)為:通過降低肝葡萄糖的產(chǎn)生來降低血糖水平;通過增加骨骼肌對葡萄糖的攝取和利用降血糖;以及通過降低外周組織對胰島素的抵抗和抑制肝糖異生。其最常見的副作用是胃腸道反應，最嚴重的毒副作用是乳酸性酸中毒。二甲雙胍

4、具有廉價、安全、不良反應少、以及患者耐受性好等特性。自從2005年Evans等首次研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍能降低糖尿病患者的腫瘤發(fā)生率后，近年來，二甲雙胍已經(jīng)作為潛在的抗癌藥物成為研究的熱點。目前，大量文獻報道均證實，二甲雙胍在多種不同類型的腫瘤中有抗癌作用，其中包括前列腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、鼻咽癌、結(jié)腸癌和惡性黑色素瘤等。在前列腺癌中，有研究顯示二甲雙胍可抑制前列腺癌細胞系的增殖，誘導其發(fā)生凋亡和阻滯細胞周期在特定的時期及其作用的

5、機制。還有部分研究表明，二甲雙胍與脂聯(lián)素、2DG（2-Deoxyglucose，脫氧葡萄糖）和比卡魯胺的協(xié)同抗腫瘤作用。但是到目前為止，二甲雙胍對前列腺癌細胞的遷移、侵襲，以及與EMT(Epithelial mesenchymal transform，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化)和對化療藥物紫杉醇的增效作用尚不清楚。
　　目的:
　　本課題應用體外實驗模型，研究二甲雙胍對前列腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力的影響，以及對前列腺癌細胞化療敏感

6、性的影響，以期為前列腺癌的臨床治療提供新的實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1、應用MTS的方法檢測二甲雙胍，以及二甲雙胍和紫杉醇聯(lián)合用藥對前列腺癌細胞增殖作用的影響。
　　2、應用劃痕實驗和transwell侵襲小室檢測二甲雙胍對前列腺癌細胞系遷移和侵襲能力的影響。
　　3、應用Western blot的方法在前列腺癌中檢測二甲雙胍對EMT相關(guān)標志性maker的影響。
　　4、應用Western blot的方法

7、在前列腺癌中檢測二甲雙胍抑制腫瘤細胞生長和遷移，以及增加紫杉醇敏感性的相關(guān)的信號通路。
　　結(jié)果:
　　MTS的結(jié)果顯示二甲雙胍抑制前列腺癌親本細胞及其耐藥細胞的增殖，并呈時間及濃度依賴關(guān)系。二甲雙胍與紫杉醇聯(lián)合用藥的MTS結(jié)果表明除了PC3細胞之外，紫杉醇組與紫杉醇聯(lián)合二甲雙胍組相比，紫杉醇聯(lián)合二甲雙胍組的細胞增殖抑制作用更明顯，提示二甲雙胍可能能夠提高細胞對紫杉醇的敏感性。劃痕實驗和transwell侵襲實驗結(jié)果顯示，加

8、藥組細胞在15小時和24小時平均遷移距離明顯減少(P＜0.05)，在相應的時間段后DU145，DU145-TxR，PC3，PC3-TxR的侵襲細胞的數(shù)量明顯減少(P＜0.05)。Western blot的方法檢測結(jié)果顯示二甲雙胍逆轉(zhuǎn)前列腺癌的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化而影響其生物學功能。信號通路蛋白檢測發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍處理后，DU145，PC3細胞的P-AMPK的表達增加，AMPK總蛋白水平不變，而DU145-TxR和PC3-TxR的P-AMPK和A