免疫學及分子生物學在慢性肺曲霉病的診斷價值.pdf

1、第一部分免疫學檢測曲霉抗原及抗體在慢性肺曲霉病的診斷價值
　　目的：
　　評價免疫學檢測曲霉抗原及抗體在診斷慢性肺曲霉病人群中的診斷價值。
　　方法：
　　收集2016年1月至2017年1月在廣州醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院和廣州市胸科醫(yī)院呼吸科住院符合慢性肺曲霉?。–PA）診斷標準患者的臨床資料，同時收集患者血清、肺泡灌洗液（BALF），排除嚴重的免疫抑制的患者（例如艾滋病，中性粒細胞減少或器官移植術后），分別測定血清

2、（1,3）-β-D葡聚糖（BDG），半乳甘露聚糖（GM），煙曲霉特異性IgG抗體，煙曲霉特異性IgM抗體，BALF-GM的水平，比較各種免疫學方法與診斷的一致性。比較各種免疫學診斷方法在CPA患者的敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值。根據 ROC曲線確定各免疫學診斷方法的最佳臨界值。評價免疫學檢測是否對患者治療效果的評估是否有價值。
　　結果：
　　1、共納入CPA組79例，對照組74例。CPA組分類：簡單型曲霉球（SA

3、）10例（12.66％），曲霉結節(jié)（NA）2例（2.53%），亞急性侵襲性曲霉病/慢性壞死性肺曲霉病35例（SAIA/CNPA）（44.30%），慢性空洞型肺曲霉（CCPA）28例（35.44%），慢性纖維化肺曲霉（CFPA）4例（5.06%）。CPA組63例確診、16例臨床診斷。CPA病例組平均年齡51.34±14.80歲，其中男性57例（72.15%），女性22例（27.85%）。對照組平均年齡55.23±14.57歲，男性48例（

4、64.68%），女性26例（35.14%），CPA組最常見的基礎疾病是支氣管擴張（67.09%）和肺結核（65.82%）。咯血最常見的癥狀（44例，55.70%），影像學表現以空洞（69.62%）、曲霉球（39.24%）為主（P＜0.05）。
　　2、CPA組和對照組之間血清BDG，血清GM，煙曲霉特異性IgM，煙曲霉特異性IgG和BALF-GM均有顯著差異（P＜0.05）。血清G試驗、血清GM、血清煙曲霉IgM抗體、血清煙曲霉I

5、gG抗體、BALF-GM的靈敏度、特異度分別為49.36%、44.30%、17.72%、32.91%、45.57%和91.89%、98.64%、94.59%、90.54%、89.74%。單項診斷時，BALF-GM對CPA診斷價值較好，Youden指數為0.59（截點≥0.85μg/L），AUC=0.94（95%CI0.89-0.99），最佳臨界值為0.44μg/L(Sen0.98， Spe0.82)。
　　3、血清BDG、GM在C

6、PA組的各分型的靈敏度與總病例組相似。煙曲霉特異性IgM抗體在CPA各分型的靈敏度均低。BALF-GM（截點≥0.65μg/L）在SA、CCPA、SAIA/CNPA、CFPA中的靈敏度為90.00%、71.43%、42.86%、75.00%。煙曲霉特異性IgG抗體（截點≥80AU/ml）在SA、CCPA、SAIA/CNPA、CFPA的靈敏度分別為60.00%、57.14%、42.86%、50.00%。
　　4、聯合檢測：血清 BD

7、G、GM、煙曲霉特異性 IgG抗體并聯的靈敏度、特異度為76.19%、85.14%，血清BDG、GM、煙曲霉特異性IgG抗體、煙曲霉特異性 IgM抗體并聯的靈敏度和特異度分別為84.13%、78.38%。血清GM并聯BALF-GM在CPA中的靈敏度、特異度為76.19%、93.24%。
　　5、在抗曲霉治療過程中，治療有效的患者煙曲霉 IgG抗體水平下降，而該抗體上升可能提示預后不良。
　　結論：
　　1、免疫學檢測在

8、CPA患者有一定診斷價值。BALF-GM有較好的診斷價值，血清BDG、GM在CPA患者的靈敏度偏低，可能需要在該人群中下調診斷截點。
　　2、免疫學檢測在不同CPA分類可能有不同診斷價值?？乖⒖贵w聯合檢測可減少CPA漏診，血清學最佳組合為血清BDG/GM/煙曲霉特異性IgG抗體聯合檢測。BALF-GM聯合血清GM可提高診斷靈敏度。
　　3、煙曲霉特異性IgM抗體在CPA診斷價值不高，煙曲霉特異性IgG抗體在不同分類CPA中

9、診斷價值不相同，下調截點可調高靈敏度。煙曲霉特異性IgG抗體動態(tài)監(jiān)測有助于CPA患者的預后評估。
　　第二部分熒光定量PCR檢測肺泡灌洗液中曲霉DNA在慢性肺曲霉病的診斷價值
　　目的:
　　評價熒光定量PCR檢測肺泡灌洗液中曲霉DNA在慢性肺曲霉病的診斷價值。
　　方法:
　　患者入選標準同第一部分，收集患者的肺泡灌洗液（BALF），離心后取沉渣用于DNA提取。使用玻璃珠震蕩+試劑盒提取BALF的DNA，

10、使用熒光定量PCR（Taqman探針法）對肺泡灌洗液沉渣提取的DNA進行檢測（BALF-QPCR）。
　　結果:
　　本實驗收集140份肺泡灌洗液，按單次樣本計算共128例，CPA組79例，對照組49例。其中CPA組63例確診，16例臨床診斷。BALF-QPCR在CPA組的靈敏度85.15%，特異度89.80%，陽性預測值96.63%，陰性預測值70.59%， Youden指數0.79，AUC=0.87（95%CI0.80-