乙?；D(zhuǎn)移酶抑制劑C646對胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及作用機(jī)制研究.pdf

1、胃癌（gastric cancer，GC）是最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率居世界惡性腫瘤的第三位。隨著醫(yī)療水平的不斷發(fā)展，胃癌的死亡率有所下降，但情況仍不容樂觀，進(jìn)展期胃癌的5年生存率僅有10-25％。因此，科研工作者需深入研究胃癌的具體分子機(jī)制，找到新的、更有效的治療胃癌的藥物。乙?；D(zhuǎn)移酶(histoneacetyltransferases，HAT)p300和CBP被發(fā)現(xiàn)對于細(xì)胞周期、DNA合成、細(xì)胞分化均發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。很多

2、研究表明，在前列腺癌、黑色素瘤等惡性腫瘤中，抑制p300/CBP的功能后，可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。C646是p300/CBP的小分子抑制劑，近年來被發(fā)現(xiàn)在很多腫瘤細(xì)胞中具有抑瘤活性。但其對胃癌細(xì)胞的作用很少有人研究。若能深入研究p300/CBP在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及C646對胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲、遷移等生物學(xué)功能的影響及具體的分子機(jī)制，很有可能找到胃癌治療的新靶點(diǎn)及針對該靶點(diǎn)的有效藥物。
　　目的：

3、>　　檢測乙?；D(zhuǎn)移酶p300/CBP在正常胃黏膜細(xì)胞GES-1及5種胃癌細(xì)胞KATOⅢ、SGC-7901、BGC-823、MKN45、MGC-803中的表達(dá)情況;將p300/CBP的小分子抑制劑C646作用于胃癌細(xì)胞后，觀察C646對胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力、細(xì)胞周期和凋亡的影響;深入研究C646對胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能影響的可能的分子機(jī)制。
　　方法：
　　運(yùn)用實時熒光定量PCR技術(shù)和Western Blot法檢測正常

4、胃黏膜細(xì)胞GES-1和5種胃癌細(xì)胞（KATOⅢ、SGC-7901、BGC-823、MKN45和MGC-803）中p300/CBPmRNA水平和蛋白水平的表達(dá)情況。
　　將乙?；D(zhuǎn)移酶p300/CBP抑制劑C646作用于正常胃黏膜細(xì)胞GES-1和5株胃癌細(xì)胞KATOⅢ、SGC-7901、BGC-823、MKN45和MGC-803后，通過細(xì)胞增殖檢測試劑盒CCK-8檢測p300/CBP被抑制后對于6種細(xì)胞增殖能力的影響;通過流式細(xì)胞儀

5、檢測p300/CBP的功能被抑制后對各種細(xì)胞周期和凋亡的影響;通過劃痕實驗、transwell實驗觀察抑制p300/CBP以后對5株胃癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。
　　通過熒光定量PCR技術(shù)和Western Blot法檢測C646處理胃癌細(xì)胞后，MET、AKT、p-AKT、Erk、p-Erk、BCL2、Cyclin D1、MMP7和MMP9等相關(guān)信號分子的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　熒光定量PCR和Western Bl

6、ot的結(jié)果顯示，在5種胃癌細(xì)胞中p300/CBP的mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)均明顯高于正常的胃黏膜細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　將不同濃度的乙?；D(zhuǎn)移酶p300/CBP抑制劑C646作用于正常胃黏膜細(xì)胞及5種胃癌細(xì)胞后，通過CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與DMSO對照組相比，6種細(xì)胞的增殖均可被C646抑制（P＜0.05），以MKN45和MGC-803細(xì)胞的增殖抑制效果最為明顯，且C646對胃癌細(xì)增

7、殖的抑制較正常胃黏膜細(xì)胞相比更加明顯。將C646作用于5種胃癌后，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和凋亡的變化，發(fā)現(xiàn)與DMSO對照組相比較，C646處理組的胃癌細(xì)胞出現(xiàn)明顯的細(xì)胞周期阻滯（P＜0.01）和細(xì)胞凋亡（P＜0.05）。將C646作用于5種胃癌后，采用劃痕實驗、transwell實驗觀察細(xì)胞的遷移和侵襲情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)除SGC-7901外，其他4株胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力均明顯下降（P＜0.05）。
　　C646處理5種胃癌細(xì)胞后

8、進(jìn)行Western Blot檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與DMSO組相比較，C646處理組的胃癌細(xì)胞MET、AKT、p-AKT等分子的蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)。
　　結(jié)論：
　　乙?；D(zhuǎn)移酶p300/CBP在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于正常的胃黏膜細(xì)胞。用乙?；D(zhuǎn)移酶抑制劑C646抑制p300/CBP的功能后，胃癌細(xì)胞的增殖能力、細(xì)胞周期進(jìn)程以及細(xì)胞的遷移和侵襲能力均被明顯抑制，而細(xì)胞凋亡則顯著增加。并且，C646處理胃癌細(xì)胞后，MET、AKT、