擬南芥藍(lán)光雙突變體蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、植物功能基因組學(xué)研究在本世紀(jì)發(fā)展十分迅速，然而在轉(zhuǎn)錄水平提供的基因表達(dá)的信息并不能完全確定一個基因的功能。因?yàn)榛蛑皇沁z傳信息的攜帶者，蛋白質(zhì)才是生命功能的真正體現(xiàn)者，且在從基因到蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄及翻譯過程中，在不同機(jī)體，不同組織，甚至不同階段都有不同[1]。所以廣范圍研究蛋白質(zhì)表達(dá)和功能模式的蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)成為功能基因組學(xué)的重要領(lǐng)域。用于蛋白質(zhì)分離的雙向凝膠電泳技術(shù)是蛋白質(zhì)組研究的核心，而鑒定技術(shù)則是蛋白質(zhì)組技術(shù)的支柱。 植物的生

2、長與發(fā)育的調(diào)控是通過蛋白質(zhì)的表達(dá)得以實(shí)現(xiàn)，而調(diào)控受到光照因素的重要影響。雖然高等植物利用可見光進(jìn)行光合作用，但是它們利用眾多的光受體感受更寬波長的光并做出反映。這些光受體調(diào)整控制著種子的萌發(fā)、植物的生物鐘、以及植物生長發(fā)育等[78]。已知CRY介導(dǎo)的藍(lán)光調(diào)節(jié)植物的光形態(tài)建成反應(yīng)，抑制下胚軸伸長，促進(jìn)子葉伸展及調(diào)節(jié)開花等功能，因此進(jìn)一步研究植物藍(lán)光信號途徑具有重要意義。本試驗(yàn)對雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。對植物的蛋白的提取采用冷

3、丙酮和三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)，在蛋白質(zhì)溶解過程中改進(jìn)的蛋白質(zhì)裂解液(加入硫脲)，使蛋白的溶解效率提高。分離得到了擬南芥藍(lán)光受體雙突變體cry1cry2與co1-4的蛋白質(zhì)組高重復(fù)性的雙向凝膠圖譜。通過斑點(diǎn)配比，獲得了兩種材料的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)圖譜，并選取51個變化明顯的蛋白質(zhì)點(diǎn)用原位酶解，抽提蛋白質(zhì)片段進(jìn)行MAKDI-TOF-ToF-MS質(zhì)譜分析，利用肽質(zhì)量指紋圖數(shù)據(jù)在數(shù)據(jù)庫中檢索，其中包括普通反應(yīng)酶、過氧化物酶、轉(zhuǎn)錄因子、綁定蛋白、分子伴侶蛋