石蠶st突變體近等基因系與其回交親本的蛋白質(zhì)組學差異分析.pdf

1、家蠶(Bombyxmori)在我國已有五千多年的飼養(yǎng)歷史,有著重要的經(jīng)濟價值。它不僅是鱗翅目昆蟲的典型代表,同時也是重要的模式生物。隨著家蠶基因組測序的完成,國內(nèi)外的研究重點將逐漸轉向功能基因組的研究。而蛋白質(zhì)是基因功能的實施者,是生命過程及現(xiàn)象的直接體現(xiàn)者,沒有對蛋白質(zhì)進行深入的分析,就無法了解到生物學問題發(fā)生的本質(zhì)。
　　新突變是遺傳學研究的重要對象,也是功能基因研究的主要材料,遺傳學發(fā)展的眾多成果取得都得益于對突變基因的研究

2、。家蠶有四百多種突變品種,石蠶st是其中比較典型的體型突變之一。其最主要的特征就是表皮緊繃,身體硬實,各環(huán)節(jié)后緣腫脹,且這種性狀在5齡盛食期至上簇前表現(xiàn)尤為明顯。
　　目前雙向凝膠電泳技術聯(lián)合質(zhì)譜技術是蛋白質(zhì)組學研究中應用最為廣泛的分析方法,這恰好為突變材料的研究提供了良好的機會,利用其原理簡單,操作便捷的研究特點,通過比較突變蠶體與正常蠶體的組織樣品,可以找出與突變基因功能相關的關鍵蛋白,充分地闡明突變基因的遺傳基礎,擴大研究利

3、用。
　　本文首先以家蠶C108為回交親本構建了石蠶st近等基因系C8,通過研究C8與C108的差異性來反應石蠶st突變體與野生型差異。比較C8與C108表皮的幾丁質(zhì)含量,發(fā)現(xiàn)C8表皮組織中幾丁質(zhì)含量比C108中稍低,但差異并不顯著,幾丁質(zhì)含量與這種突變性狀的形成關系還需進一步研究。其次本文運用蛋白質(zhì)雙向電泳技術比較分析了C8與C108的表皮組織、中腸組織、脂肪體組織的蛋白質(zhì)構成差異,利用軟件分析挑選了39個蛋白進行基質(zhì)輔助激光解

4、吸飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS),成功鑒定31個蛋白,其中以酶類蛋白為主,還包括結構蛋白、轉錄因子、熱激蛋白、糖蛋白、轉運蛋白等等,另外還鑒定到5個功能未知蛋白。
　　為了對雙向電泳結果進行驗證,本文從已鑒定到的差異蛋白中挑選GSTd2、GSTs1、Pglym、Tpi、Pdi5個酶類蛋白基因,以家蠶RpS3基因為內(nèi)參,利用Real-timePCR分析這5個酶類基因在C8與C108的5齡第5天幼蟲表皮中的相對表達水平,結果