miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系的研制與開(kāi)發(fā).pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系的研制與開(kāi)發(fā)姓名：白雪申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：法醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：叢斌20090401中文摘要310／3130基因分析儀對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，Genemapper32軟件分析結(jié)果；根據(jù)不同引物濃度√M92濃度、不同退火溫度、不同循環(huán)次數(shù)下復(fù)合擴(kuò)增的效果對(duì)復(fù)合體系進(jìn)行優(yōu)化。⑧根據(jù)群體遺傳學(xué)研究的結(jié)果，應(yīng)用分子克隆技術(shù)構(gòu)建各基因座等位基因標(biāo)準(zhǔn)分型物，并根據(jù)國(guó)際法醫(yī)遺傳學(xué)會(huì)(internationals

2、ocietyofforensicgenetics，ISFG)推薦的命名原則對(duì)各等位基因進(jìn)行命名，同時(shí)根據(jù)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析編制出miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系的基因分型模版。④對(duì)該熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系的靈敏度、種屬特異性、可重復(fù)性及對(duì)陳舊、腐敗降解檢材DNA的檢測(cè)能力進(jìn)行了研究；用實(shí)際案例進(jìn)行驗(yàn)證，并與商品化試劑盒進(jìn)行比較。結(jié)果：①成功構(gòu)建了兩個(gè)熒光標(biāo)記miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系，其中復(fù)合體系1包含D10S1248，D2S441，D1S1

3、677和D9S2157四個(gè)基因座，復(fù)合體系2包含D9S1122，D10S1435，D12ATA63，D2S1776和Amelogenin五個(gè)基因座。應(yīng)用該體系對(duì)300份中國(guó)漢族無(wú)關(guān)個(gè)體樣本進(jìn)行檢驗(yàn)分析，經(jīng)群體遺傳學(xué)計(jì)算，該系統(tǒng)的累積個(gè)人識(shí)別率和非父排除率分別為O99999999228和098547130732。②本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的兩個(gè)復(fù)合擴(kuò)增體系條件易于優(yōu)化，采用國(guó)產(chǎn)Taq酶進(jìn)行擴(kuò)增，即可得到滿意的擴(kuò)增產(chǎn)物和分型結(jié)果。相對(duì)于國(guó)外昂貴的試劑盒，

4、它是一種成本低廉但效率高的miniSTR基因座復(fù)合擴(kuò)增體系。③應(yīng)用分子克隆技術(shù)，對(duì)9個(gè)基因座的64個(gè)等位基因進(jìn)行克隆，經(jīng)過(guò)調(diào)整各基因座等位基因的含量，構(gòu)建出了兩組復(fù)合體系的等位基因標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照體系。根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和測(cè)序的命名結(jié)果設(shè)置基因分析命名參數(shù)指標(biāo)，建立了兩個(gè)熒光標(biāo)記miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系的基因分型命名模版，可以對(duì)樣本準(zhǔn)確分型。④法醫(yī)應(yīng)用性研究證明該體系具有良好的種屬特異性，除恒河猴在Amelogenin出現(xiàn)色譜峰外，其余8個(gè)基因座在

5、8種常見(jiàn)動(dòng)物中均無(wú)特異性產(chǎn)物峰出現(xiàn)；對(duì)同一個(gè)體的不同組織檢測(cè)結(jié)果一致；在0125ngDNA模板量的情況下，可對(duì)9個(gè)基因座進(jìn)行正確分型；通過(guò)對(duì)陳舊樣本和降解模型的研究證明，該體系對(duì)降解檢材有良好的擴(kuò)增效果，較常規(guī)大片段STR試劑盒擴(kuò)增成功率高，可用于常規(guī)試劑盒擴(kuò)增失敗的降解樣本的分型；通過(guò)8個(gè)實(shí)際案例證明，該體系能用于法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中，結(jié)果與鑒定結(jié)論一致。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功的構(gòu)建了適合中國(guó)漢族人群的兩個(gè)熒光標(biāo)記miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系。該熒光