5個miniSTR基因座位點復合擴增體系的檢驗和鑒定.pdf

1、研究背景及目的：
　　短串聯(lián)重復序列(Short Tandem Repeat，STR)，也叫微衛(wèi)星DNA或簡單重復序列，廣泛存在于真核生物基因組中。其核心序列為2-6 bp，具有分布廣泛、片段短、易于檢測、遺傳信息含量大、遺傳多態(tài)性高等特征。STR分型技術作為第二代遺傳標記的主要代表，已經廣泛運用于法醫(yī)物證領域，是親權鑒定、個體識別最常用、最有效的手段。尤其profilerPlus、Identifiler、powerPlex16等

2、商品化STR復合擴增試劑盒及多重熒光檢測技術的廣泛應用，使得STR分型技術應用達到了一個全新的高度。目前商品化的常規(guī)STR復合擴增試劑盒STR基因座位點主要包括CODIS(combined DNA index system)系統(tǒng)的13個核心基因座位點及D2S1338、D19S433、PentaD，PentaE等常染色體STR基因座位點。其中大部分的基因座位點擴增產物片段的長度都超過200bp甚至達到500bp。在復雜多變的自然環(huán)境中，尤

3、其是潮濕、高溫、紫外線、暴曬、微生物、強酸等環(huán)境因素會使生物檢材中的DNA損傷，雙鏈斷裂，DNA分子長度變短。對這種降解的生物檢材進行常規(guī)STR分型檢驗，就容易出現(xiàn)大片段STR基因座位點等位基因缺失，導致分型失敗。極大的限制了STR分型技術在微量、降解生物檢材中的運用，從而導致一些重要的生物檢材在案件的偵破中的價值未能得到充分的體現(xiàn)，不利于案件的快速偵破。為了彌補常規(guī)STR檢測技術的運用缺陷，Bulter等在原來的STR分型技術基礎上，

4、通過重新設計引物，使正反向引物盡可能移向核心重復序列，減小擴增產物片段的長度，同時保持原STR基因座位點的遺傳多態(tài)性和原有的分型結果不變，2003年該項技術被正式命名為mini STR分型技術。此后，各國學者陸續(xù)開始從事mini STR的相關研究。2006年，美國AB公司研制開發(fā)出第一個minifiler商品試劑盒，但是該試劑盒只包括8個mini STR基因座位點，由于基因座位點偏少，在個體識別等運用中存在個體識別率不足的缺點。為此，本

5、實驗通過篩選不同染色體上的5個mini STR基因座位點，建立新的復合擴增體系及試劑盒，作為minifiler等商品試劑盒的有效補充，通過與其聯(lián)合運用，提高微量、降解生物檢材的STR基因座位點分型成功率從而達到個體識別的目的。
　　方法：
　　在前期通過篩選并建立5個mini STR基因座位點復合擴增體系及重慶地區(qū)人群等位基因標準物的基礎上，參照美國DNA分析方法技術工作組(TWGDAM)的指導方案，對本實驗多重熒光復合擴增

6、系統(tǒng)進行靈敏度、準確度、遺傳穩(wěn)定性、種屬特異性、組織特異性檢驗，對不同提取方法對分型結果的影響、以及在人工組織降解模型、腐敗組織中的運用等進行研究。旨在評價本實驗多重熒光復合擴增體系在法醫(yī)學領域中的應用價值。
　　結果：
　　該復合擴增體系的靈敏度檢測域為25pg模板DNA；該復合擴增體系具有較高的種屬特異性和組織同一性；通過對24例實際檢案的對比研究和分析，該體系能夠有效用于個體識別和親權鑒定等實際檢案；通過對該體系的5個

7、mini STR基因座位點的聚丙烯酰胺凝膠電泳結果與復合擴增分型結果對比分析發(fā)現(xiàn)本復合擴增體系分型結果是準確的；通過不同DNA提取方法對同-DNA樣本的擴增分型結果對比研究發(fā)現(xiàn)，采用不同的方法提取DNA，對本體系5個mini STR基因座位點的分型結果無影響；通過對人工組織降解模型和腐敗組織的研究發(fā)現(xiàn)，該體系對降解檢材具有較好的擴增效果，可用于常規(guī)STR商品試劑盒復合擴增失敗的降解檢材的分型，
　　結論：
　　本次實驗建立的

8、5個熒光標記mini STR基因座位點復合擴增體系分型結果準確、穩(wěn)定性好，靈敏度高，不同DNA提取方法對miniSTR基因座位點的分型結果無影響，種屬特異性及組織同一性良好，對于分析微量、降解生物檢材DNA的分型成功率較常規(guī)STR商品試劑盒明顯提高，可用于法醫(yī)學領域親權鑒定及個人識別，尤其對微量、降解生物檢材的DNA分型具有較高的應用價值，為開發(fā)國產的miniSTR基因座位點分型試劑盒打下了良好的基礎，有力的推動我國miniSTR商品試