布羅佐噴鈉對(duì)鹽敏感高血壓大鼠腦卒中的防治作用及其機(jī)制.pdf

1、丁基苯酞（3-n-butylphthalide，NBP），是從芹屬植物的種子中提取的有效成分，2002年11月由國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的治療缺血性腦卒中的國(guó)家一類新藥。但存在嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如使患者血糖升高，肝功能異常以及胃腸道反應(yīng)等。因此，鄭州大學(xué)化學(xué)系合成了更加安全有效的抗腦缺血的藥物：NBP類似物—布羅佐噴鈉【Sodium(±)-5-Bromo-2-(α-hydroxypentyl) benzoate，5-溴-2-（α-羥基戊

2、基）】苯甲酸鈉，商品名：Brozopine（BZP）。目前 BZP已通過(guò)Ⅰ期臨床試驗(yàn)。高血壓是腦卒中最重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而高鹽飲食是高血壓重要環(huán)境因素。因此，本研究通過(guò)建立鹽敏感高血壓大鼠模型，觀察BZP對(duì)鹽敏感高血壓大鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能、血壓、腦、心臟和腎臟功能等的影響，進(jìn)而探究 BZP對(duì)鹽敏感高血壓大鼠腦卒中的防治作用其機(jī)制。
　　第I部分：鹽敏感高血壓大鼠腦卒中模型的建立
　　目的：
　　通過(guò)高鹽飲食，建立鹽敏感高血

3、壓大鼠（Dahl-SS hypertensive rats）腦卒中模型。
　　方法：
　　12只7周齡雄性鹽敏感大鼠（Dahl-SS rats）和12只7周齡雄性SS-13BN大鼠，適應(yīng)環(huán)境1周，隨機(jī)分為對(duì)照組和模型組，每組12只。其中對(duì)照組為SS-13BN大鼠，正常飲食（0.3％Salt5L79 Diet）；模型組為Dahl-SS大鼠，高鹽飲食（8%Salt AIN-76A Diet）。定期監(jiān)測(cè)血壓、體重、神經(jīng)功能評(píng)分（1

4、次/3d）。記錄大鼠的死亡率和腦卒中的發(fā)生率。48天后，檢測(cè)血漿中過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）活力及一氧化氮（NO）的含量；取腦、心臟和腎臟HE染色，觀察病理學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　1.高鹽飲食對(duì)Dahl-SS高血壓大鼠體重的影響
　　高鹽飲食第12天，模型組大鼠體重明顯低于正常組（P<0.05）。
　　2.高鹽飲食對(duì)Dahl-SS大鼠血壓的影響
　　高鹽飲食12天，與正常組相

5、比，模型組大鼠收縮壓（SBP）、平均壓（MAP）和舒張壓（DBP）明顯高于正常范圍（P<0.01），說(shuō)明高鹽飲食可誘導(dǎo)Dahl-SS大鼠血壓升高。
　　3.高鹽飲食對(duì)Dahl-SS高血壓大鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能的影響
　　3.1.高鹽飲食對(duì)Dahl-SS高血壓大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響
　　模型組在高鹽飲食第12天，大鼠平衡木、肌力評(píng)定、Bederson以及綜合評(píng)定等神經(jīng)功能評(píng)分升高（P<0.01）。隨著高鹽飲食的攝入時(shí)間的延長(zhǎng)，

6、模型組大鼠運(yùn)動(dòng)功能障礙更加明顯，神經(jīng)功能評(píng)分顯著升高（P<0.01）。說(shuō)明高鹽飲食可誘導(dǎo)大鼠運(yùn)動(dòng)功能障礙。
　　3.2.高鹽飲食后Dahl-SS高血壓大鼠腦卒中的發(fā)生率
　　根據(jù)大鼠高鹽飲食后運(yùn)動(dòng)功能改變情況，我們將綜合評(píng)分≥3分定義為腦卒中。高鹽飲食第12天，91.7%神經(jīng)功能綜合評(píng)分≥3分，說(shuō)明高鹽飲食誘導(dǎo)鹽敏感高血壓大鼠腦卒中模型成功。并且隨著高鹽飲食攝入時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠腦卒中的發(fā)生率逐漸增加，腦卒中癥狀也逐漸加重。<

7、br>　　4.高鹽飲食對(duì)Dahl-SS高血壓大鼠存活率的影響
　　高鹽飲食48天期間模型組大鼠存活率（66.7%）明顯下降。NBP-K9.6mg/kg組大鼠存活率明顯提高（91.7%）。結(jié)合死亡前大鼠明顯的神經(jīng)行為學(xué)異常以及死亡大鼠腦組織視交叉附近可散在梗死灶及明顯水腫等，判定腦卒中是其死亡的主要原因。
　　5.神經(jīng)學(xué)評(píng)分與血壓的相關(guān)性分析
　　模型組大鼠平衡木評(píng)分、肌力評(píng)定、Bederson評(píng)分及綜合評(píng)分與大鼠血壓均

8、顯著相關(guān)，神經(jīng)功能評(píng)分與收縮壓（SBP）相關(guān)系數(shù)分別為 R12=0.8373（P<0.01），R22=0.7418（P<0.01），R32=0.8206（P<0.01），R42=0.8166（P<0.01）；神經(jīng)功能評(píng)分與舒張壓（SDP）相關(guān)系數(shù)分別為R12=0.8577（P<0.01），R22=0.6774（P<0.01），R32=0.7998（P<0.01），R42=0.7995（P<0.01）；神經(jīng)功能評(píng)分與平均動(dòng)脈壓（MAP）相

9、關(guān)系數(shù)分別為R12=0.9272（P<0.01），R22=0.8565（P<0.01）， R32=0.9260（P<0.01），R42=0.9207（P<0.01）。
　　6.高鹽飲食對(duì)Dahl-SS大鼠臟器的損傷作用
　　模型組腦組織細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞核固縮，胞質(zhì)透亮，著色變淺，且不均勻，出現(xiàn)許多空泡，嚴(yán)重者出現(xiàn)核破碎，細(xì)胞排列疏松紊亂，間隙變大；腎小球萎縮、消失；纖維化、硬化和玻璃樣變性；間質(zhì)纖維組織增生和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；

10、心肌細(xì)胞排列紊亂、細(xì)胞間隙明顯增大，肌纖維有斷裂，細(xì)胞核排列不整齊大小不均一。說(shuō)明高鹽飲食可造成大鼠腦、心臟和腎臟等重要臟器的損傷。
　　7.高鹽飲食對(duì)Dahl-SS高血壓大鼠氧化應(yīng)激水平的影響
　　與對(duì)照組相比，模型組大鼠高鹽飲食后血漿中CAT活性和GSH-PX活性顯著降低（P<0.01），NO含量顯著升高（P<0.01），說(shuō)明高鹽飲食使大鼠使機(jī)體抗氧化能力減退。
　　結(jié)論：
　　高鹽飲食可誘導(dǎo)鹽敏感高血壓大鼠

11、腦卒中的形成。
　　第II部分：布羅佐噴鈉對(duì)鹽敏感高血壓大鼠腦卒中的防治作用及其機(jī)制
　　目的：
　　探究布羅佐噴鈉（Brozopine, BZP）對(duì)鹽敏感高血壓大鼠腦卒中的防治作用，從而為臨床應(yīng)用提供相關(guān)依據(jù)。
　　方法：
　　72只7周齡雄性鹽敏感大鼠和12只7周齡雄性SS-13BN大鼠，適應(yīng)環(huán)境1周，隨機(jī)分為正常組、模型組、BZP（0.75，3，12 mg/kg）組、Br-NBP10.5 mg/kg組

12、和NBP-K9.6 mg/kg組，每組12只。對(duì)照組給予正常飲食（SS-13BN大鼠，0.3%Salt5L79 Diet）和其余劑量組給予高鹽飲食（Dahl/SS rats，8% Salt AIN-76A Diet）。其中BZP12 mg/kg與Br-NBP10.5 mg/kg、NBP-K9.6 mg/kg為等摩爾劑量。高鹽飲食2周開(kāi)始給藥，給藥方式為尾靜脈注射，每天一次，連續(xù)4周，正常組和模型組給予等體積的生理鹽水。在此期間監(jiān)測(cè)血壓、

13、體重和神經(jīng)功能評(píng)分，每7天測(cè)一次。并記錄大鼠腦卒中的發(fā)生率和大鼠的存活率。給藥28天后，檢測(cè)血漿中過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）活力及一氧化氮（NO）的含量；取腦、心臟和腎臟HE染色，觀察病理學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　1.BZP可增加Dahl-SS高血壓大鼠體重
　　高鹽飲食3周后，模型組大鼠與正常組相比體重明顯降低（P<0.01）。與模型組相比，給藥第14天，BZP12 mg/kg組大鼠體重

14、顯著增加（P<0.01）。
　　2.BZP并不引起Dahl-SS高血壓大鼠血壓的降低
　　高鹽飲食2周后（給藥前一天），與正常組相比，模型組收縮壓（SBP）、平均壓（MAP）和舒張壓（DBP）明顯高于正常范圍（P<0.01）。說(shuō)明高鹽飲食可誘導(dǎo)鹽敏感大鼠血壓升高。與模型組相比，BZP12 mg/kg組血壓僅在給藥第21天時(shí)稍降低（P<0.05，P<0.01），說(shuō)明BZP不是降壓藥物，且并不通過(guò)降壓作用而對(duì)鹽敏感高血壓大鼠腦卒

15、中具有防治作用。
　　3.BZP對(duì)Dahl-SS高血壓大鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能的影響
　　3.1.運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分
　　高鹽飲食2周，大鼠均出現(xiàn)不同程度的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)功能障礙，平衡木評(píng)定、肌力評(píng)定、Bederson以及綜合評(píng)定等神經(jīng)功能評(píng)分升高（P<0.01）。模型組隨著高鹽飲食攝入時(shí)間的延長(zhǎng)，運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)功能障礙明顯加重，評(píng)分顯著增加（P<0.01）。給藥第7天，與模型組相比，BZP12 mg/kg組大鼠運(yùn)動(dòng)功能障礙得到顯著改善，神經(jīng)功

16、能評(píng)分明顯降低（P<0.05）；給藥第14天后，BZP（0.75，3，12 mg/kg）組均可改善大鼠運(yùn)動(dòng)功能障礙，神經(jīng)功能評(píng)分明顯降低（P<0.05，P<0.01）且呈現(xiàn)劑量依賴性。給藥第21天后，BZP12 mg/kg組改善大鼠運(yùn)動(dòng)功能障礙優(yōu)于NBP-K9.6 mg/kg組和Br-NBP10.5 mg/kg組。
　　3.2.BZP可降低Dahl-SS高血壓大鼠腦卒中的發(fā)生率
　　根據(jù)大鼠的運(yùn)動(dòng)功能損傷情況，綜合評(píng)分≥3分

17、則被認(rèn)為該大鼠已形成腦卒中。高鹽飲食第7天，模型組有83.3%的大鼠發(fā)生腦卒中。而B(niǎo)ZP（0.75，3，12 mg/kg）組在給藥第7天腦卒中發(fā)生率與模型組相比明顯下降（58.3%，58.3%，16.7% vs83.3%）且呈現(xiàn)劑量依賴性。且BZP12 mg/kg降低大鼠腦卒中發(fā)生率效果優(yōu)于Br-NBP10.5 mg/kg組和NBP-K9.6 mg/kg組。
　　4.BZP可提高Dahl-SS高血壓大鼠的存活率
　　高鹽飲食

18、期間，模型組大鼠存活率為58.3%，BZP（0.75，3，12 mg/kg）組大鼠存活率分別為83.3%，91.7%，100%。說(shuō)明BZP能劑量依賴性地顯著提高大鼠存活率。結(jié)合死亡前大鼠明顯的神經(jīng)行為學(xué)異常以及死亡大鼠腦組織視交叉附近可散在梗死灶及明顯水腫等，判定腦卒中是其死亡的主要原因。與模型組相比，BZP（0.75，3，12mg/kg）組大鼠存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)【（41.25±2.05）天、（41.25±2.60）、）天、（42±0）天

19、 vs（39.42±4.54）天】。
　　5.BZP可提高CAT、GSH-PX的活性，降低NO的含量
　　與正常組相比，模型組大鼠高鹽飲食后血漿中 CAT活性（P<0.01）和GSH-PX活性顯著下降（P<0.01），NO含量顯著升高（P<0.01），說(shuō)明高鹽飲食可使機(jī)體抗氧化能力減弱；與模型組相比，BZP12mg/kg可顯著增加CAT的活性（P<0.05）和GSH-PX的活性（P<0.01）；BZP（3，12mg/kg）組

20、可顯著降低NO的含量（P<0.01），且呈現(xiàn)劑量依賴性；說(shuō)明BZP可提高機(jī)體抗氧化能力，且BZP12mg/kg組提高機(jī)體抗氧化能力效果優(yōu)于NBP-K9.6 mg/kg組和Br-NBP10.5 mg/kg組。
　　6.組織形態(tài)學(xué)改變
　　模型組大鼠腦細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞核固縮，核質(zhì)比減小，胞質(zhì)透亮，著色變淺，不均勻，出現(xiàn)許多空泡，嚴(yán)重者核破碎，細(xì)胞排列疏松紊亂，間隙變大；腎小球萎縮、消失；纖維化、硬化和玻璃樣變性；間質(zhì)纖維組織增

21、生和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；心肌細(xì)胞排列紊亂、細(xì)胞間隙明顯增大，肌纖維有斷裂，細(xì)胞核排列不整齊，不均一。BZP（0.75，3，12 mg/kg）組可顯著減輕腦、心、腎等重要臟器的；效果優(yōu)于NBP-K9.6 mg/kg與Br-NBP10.5 mg/kg組。表明BZP對(duì)鹽敏感高血壓大鼠所致腦，心臟和腎臟的損傷具有保護(hù)作用。
　　結(jié)論：
　　BZP對(duì)鹽敏感高血壓大鼠腦卒中的有顯著防治作用。
　　1. BZP可顯著改善鹽敏感高血壓大鼠腦