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1、實(shí)驗(yàn)利用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)技術(shù),對(duì)中國大陸6水系15個(gè)地區(qū)及1個(gè)俄羅斯地區(qū)現(xiàn)有絨螯蟹16個(gè)自然群體和289個(gè)個(gè)體的線粒體細(xì)胞色素氧化酶亞基I(COI)基因進(jìn)行了限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性比較,探討了不同水系絨螯蟹自然群體的遺傳差異和群體遺傳多樣性,并針對(duì)長(zhǎng)江水系中華絨螯蟹種質(zhì)資源混雜、濫捕蟹苗和親本雜交導(dǎo)致種質(zhì)不純等現(xiàn)象,著重對(duì)長(zhǎng)江水系中華絨螯蟹的線粒體COI基因片段進(jìn)行了限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)和變性梯度凝膠電泳(DG
2、GE)分析。研究結(jié)果表明: 1.通過對(duì)絨螯蟹16個(gè)自然群體的RFLP分析表明,限制性內(nèi)切酶TasI-RFLP標(biāo)記可作為區(qū)分合浦絨螯蟹和中華絨螯蟹、日本絨螯蟹、狹額絨螫蟹的分子遺傳標(biāo)記;甌江、長(zhǎng)江、黃河、海河和遼河水系中華絨螯蟹各群體間最大遺傳距離為0.015,最小遺傳距離為0,可定義為中華絨螯蟹的不同地理種群;狹額絨螯蟹與上述群體間的遺傳距離介于0.147~0.195之間,定義為絨螯蟹屬種間的遺傳距離。 2.在289個(gè)絨
3、螯蟹個(gè)體的11個(gè)群體中,共檢測(cè)到15種復(fù)合單倍型,其中復(fù)合單倍型1為除合浦絨螯蟹以外的群體所共有,均以該復(fù)合單倍型為主,復(fù)合單倍型4在合浦絨螯蟹群體中占有較大的比例;合浦絨螯蟹與黃河、海河、遼河水系中華絨螯蟹的遺傳差異最為明顯(Pnet=0.060~0.061);不同水系中華絨螯蟹及合浦絨螯蟹和日本絨螯蟹具有一定的群體內(nèi)遺傳多態(tài)性(π=0.0002~0.0167)。 3.長(zhǎng)江水系南京和江都地區(qū)中華絨螯蟹共61個(gè)個(gè)體的8種(識(shí)別4
4、堿基)和11種(8種識(shí)別4堿基和3種識(shí)別6堿基)限制性內(nèi)切酶RFLP分析表明,在8種限制性內(nèi)切酶的分析中,南京和江都群體的線粒體COI基因多態(tài)度π值分別為0.008和0.019,與11種限制性內(nèi)切酶分析的結(jié)果一致(0.007和0.016),說明長(zhǎng)江水系中華絨螯蟹具有一定的群體內(nèi)遺傳多樣性。 4.首次應(yīng)用變性梯度凝膠電泳(DGGE)對(duì)長(zhǎng)江水系南京地區(qū)中華絨螫蟹線粒體COI基因進(jìn)行分析,比RFLP技術(shù)能檢測(cè)出更多得DNA的多態(tài)性,結(jié)
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