球等鞭金藻抑制物的分離提取及其對(duì)藻的生理影響.pdf

1、在微藻的高密度培養(yǎng)過(guò)程中，特別是培養(yǎng)后期，細(xì)胞間存在著顯著的相互抑制現(xiàn)象，我們?cè)谇虻缺藿鹪宓呐囵B(yǎng)過(guò)程中也發(fā)現(xiàn)了這種現(xiàn)象。進(jìn)一步的研究表明，除光照、溫度、pH、通氣量及營(yíng)養(yǎng)限制因素以外，球等鞭金藻自身產(chǎn)生抑制物也是影響其生長(zhǎng)的重要因素。本論文圍繞抑制物進(jìn)行了分離提取及其對(duì)藻的生理影響等方面進(jìn)行了如下研究： 1. 對(duì)老化的球等鞭金藻培養(yǎng)液進(jìn)行無(wú)細(xì)胞處理后，在光照、通氣量不受限制，營(yíng)養(yǎng)充分的條件下，重新進(jìn)行該藻培養(yǎng)，結(jié)果表明球等鞭金藻

2、在生長(zhǎng)過(guò)程中的確可產(chǎn)生某種抑制物，該抑制物是在生長(zhǎng)過(guò)程中逐漸釋放到培養(yǎng)液中，至細(xì)胞衰亡期(25d)時(shí)含量足以使游動(dòng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為不動(dòng)細(xì)胞并使得生長(zhǎng)速率迅速減??；此外，該抑制物對(duì)其自身藻細(xì)胞的生長(zhǎng)、葉綠素a、胞內(nèi)多糖和蛋白質(zhì)有明顯的抑制效果，且胞外老化液老化程度越大，抑制效果越明顯。 2. 利用球等鞭金藻老化液對(duì)鹽藻、扁藻、三角褐指藻、纖細(xì)角毛藻、小球藻和新月菱形藻等幾種海洋微藻進(jìn)行了培養(yǎng)，結(jié)果表明，金藻產(chǎn)生的抑制物對(duì)這些微藻細(xì)胞的培

3、養(yǎng)密度，蛋白質(zhì)、多糖、葉綠素含量以及氮磷的吸收均有一定的影響。 3. 利用萃取、柱層析、薄層層析等方法對(duì)該抑制物進(jìn)行了分離純化和提取工藝研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該抑制物有良好的熱穩(wěn)定性、極性較大，所得最佳提取工藝為：萃取溶劑乙酸乙酯，提取pH2.4～3，蒸干乙酸乙酯溫度40℃。 4. 對(duì)粗提物作進(jìn)一步的柱層析和薄層層析，最終得到了一種較純的抑制物組分，該組分在高效液相圖譜中保留時(shí)間為4.872±0.005min 的峰對(duì)應(yīng)。

4、 5. 采用正交實(shí)驗(yàn)擬水平設(shè)計(jì)法，研究半連續(xù)培養(yǎng)中氮、磷濃度，更新率和更新周期對(duì)球等鞭金藻的細(xì)胞產(chǎn)率、細(xì)胞總采收量、DHA 產(chǎn)率和DHA 總采收量的影響。結(jié)果表明獲得最大細(xì)胞產(chǎn)率的培養(yǎng)條件是：NO3--N濃度為11.5mg/L，PO43--P濃度為1.1mg/L，更新率為0.20，更新周期為1d，而獲得最大DHA產(chǎn)率的培養(yǎng)條件是，NO3--N濃度為11.5mg/L，PO43--P濃度為0.7mg/L，更新率為0.20，更新周期為1d。