海蘿藻(Gloilpeltis furcata)多糖的提取分離及其結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、海蘿藻(Gloiopeltis furcata)為-年生海藻,屬于紅藻門內(nèi)枝藻科海蘿屬。雖然從海蘿藻的醇提物和水提物中發(fā)現(xiàn)了部分具有活性的小分子以及蛋白類物質(zhì),但海蘿多糖被認(rèn)為是其中主要的活性成分,表現(xiàn)出抗菌、抗炎、抗腫瘤、降血糖等生物學(xué)功能,是一種重要的海洋藥物資源。由于海蘿藻多糖的種類、成分復(fù)雜,要從事其深入構(gòu)效關(guān)系研究,結(jié)構(gòu)與序列的研究十分重要。
　　 本文以福建產(chǎn)海蘿藻(Gloiopeltis furcata)為原料,依

2、次用冷水、熱水和熱堿溶液提取,從中獲得了3種多糖(GFW,GFH和GFA),其得率分別為57.9％,2.5％和2.6％。運(yùn)用氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、傅里葉變換紅外光譜(FTIR)及核磁共振碳譜(13C-NMR)等方法對(duì)其單糖組成、分子量以及結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了比較分析。結(jié)果表明,GFW和GFH屬于含有D-半乳糖(Gal)和3,6-內(nèi)醚-L-半乳糖(AnG)的硫酸半乳聚糖;而GFA除了含有Gal和AnG外,還有木糖,為含

3、有木糖的硫酸半乳聚糖。經(jīng)FTIR和13C-NMR分析表明,三種多糖的硫酸基均在半乳糖殘基C6位。
　　 在對(duì)多糖組分GFW基本理化性質(zhì)研究基礎(chǔ)上,運(yùn)用強(qiáng)陰離子交換色譜(SAX)和低壓凝膠滲透色譜(LPGPC)技術(shù)從GFW中分離純化出3個(gè)純品多糖(GW4、GW6和GW7),運(yùn)用各種化學(xué)分析方法(理化性質(zhì)分析,脫硫分析,氣相色譜、甲基化反應(yīng))和波譜學(xué)方法(紅外光譜IR、紫外光譜UV和核磁共振波譜NMR等)對(duì)3個(gè)純品多糖主鏈結(jié)構(gòu)及糖基

4、組成情況進(jìn)行了深入研究。結(jié)果表明:GW4主要是由1,4-AnG和1,3-Gal6S結(jié)構(gòu)片段構(gòu)成,還含有部分1,3-Gal和6-O-Me-1,4-Gal結(jié)構(gòu)片段的直鏈硫酸半乳聚糖。GW6是由1,4-AnG、1,3-Ga16S、1,3-Gal以及1,4-Ga16S組成的直鏈硫酸半乳聚糖。與GW4結(jié)構(gòu)不同的是,GW6中沒有甲基取代的半乳糖,但含有部分瓊膠糖前體,其硫酸根含量高于GW4。GW7純度高達(dá)98％,主要含3,6-內(nèi)醚半乳糖和半乳糖,且

5、兩者摩爾比接近1:1。經(jīng)1H-1H COSY和HMQC分析,確定GW7為C6位全部被硫酸根取代的瓊膠糖,其重復(fù)的二糖結(jié)構(gòu)單元為[→3Gal6Sβ1→4AnGα1→]。
　　 本文應(yīng)用酸水解及還原性酸水解兩種方法對(duì)多糖組分GW7進(jìn)行了可控酸降解,通過各種現(xiàn)代分離純化技術(shù)獲得系列寡糖,確定通過酸水解得到了5種奇數(shù)寡糖(dp3-11);通過還原性酸水解得到了5種偶數(shù)寡糖醇(dp2-10),分別采用質(zhì)譜序列分析方法對(duì)各寡糖結(jié)構(gòu)和序列進(jìn)行

6、了分析,進(jìn)一步闡明了該多糖的精細(xì)結(jié)構(gòu),也闡明了該糖的酸法降解機(jī)理。此外,將dp3和dp5通過還原胺化方法,首次制備成DHPE擬糖脂化合物,并研究了其與凝集素的相互作用,表明硫瓊膠的寡糖脂能與RCA特異性結(jié)合,此結(jié)果為糖藥物的研究和開發(fā)提供了理論與技術(shù)支持。
　　 綜上所述,本文對(duì)海蘿藻多糖進(jìn)行了系統(tǒng)的提取、分離純化研究,首次通過各種化學(xué)方法以及波譜學(xué)方法確定了3種多糖及10種寡糖的結(jié)構(gòu)與序列,這些硫酸多糖和寡糖為從分子水平上進(jìn)-