桔梗多糖的提取、分離純化和結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、桔梗(Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.DC.)作為一種藥食兩用的中藥材,在我國(guó)種植面積廣闊。藥理研究顯示桔梗多糖具有很好的抗腫瘤和增強(qiáng)機(jī)體免疫活性的作用,因此桔梗多糖(PGP)有很好的研究?jī)r(jià)值。本文以桔梗為模型,對(duì)桔梗多糖的含量測(cè)定、提取工藝、分離純化、純度鑒定及結(jié)構(gòu)分析等方面進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究?，F(xiàn)將研究方法與結(jié)論分述如下:
　　 1、采用間接法測(cè)定桔梗多糖的含量。運(yùn)用蒽酮-硫酸法測(cè)定桔?？偺?包

2、括多糖和還原性的單糖)的含量,分別采用3,5-二硝基水楊酸法(DNS)、間接碘量法、菲林滴定法測(cè)定還原糖的含量。總糖含量與還原糖含量之差即為多糖的含量。三種方法測(cè)得的桔梗多糖的含量分別為95.55％、96.01％、95.75％。結(jié)果顯示三種方法測(cè)得的值相近,但是綜合實(shí)驗(yàn)成本、設(shè)備、操作及影響測(cè)定的因素等多方面考慮,選用蒽酮-硫酸法與DNS法相結(jié)合測(cè)定桔梗多糖的含量。
　　 2、采用傳統(tǒng)的水煮醇沉法提取桔梗多糖,分別考察了提取溫度

3、、提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)對(duì)桔梗多糖提取率的影響,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用了四因素三水平正交試驗(yàn)來(lái)優(yōu)化桔梗多糖的提取工藝。正交試驗(yàn)結(jié)果表明,桔梗多糖提取的最佳工藝條件為:提取溫度為80℃,提取時(shí)間為2h,提取次數(shù)為2次,料液比為1:25。通過(guò)3次平行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)得出在該方案下桔梗多糖的提取率為42.51％。
　　 3、采用Sevag法、三氯乙酸法、三氯乙酸-正丁醇法3種方法分別對(duì)桔梗多糖進(jìn)行脫蛋白研究,以蛋白脫除率和多糖損失率為衡

4、量指標(biāo),結(jié)果顯示Sevag法除蛋白效果較好,其工藝條件為:多糖:氯仿:正丁醇=25:5:1,劇烈振搖20min。脫色方法采用H2O2氧化法,脫色條件為:多糖液:H2O2=4:1,以濃氨水或0.1％NaOH調(diào)pH值為8.8,37℃保溫12h。采用Sephadex G-25柱層析法脫鹽及小分子物質(zhì)。
　　 4、純化后的桔梗多糖采用DEAE-纖維素52進(jìn)行分離主要得到三種組分:PGPN、PGPA1、PGPA3。三種組分經(jīng)過(guò)Sephad

5、ex G-100柱層析進(jìn)一步分離后均得到單一對(duì)稱的洗脫峰。利用Sephadex G-100柱層析、旋光度測(cè)定法、紫外分光光度法對(duì)三種多糖進(jìn)行純度鑒定得出三種多糖都為均一的多糖,且都不含蛋白質(zhì)和核酸。利用Sephadex G-200柱層析測(cè)得三種多糖的分子量分別為10233、4677、23442。
　　 5、采用薄層色譜法(TLC)對(duì)桔梗多糖的單糖組成進(jìn)行了分析,TLC圖譜顯示PGPN的單糖組成中含有果糖,還含有葡萄糖和半乳糖中的