庫拉索蘆薈多糖的提取、分離純化與活性研究.pdf

1、高速逆流色譜技術(High-SpeedCountercurrentChromatography)是一項連續(xù)的液-液分配色譜技術，其具有無固相載體、樣品無需嚴格預處理等優(yōu)點，目前已經廣泛應用于食品、天然產物、生物技術、醫(yī)藥、環(huán)境監(jiān)測等領域。然而，現(xiàn)有的研究基本局限于采用高速逆流色譜的有機相-水相溶劑系統(tǒng)來分離純化天然產物，在分離多糖、蛋白質、核酸的研究中因有機溶劑不能溶解生物大分子而受到限制。但隨著近年來雙水相體系的迅速發(fā)展，高速逆流色譜

2、在研究分離多糖、蛋白質、核酸等生物大分子有其獨特的優(yōu)勢。因此，本文主要從制備型高速逆流色譜技術與雙水相溶劑體系分離純化蘆薈多糖方面進行研究，為分離純化粗多糖提供一種新的方法。
　　 在國內，蘆薈多糖的分離純化比較傳統(tǒng)、經典的方法大多是采用凝膠柱層析技術。該方法有方便，選擇性大，對實驗技能要求低等優(yōu)點，但同時存在著機械化程度低、耗費時間長、制備量少等缺點。本研究將高速逆流色譜技術與凝膠柱層析技術結合進行對蘆薈粗多糖的分離純化，不但

3、克服了耗時、機械化程度低、制備量少的特點，而且使高速逆流色譜在分離多糖方面進行了創(chuàng)新。
　　 蘆薈有著很多重要醫(yī)用藥用價值，但其化學成分相當?shù)膹碗s。目前，人們研究出的蘆薈的生理活性主要都是針對多種組分共同作用的，通常起主要作用的只是其中的很重要的一類。要研究具體某一種活性物質的價值，就必須對該物質進行分離純化。蘆薈多糖是蘆薈中最為重要的生物活性成分之一，具有提高免疫力、抗腫瘤、降血脂等生理功能。他們是醫(yī)藥及化妝品的天然原料，有著

4、極其重要的研究利用價值。
　　 本文就是以此為目的，旨在研究運用高速逆流色譜與凝膠層析技術聯(lián)合從庫拉索蘆薈凝膠中分離純化蘆薈多糖的方法，主要討論了溶劑系統(tǒng)的組成、配比，及分配系數(shù)等用于高速逆流色譜分離的重要參數(shù)。其分離出的兩個組分繼續(xù)用凝膠層析技術進一步純化，從而達到純化為單一組分的目的，并研究其在小鼠活體實驗中的降血脂作用。
　　 首先，通過采用基本方法對蘆薈主要物質成份的測定可知，蘆薈凝膠中含有98.74％的水分，總

5、糖含量蘆薈全葉要高于蘆薈凝膠，為1.164％；蘆薈全葉中蛋白質的含量主要在蘆薈凝膠中，其外皮含量較少，蘆薈凝膠中的灰分含量較低，僅為0.156％。
　　 其次，采用響應曲面法對蘆薈多糖提取工藝參數(shù)的模型分析，超聲波輔助提取庫拉索蘆薈凝膠中多糖的最佳工藝為：超聲時間為45.85min，提取液pH值為8.74，液料比為29.84mL/g，對最佳工藝修正后得到的3次蘆薈多糖平均提取率為11.332mg/g，采用蒽酮-濃硫酸法測得提取出

6、的粗多糖含量為51.49％。
　　 再次，通過紫外-可見分光光度計法對高速逆流色譜儀分離蘆薈多糖的溶劑系統(tǒng)進行研究，探索出分離蘆薈多糖的溶劑系統(tǒng)為w(PEG600)：w(KH2PO4)：w(K2HPO4)：w(H2O)=5:15:15:65，加入的NaCl的質量分數(shù)為2％。采用此系統(tǒng)在轉速為600r/min，固定相流速為8mL/min，流動相流速為2mL/min，進樣量濃度為7.5mg/mL，水浴溫度為30℃條件下，采用固定相-

7、進樣-流動相的進樣順序，成功分離出蘆薈多糖的兩個組分(APS-1、APS-2)。采用SephadexG-150葡聚糖凝膠層析技術進一步對APS-1純化，并考察了流速與進樣量對分離效果的影響，通過不斷改變條件成功分離出單一組分的多糖APS-1-1，經高效液相色譜技術檢測其純度高達98％，分子量為1300道爾頓。
　　 最后，通過對小鼠的高脂模型研究得出，蘆薈多糖APS-1-1在降低肥胖小鼠體重的同時能起到較好的降血脂作用，其中對總