毛竹葉活性多糖、類黃酮的中試提取及分離純化研究.pdf

1、近年來，竹葉作為新資源植物，已成為世界性的研究熱點(diǎn)。竹葉中含有大量的對(duì)人體有益的活性物質(zhì)，包括生物活性多糖、黃酮類化合物(又稱類黃酮)等。目前對(duì)竹葉的相關(guān)研究大多集中在對(duì)竹葉提取液、竹葉黃酮類化合物的研究報(bào)導(dǎo)，對(duì)竹葉活性多糖的研究卻寥寥無幾，同時(shí)獲得活性多糖及黃酮類化合物及廢渣再利用的工藝也從未見報(bào)導(dǎo)。更未見充分利用資源、無三廢的毛竹葉活性物質(zhì)的中試提取研究報(bào)導(dǎo)。 本論文為了毛竹葉活性多糖、黃酮類化合物的工業(yè)化生產(chǎn)提供可靠的數(shù)據(jù)

2、，在小試結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)行中試提取研究，分別在常壓和真空度下改變固液比、提取次數(shù)、提取時(shí)間，比較在不同條件下毛竹葉多糖及黃酮類化合物的得率，確定了中試提取的最佳工藝條件。多糖的最佳工藝為：真空度0.05～0.06MPa，提取溫度為80℃，固液比為1：30，提取次數(shù)2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，提取率為2.89％，毛竹葉粗多糖的純度為12.4％，用Sevag法脫蛋白后，純度為30.6％；黃酮類化合物的最佳工藝為：真空度0.05～0.06MPa

3、，提取溫度為63℃，70％乙醇、固液比為1：25，提取次數(shù)1次，提取時(shí)間為4小時(shí)，提取率為2.01mg/g竹葉，得到的毛竹葉粗黃酮的純度為23.1％。 為了得到毛竹葉多糖純品，使其應(yīng)用于色澤及純度要求較高的保健品及醫(yī)藥行業(yè)，脫色是必不可少的步驟。本論文采用樹脂脫色法和H2O2氧化脫色首次對(duì)毛竹葉多糖的脫色進(jìn)行了研究。樹脂脫色法采用了5種大孔樹脂，結(jié)果表明：大孔弱堿性陰離子交換樹脂D392的脫色率最高，為66.63％，多糖保留率為

4、62.18％。H2O2氧化脫色工藝研究中通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，得到其最佳脫色工藝條件：雙氧水用量50％，溫度為50℃，脫色時(shí)間為10小時(shí)，脫色率為69.1％，多糖保留率為73.5％。 為了研究中試得到的毛竹葉活性多糖的理化性質(zhì)及組成，將中試得到的毛竹葉多糖提取液經(jīng)過醇沉、脫蛋白、脫色得到BP1，DEAE-纖維素分離純化后得到BP2，經(jīng)SaphadexG-200凝膠柱鑒定純度為均一多糖，凝膠過濾法測(cè)其分子量為25136。BP1

5、紅外光譜分析結(jié)果表明具有典型的多糖特征吸收峰；BP1進(jìn)行GC分析結(jié)果表明至少由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖六種單糖組成。 為了進(jìn)一步的放大試驗(yàn)及選膜提供可靠的依據(jù)，本文對(duì)毛竹葉多糖及黃酮類化合物的超濾工藝條件進(jìn)行了探索性研究。根據(jù)毛竹葉多糖的分子量分布，選用50000Dr的超濾膜對(duì)毛竹葉多糖的中試提取液進(jìn)行分離純化，超濾膜透過液中多糖濃度為0.301mg/ml，多糖的遷移率為83.38％，透過液經(jīng)紫外分光光度掃

6、描發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的截留效果良好。超濾分離純化后得到的多糖產(chǎn)品的純度為36.7％。毛竹葉多糖提取液的超濾過程中操作壓力為0.4MPa，溫度為35℃較適宜。選用8000Dr的超濾膜對(duì)毛竹葉黃酮的中試提取液進(jìn)行分離純化，得到的產(chǎn)品中黃酮的濃度為0.733mg/ml，黃酮的遷移率為86.64％，得到的黃酮產(chǎn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為48.18％。毛竹葉黃酮提取液的超濾過程中操作壓力范圍在0.3～0.4MPa，溫度為35～40℃較適宜。 中試提取出來的毛

7、竹葉黃酮類化合物中雜質(zhì)較多，為了提高純度，需要對(duì)其進(jìn)行精制。選用5種大孔樹脂對(duì)毛竹葉黃酮類化合物進(jìn)行精制，綜合比較，AB-8樹脂比其它四種樹脂相吸附性和解吸性更好，經(jīng)AB-8樹脂精制后的毛竹葉黃酮純度達(dá)到79.4％。 研究毛竹葉黃酮的體外抗氧化作用，以期為進(jìn)一步開發(fā)毛竹葉資源提供理論依據(jù)。測(cè)定了毛竹葉黃酮對(duì)二苯代苦味酰自由基(DPPH)清除作用，同時(shí)用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定其對(duì)亞油酸的抗氧化性。體外實(shí)驗(yàn)表明毛竹葉黃酮有較強(qiáng)