毛竹葉多糖構成及生物活性研究.pdf

1、毛竹(Phylbstachys pubescens)又名“楠竹”、“孟宗竹”，我國毛竹種植總面積達300多萬hm<'2>，年產(chǎn)近700000萬株，產(chǎn)量占我國所有竹種的70％以上，是我國經(jīng)濟價值最大的竹種。按照每株產(chǎn)2公斤鮮竹葉計算，每年可產(chǎn)毛竹葉1400000公斤，數(shù)量驚人。毛竹葉中含有大量的對人體有益的活性物質，目前毛竹葉的利用在國內幾為空白，一般作為廢棄物拋棄，造成林業(yè)資源的巨大浪費。 本研究可豐富天然產(chǎn)物資源庫，為相關資源

2、開發(fā)利用提供具有學術參考價值的文獻。利用酶法中試綜合提取的毛竹葉粗多糖(CPMBL)為原料，系統(tǒng)地研究毛竹葉多糖的分離純化、構成及功能活性等。通過組合膜(微濾膜、超濾膜、納濾膜)對CPMBL進行分離及EIEAE-纖維素柱層析純化；采用平板法進行抗、抑菌活性研究；以活性氧清除率、DPPH法、TBA法等研究PMBL體外抗氧化能力；通過動物實驗研究PMBL的體內抗氧化、抗疲勞、降血糖及脂類代謝調節(jié)等方面的生理功能。 研究結果與分析：

3、 1、CPMBL的分離、純化及構成研究。 對CPMBL進行分離純化，獲取PMBL純品進一步研究。實驗結果：組合膜分離得到超濾多糖(分子>6000D)和納濾多糖(分子量2000～6000D)，純度分別為37.37％和51.76％；UV檢測無明顯的蛋白質和核酸特征吸收峰；DEAE-纖維素柱層析分離得到七個洗脫組分；選擇其中洗脫峰面積較大的三個，經(jīng)HPLC測定為高純度多糖均一組分，相對分子量分別為：20378D、14367D、5

4、932D； 定性實驗顯示三者均含硫酸基，為無蛋白綴合的非淀粉酸性多糖； IC分析其單糖組成，PMBL主要由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、果糖六種單糖等構成；IR分析表明，PMBL是以β-D-吡喃糖為主要糖環(huán)結構多糖類，其分子內存在果呋喃糖骨架結構。 結果表明：以上方法可行，組合膜具有較好的分離、純化效果。 2、PMBL的抗、抑菌研究。 以CPMBL和精制PMBL作對比實驗，選擇革蘭氏陽性菌(G

5、<'+>)和革蘭氏陰性菌(G<'->)及真菌為試驗菌，考察PMBL的抗、抑菌效果。實驗結果：CPMBL液對細菌表現(xiàn)出顯著的廣譜抗、抑菌效果，對真菌無作用；PMBL無明顯的抗菌活性。 結果表明：PMBL沒有抗、抑菌作用。 3、PMBL的體外抗氧化研究。 通過研究PMBL對活性氧自由基清除率、DPPH清除作用、抗脂質過氧化及抗H<,2>O<,2>誘導紅細胞溶血作用等，考察PMBL體外抗氧化活性。實驗結果：PMBL對O

6、<,2><'->和·OH均具有較強清除作用，清除能力均優(yōu)于Vc和蘆丁；對DPPH的清除效果良好，IC<,50>為36.08mg/L，弱于Vc和蘆?。粚営退嶂|過氧化有一定抑制作用；對H<,2>O<,2>誘導紅細胞溶血有顯著抑制作用，濃度為30mg/l時對H<,2>O<,2>所誘導的紅細胞溶血抑制率為38.119％，強于同濃度Vc和蘆丁。 結果表明：PMBL體外抗氧化作用主要體現(xiàn)為對活性氧自由基具有顯著清除作用，而對有機自由基包

7、括DPPH和脂質過氧化反應中產(chǎn)生的過氧化自由基清除能力相對較弱；體外抗氧化能力存在明顯量效關系。 4、PMBL對老齡小鼠體內抗氧化研究。 以正常喂養(yǎng)的老齡小鼠作對照，灌胃PMBL考察其體內抗氧化活性。實驗結果：PMBL可以顯著增加血清及肝、腎組織等蛋白質含量；降低血清及組織MDA含量；提高小鼠的血清及心、肝、腎組織SOD和GSH-px活力；提高老齡小鼠體內總抗氧化能力(TAOC)；血清、心、肝、腎組織TAOC/MDA比值

8、均顯著高于正常對照組。 結果表明：PMBL可促進血清及組織蛋白質合成，延緩動物組織及細胞結構及功能衰退；能減少體內MDA生成，提高體內抗氧化系統(tǒng)酶活性，較好地維持老齡小鼠體內抗氧化/氧化平衡狀態(tài)。 5、PMBL的抗疲勞作用研究。 以正常喂養(yǎng)小鼠組作對照，不同劑量PMBL灌胃，考察其抗疲勞活性。實驗結果：PMBL能延長小白鼠負重游泳時間，降低了運動后血尿素氮(BUN)的增量，提高了血清乳酸脫氫酶(LDH)活力，顯著

9、增加肌糖元和肝糖元儲備量，提高抗疲勞能力。 結果表明：PMBL具有緩解體力疲勞作用。 6、PMBL的降血糖作用研究。 通過四氧嘧啶法誘發(fā)建立小鼠糖尿病模型，考察PMBL降血糖活性；并研究其對正常小鼠血糖值的影響。實驗結果：PMBL可顯著降低由四氧嘧啶致糖尿病小白鼠血糖值，緩減糖尿病病鼠消瘦、體重減輕及多飲多食癥狀；對正常小白鼠的血糖值、體重、攝食量等無不良影響。 結果表明：PMBL具有顯著的降血糖活性；對

10、正常小白鼠血糖無不良影響。 7、PMBL對脂類代謝調節(jié)作用。 考察PMBL對小鼠脂類代謝調節(jié)作用： (1)以不同劑量PMBL對高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠灌胃4w，考察其對小鼠高血脂及脂肪肝形成的預防效果。實驗結果：PMBL對實驗前期體重增長有顯著抑制作用；能顯著抑制血清TCHO、LDL-C、TG的升高，提高血清HDL-C含量；可減少小鼠肝細胞損傷和肝粗脂肪含量，降低血清ALT活性，抑制肝系數(shù)增加。 結果表明：PM

11、BL能顯著緩解和預防小鼠高血脂、脂肪肝腫大及肝損傷的產(chǎn)生，作用效果強于藥物(血脂康)對照組。 (2)建立高血脂、脂肪肝合并肝損傷病鼠模型。改變?yōu)槠胀暳衔桂B(yǎng)同時以不同劑量PMBL灌胃2W后，考察PMBL對病鼠的降脂利肝作用。實驗結果：PMBL可顯著降低病鼠血清TCHO，TG、LDL-C，而對血清HDL-C略有提高；可降低肝系數(shù)和血清ALT活性、肝粗脂肪含量(最高降低率達58％)；病理組織切片分析顯示PMBL可顯著改善肝組織細胞形

12、態(tài)結構，促進病鼠肝損傷修復。 結果表明：PMBL對高血脂、脂肪肝損傷小鼠具有顯著降脂和促進肝修復的功效。 本研究采用組合膜等技術分離PMBL，分離純化工藝簡便易行，具有很強的操作性，可為相關植物多糖的研究提供借鑒。PMBL一定程度匕具有抗疲勞、抗氧化、降血糖、降血脂等多方面的生理功效；證實非傳統(tǒng)藥用植物多糖與藥用植物多糖具有同樣的生物學活性；研究有助于提高毛竹生產(chǎn)附加值，促進林業(yè)經(jīng)濟發(fā)展，為相關資源開發(fā)應用提供新思路和理