鵝毛竹葉提取物抗氧化及酪氨酸酶抑制活性的研究.pdf

1、我國的竹類資源豐富,素有“竹子王國”之稱。竹葉資源未被充分開發(fā)利用,而竹葉提取物含有豐富的次生代謝物,如黃酮類物質(zhì)、酚酸類物質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)及揮發(fā)性成分等,它還有抗氧化、抗衰老、抗輻射等功效。為了推動我國竹葉資源,特別是地被竹葉資源的綜合利用,本文以竹葉提取物抗氧化活性和對酪氨酸酶活性的影響為評價指標(biāo),篩選出其具有高活性的竹種,研究其抑制酪氨酸酶活性最強的提取工藝條件,并對影響酪氨酸酶活性的有效部位進行篩選,初步研究其功能成分及其生物

2、活性。旨在為地被竹葉資源的開發(fā)利用提供一定的科學(xué)依據(jù),也為酪氨酸酶抑制劑的開發(fā)提供參考。主要的研究結(jié)果如下:
　　(1)竹葉提取物抗氧化活性與對酪氨酸酶活性的影響
　　在相同的條件下,研究了5個(種)地被竹葉與淡竹葉提取物抗氧化活性及對酪氨酸酶活性的影響,發(fā)現(xiàn)5個(種)地被竹葉與淡竹葉提取物均有一定的抗氧化活性和抑制酪氨酸酶活性的作用。其中鵝毛竹葉提取物不管是抗氧化活性還是對酪氨酸酶活性的影響都顯示出了很強的活性,其清除DP

3、PH自由基和ABTS自由基的IC50值分別為32.33μg/mL,5.69μg/mL;鐵還原能力即FRAP值為(585.00±1.43)μg/mL;抑制酪氨酸酶活性的IC50值為5.59mg/mL。
　　(2)鵝毛竹葉提取工藝優(yōu)化
　　提取物濃度為4mg/mL時,在單因素實驗的基礎(chǔ)上,以酪氨酸酶抑制率為指標(biāo),采用響應(yīng)面法對鵝毛竹葉提取物抑制酪氨酸酶活性物質(zhì)提取工藝條件進行優(yōu)化。得到的提取最佳工藝條件為乙醇濃度70％,料液比1

4、:16,提取溫度80℃,提取時間1h,在此工藝條件下酪氨酸酶的抑制率達到最大值45.35%。與理論預(yù)測值基本相符。
　　(3)篩選提取物抗氧化活性與抑制酪氨酸酶活性最高的部位
　　利用最佳提取工藝條件獲得鵝毛竹葉提取物,并用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進一步萃取,得到各極相的萃取物。采用DPPH法、ABTS法及鐵還原能力評價各級相的抗氧化活性,得到乙酸乙酯相對 DPPH自由基和 ABTS自由基的清除能力及鐵還原能力是最強的,其清

5、除DPPH自由基和ABTS自由基的IC50值分別為(28.74±0.56) ug/ml、(10.10±0.39)ug/ml,鐵還原能力即FRAP值為(3886.43±7.14)ug/ml;除石油醚相沒有酶抑制活性外,乙酸乙酯相、正丁醇相和水相對酪氨酸酶活性均有一定的抑制作用,其中乙酸乙酯相對酪氨酸酶活性的影響最大,其抑制酪氨酸酶活性的IC50值為3.29 mg/mL,其酶抑制類型為可逆的競爭性抑制,抑制常數(shù)為Ki=27.49 mg/mL

6、。
　　(4)有效部位成分的初步探索及其生物活性測定
　　采用HPLC外標(biāo)法對有效部位乙酸乙酯相中的成分進行分析,初步分析出,乙酸乙酯相中存在綠原酸、咖啡酸、異葒草苷、對香豆酸、山奈酚及苜蓿素成分。其中綠原酸、咖啡酸、異葒草苷及山奈酚具有清除 DPPH自由基的能力,其 IC50值依次為5.31μg/mL、6.72μg/mL、11.66μg/mL、7.29μg/mL;綠原酸、咖啡酸、異葒草苷、對香豆酸及苜蓿素具有清除 ABTS