光甘草定檢測(cè)、提取、純化及其抑制酪氨酸酶活性的研究.pdf

1、光甘草定是世界上最昂貴的天然祛斑美白成分，是世界上公認(rèn)的最安全的祛斑美白成分，因其還有多種生理活性而具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。然而由于其本身含量微少，導(dǎo)致其提取純化過(guò)程繁復(fù)且低效，加上目前國(guó)內(nèi)外對(duì)其含量檢測(cè)只停留在昂貴、費(fèi)時(shí)的高效液相色譜法上，所以該產(chǎn)品價(jià)格非常昂貴。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)以上問(wèn)題主要研究了光甘草定的定量測(cè)定方法，優(yōu)化了光甘草定的提取工藝，確定了大孔吸附樹(shù)脂法純化光甘草定的工藝條件，測(cè)定了光甘草定的抑制酪氨酸酶活性。
　　本研究主要

2、內(nèi)容包括：⑴利用香草醛在酸性條件下可與光甘草定反應(yīng)生成有顏色的復(fù)合物這一實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，對(duì)酸化香草醛法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，找到了適合于光甘草定含量測(cè)定的比色條件。結(jié)果表明：以H2SO4作為反應(yīng)的酸性介質(zhì)，比色條件為：空白：0.5mL甲醇＋2.5mL2％香草醛＋2.5mL30％硫酸；香草醛空白：0.5mL樣品甲醇溶液＋2.5mL甲醇＋2.5mL30％硫酸；樣品測(cè)定：0.5mL樣品甲醇溶液＋2.5mL2％香草醛＋2.5mL30％硫酸，20℃反應(yīng)20

3、min后測(cè)定A534；評(píng)價(jià)結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性好、回收率高，并且檢測(cè)靈敏度高、穩(wěn)定性好，是一種快速準(zhǔn)確的測(cè)定光甘草定含量的方法。⑵采用有機(jī)溶劑提取的傳統(tǒng)方法，以光甘草定提取率為指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)研究提取溫度、提取次數(shù)、提取時(shí)間、料液比、工業(yè)甲醇濃度以及甘草渣粒度對(duì)光甘草定得率的影響。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)確定出較優(yōu)因素范圍后，采用響應(yīng)面法優(yōu)化甘草渣中光甘草定提取工藝。結(jié)果表明：在提取時(shí)間64 min，提取溫度50.4℃，料液比1:38.5g/

4、ml,提取次數(shù)1次，工業(yè)甲醇濃度100%，甘草渣粒度40目的最優(yōu)提取條件下，光甘草定得率預(yù)測(cè)值為0.52%，驗(yàn)證值為0.51%。⑶研究比較了多種大孔吸附樹(shù)脂的靜態(tài)吸附特性，篩選出了適宜光甘草定純化的樹(shù)脂，并確定了固定床吸附和解吸的工藝參數(shù)。結(jié)果表明：滄州寶恩HPD-400、安徽三星 YPR-Ⅱ和安徽三星 X-5三種樹(shù)脂的吸附率和解析率較高。三種樹(shù)脂的吸附動(dòng)力學(xué)行為符合二級(jí)吸附速率方程，吸附等溫線可用 Freundlich等溫吸附方程描述

5、。在相同溫度下，光甘草定在滄州寶恩 HPD-400樹(shù)脂的吸附行為更容易實(shí)現(xiàn)，因此選擇滄州寶恩 HPD-400樹(shù)脂作為光甘草定純化的樹(shù)脂。光甘草定在HPD-400樹(shù)脂上的穿透曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可用Bohart-Adams模型方程擬合，擬合公式可用于近似指導(dǎo)給定操作條件下光甘草定穿透時(shí)間的計(jì)算。光甘草定提取液經(jīng)過(guò)HPD-400樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附分離的適宜上樣濃度為0.845mg·mL-1，上樣流速為3BV·h-1；洗脫溶劑為70%乙醇，洗脫流速為2BV