砂仁活性物質(zhì)對酪氨酸酶抑制作用機理的研究.pdf

1、酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是一種多亞基的含銅氧化還原酶，廣泛存在于自然界中，其異常表達可引起各種各樣的病變，如老年斑、雀斑、光照損傷、果蔬褐變及與人腦中的神經(jīng)黑色素形成及神經(jīng)退行性病變相關(guān)的帕金森病等。
　　 砂仁為歷代常用中藥，是四大南藥之一，在治療胃腸道疾病中應(yīng)用普遍，現(xiàn)代臨床還用于對婦產(chǎn)科疾病、心力衰竭和抗腫瘤等方面的醫(yī)療，而其作用于酪氨酸酶的研究鮮有報道。本論文以砂仁為研究對象，經(jīng)分級萃取得到五相萃取物，測定提

2、取物對酪氨酸酶單酚酶和二酚酶的抑制作用機理。檢測了砂仁提取物對DPPH自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除能力及總還原力，同時研究了提取物對細菌的抑制作用。以小鼠B16黑色素瘤細胞為研究對象，研究了提取的效應(yīng)物對細胞增殖率、酪氨酸酶活性、黑色素含量的影響，并對其活性成分進行分析鑒定。本文研究結(jié)果和內(nèi)容如下：
　　 (1)本文運用超聲提取，分級萃取，大孔樹脂AB-8及HPLC等分離純化手段，以酪氨酸酶抑制活性為指標，對砂仁提

3、取物活性成分進行了追蹤分離，最終通過比較分析推測有效成分可能含有槲皮苷和異槲皮苷。
　　 (2)對砂仁各提取物進行酪氨酸酶抑制活性實驗，結(jié)果表明各提取物對酪氨酸酶二酚酶呈現(xiàn)不同程度的抑制作用，部分提取物對單酚酶也有較強抑制活性。同時深入研究探討了效應(yīng)物對蘑菇酪氨酸酶二酚酶的抑制機理和抑制類型，測定了相關(guān)抑制常數(shù)。
　　 (3)選擇了砂仁各提取物作為效應(yīng)物，研究其清除DPPH自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基的能力，并測

4、定了各效應(yīng)物的總還原力。進一步驗證天然活性物質(zhì)與酪氨酸酶的結(jié)合方式，為確定天然活性物質(zhì)的作用機理奠定基礎(chǔ)。
　　 (4)研究了砂仁提取物對細菌的抑制效果，探討酪氨酸酶抑制劑與抗菌之間的聯(lián)系，為進一步揭示酪氨酸酶在細菌生長中的作用提供支持。
　　 (5)研究了砂仁中酪氨酸酶天然抑制劑對小鼠黑色素瘤B16細胞的藥效學(xué)效果，通過加藥后細胞增值率、酪氨酸酶活性和黑色素含量等指標的變化，確定篩選出的天然活性成分的毒性、抑制酶活力效